SA-IL-7融合蛋白的制备及其膀胱内灌注对小鼠表浅性膀胱癌的治疗效应

目的:制备链亲和素标记的白介素7(streptavidin-tagged interleukin-7,SA-IL-7)融合蛋白,评价其对小鼠表浅性膀胱癌治疗的效果。方法:构建pET24a-SA-IL-7重组质粒,制备SA-IL-7融合蛋白。流式细胞术检测SA-IL-7融合蛋白与生物素化膀胱癌细胞MB49的结合,胸腺细胞增殖法检测SA-IL-7融合蛋白促进胸腺细胞增殖的生物学活性。应用小鼠表浅性膀胱癌模型评价膀胱内灌注SA-IL-7的治疗效果,观察小鼠生存期,免疫组化法检测各组小鼠肿瘤浸润CD8+T细胞。结果:成功制备的SA-IL-7融合蛋白可锚定于生物素化的MB49细胞表面,结合率达(96.6±1.3)%;同时能够促进胸腺细胞的增殖。SA-IL-7融合蛋白能够锚定于小鼠生物素化的膀胱黏膜表面7 d以上,而未生物素化的膀胱黏膜在始终未检测到IL-7的存在。在小鼠表浅型膀胱癌模型中,MB49细胞接种后的第80天,IL-7灌注治疗组90%小鼠死亡,而SA-IL-7组60%小鼠存活且未出现肿瘤(P<0.05);且SA-IL-7灌注治疗组小鼠肿瘤组织中浸润CD8+T细胞明显增多(P<0.01)。SA-IL-7治愈的15只表浅型膀胱癌模型小鼠中,11只能够抵抗膀胱内MB49细胞的第二次接种,而对照组15只小鼠仅1只幸存(P<0.01)。结论:SA-IL-7融合蛋白膀胱内灌注能够产生抗肿瘤免疫应答和明显的治疗效果,有可能成为免疫治疗浅表性膀胱癌的新方法。

重组胰岛素原在毕赤酵母中高效分泌表达的研究

为了提高胰岛素在酵母的分泌表达效率,首先合成了胰岛素原基因,并在其序列的N端引入了一段引导肽,构建成p PICZα-A-Pro-INS重组分泌型表达载体。将表达载体线性化处理后电击转化毕赤酵母GSll5感受态细胞,筛选获得分泌型高表达工程菌株,重组蛋白的表达水平为300 mg/L,占分泌总蛋白的40%左右。该结果表达明引导肽的存在对于在毕赤酵母中高效表达胰岛素的基因至关重要。

链亲和素标记的白细胞介素4双功能融合蛋白锚定治疗小鼠浅表性膀胱癌

目的探讨链亲和素标记的白细胞介素4（IL-4-SA）双功能融合蛋白治疗小鼠浅表性膀胱癌的效果。方法制备IL-4-SA双功能融合蛋白，测定其体外生物学活性。建立小鼠浅表性膀胱癌模型，膀胱经生物素化后给予IL4-SA灌注治疗，观察小鼠生存期，并以链亲和素标记的绿色荧光蛋白（GFP—SA）＋IL-4和磷酸盐缓冲液（PBS）作为对照组。检测各组小鼠脾细胞的细胞毒性T淋巴细胞（CTL）杀伤活性和CD8＋肿瘤浸润淋巴细胞。结果IL4．SA能够锚定于生物素化的膀胱表面达5d以上。在MIM9细胞种植后的第80天，PBS组小鼠全部死亡，GFP-SA＋IL-4组小鼠存活2只，而IL4-SA组小鼠存活5只。在肿瘤特异性杀伤实验中，在效靶比为1：1、25：1、50：1时，PBS组小鼠的CTL杀伤率分别为（3．3±0．6）％、（7．3±0．6）％和（12．7±2．1）％，GFP．SA＋IL4组小鼠的CTL杀伤率分别为（4．3±0．6）％、（9．0±1．0）％和（14．3±1．5）％，而IL4-sA组小鼠的CTL杀伤率分别为（11．3±1．2）％、（22．7±1．5）％和（31．0±3．0）％，IL4-SA组与PBS组和GFP—SA＋IL-4组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。CD8＋淋巴细胞检测结果显示，PBS组和GFP．SA＋IL4组的肿瘤组织内仅有少量的CD8＋淋巴细胞浸润，而IL-4-SA组则有较多的CD8＋淋巴细胞浸润。结论IL4-SA锚定膀胱表面能够产生强烈、持久的免疫应答反应，有可能成为浅表性膀胱癌的一种新灌注治疗方法。