广州管圆线虫幼虫cDNA文库的构建及其表达模式与成虫表达模式的EST分析

从感染广州管圆线虫3周的大鼠脑部挑取幼虫,提取其总RNA ,运用“SMARTcDNA文库构建试剂盒”构建其cDNA文库。分别将成虫和幼虫cDNA文库中的噬菌体克隆转化成噬菌粒,用5′端测序引物进行测序。利用BLAST程序对获取的EST从核苷酸和氨基酸水平进行同源性搜索。结果显示:所建文库的初始滴度为2 19×10 .6 pfu mL ,经1次扩增后的滴度为1. 0×10 1 0 pfu mL ,插入子的平均长度为1. 2kb ,重组率为97 .3%。从成虫的cDNA文库中得到6 4个EST ,其中有意义的EST有5 4个,占82 . 8% ;无意义的EST有10个,占17. 2 %。6 4个成虫EST序列中,rRNA基因4 9个,占总EST数的76 6 %。从幼虫的cDNA文库中共得到10 6个EST ,其中有意义的EST有91个,占85 . 8% ;无意义的EST有15个,占14 . 2 %。10 6个幼虫EST序列中rRNA基因78个,占总EST数的73. 6 %。本研究首次成功构建了广州管圆线虫幼虫的cDNA文库,EST分析显示广州管圆线虫幼虫和成虫基因表达谱中rRNA基因均占大多数。

弓形虫感染大鼠动物模型的研究进展

对近年来弓形虫感染大鼠模型的研究进展进行了综述。阐述了弓形虫不同虫株对大鼠的感染性、不同品系大鼠对弓形虫的易感性和作用机理以及大鼠在弓形虫病发病机制、临床诊治及先天性弓形虫病研究等方面的应用。

驱避剂的研究进展

由节肢动物传播的虫媒病对世界的威胁,已关系到人类的生病率和死亡率高低。有统计报告世界上每30s就有一个人死于节肢动物叮咬引起的并发症,仅仅是疟疾每年的死亡人数就达300万。避免节肢动物叮咬最好的方法是做好个人防护,使用驱避剂是个人防护的有效措施之一,近些年来对驱避剂的研究得到了许多国家的重视,并取得了一定的进展。本文就驱避剂的研究及最新进展报告如下。

植物口服疫苗研究及其在寄生虫病防治中的应用前景展望

WHO提出研制价廉且可口服的疫苗新策略 ,植物疫苗以其独具的可 (饲 )食性而无疑极具开发潜能。植物反应器具备完整的真核细胞表达系统 ,可大规模生产 ,可实现多基因的联合转化 ,尚可实施人兽共患病中对人和动物的同步防治等。该文在阐述了近年来植物口服疫苗研究的现状及其主要存在问题与应对策略的同时 ,对其在寄生虫病防治研究中的前景进行了分析。

反向遗传学策略及其在寄生虫研究中的应用

由基因结构认识基因功能的科学称为反向遗传学。随着越来越多生物的基因组序列被阐明,研究基因功能的反向遗传学已成为生物学领域的热点。反向遗传学所运用的技术也在不断地发展与成熟,如基因敲除、反义核酸等均对基因功能鉴定起到一定的作用。尤其是近五、六年内兴起的RNA干扰技术,其作为一种简单有效的代替基因敲除的反向遗传学的研究工具,在后基因组时代寄生虫的大规模基因功能研究中,具有广阔的应用前景。此外,选择适合的模式生物研究反向遗传学技术,也是研究的一个重要方面。

白纹伊蚊中肠组织和C6/36细胞与登革病毒相互作用蛋白的筛选

目的筛选登革Ⅱ型病毒与白纹伊蚊中肠组织和C6/36细胞中的连接分子。方法富集纯化登革Ⅱ型病毒,用12%SDS-PAGE分析提取的C6/36细胞膜蛋白和白纹伊蚊中肠组织总蛋白,将分离胶上的蛋白转于硝酸纤维素膜(PVDF)上,应用病毒覆盖蛋白结合试验(VOPBA)方法筛选白纹伊蚊中肠组织和C6/36细胞中表达连接登革Ⅱ型病毒的分子。结果白纹伊蚊中肠组织总蛋白经12%SDS-PAGE分离后转膜,分别与纯化的病毒液和阴性对照液孵育,用抗登革病毒单克隆抗体检测,结果显示病毒孵育组在分子量30kDa的位置有特异性的条带出现,而阴性对照组无此条带;用同样的方法筛选C6/36细胞上表达蛋白,病毒孵育组在分子量30kDa和40kDa的位置出现特异条带,而阴性对照组无。结论 VOPBA结果显示分子量为30kDa的分子在中肠组织与C6/36细胞中都能表达,具有连接登革Ⅱ型病毒的作用,对其氨基酸序列的鉴定和功能分析工作正在进行中。

中华按蚊抗菌肽defensinA编码基因cDNA克隆与序列分析

目的克隆中华按蚊defensin编码基因,并对其序列进行分析。方法提取中华按蚊总RNA。据文献报道合成1对引物def1、def2,RT-PCR扩增中华按蚊defensin编码基因,克隆于T-载体,序列测定与分析。结果RT-PCR扩增中华按蚊cDNA获大约308 bp片段,测定目的片段序列,结果显示,克隆基因cDNA序列长度为308 bp,推导编码64个氨基酸,序列分析显示中华按蚊defensin编码基因与冈比亚按蚊defensin编码基因有高度同源性(95%)。分析结果显示,中华按蚊defensin编码基因为新基因,定名为中华按蚊defensinA。结论克隆出中华按蚊defensinA编码基因,为进一步研究该基因打下了基础。

转基因植物口服疫苗的免疫机制研究进展

植物作为新型的生物反应器正日益受到关注,转基因植物以其独有的可食(饲)性成为疫苗研究的热点之一。目前转基因植物口服疫苗的可行性已逐步得到证实,但相关的免疫机制尚在进一步的探索之中。实验证实植物细胞壁类似天然的“生物胶囊”,可在一定程度上保护表达在植物细胞内的疫苗抗原蛋白抵御消化道酶的作用。使疫苗抗原特异地定位表达于植物细胞的内质网、叶绿体等细胞器中,以及将抗原蛋白组装成病毒样颗粒,也均可增强其抗消化能力。适当选用免疫佐剂等可增强转基因植物疫苗免疫保护反应,选择合适的启动子等可提高目的基因在转基因植株中的表达量,这些均是增强转基因植物口服疫苗免疫保护反应、避免免疫耐受的可行策略。

艾迪注射液对氯化钴诱导的Hela细胞缺氧诱导因子-1蛋白稳定及转录活性的影响研究

目的研究抗癌中药复方艾迪注射液对缺氧诱导因子-1(HIF-1)蛋白稳定性及转录活性的影响。方法MTT法检测艾迪注射液对Hela细胞增殖的影响。构建缺氧诱导因子-1的荧光素酶报告基因Hypoxia-responsive element-luciferase reportor gene(HRE-LUC)利用双荧光素酶顺式报告系统,氯化钴模拟化学缺氧条件,检测不同浓度艾迪注射液对HRE-LUC相对荧光素酶值的影响。Western blot在蛋白质水平进一步验证在此条件下艾迪注射液对HIF-1α亚基蛋白稳定性的影响,RT-PCR进一步验证在此条件下艾迪注射液对HIF-1下游靶基因腺苷酸激酶3(AK3)转录水平的影响。结果艾迪注射液对Hela细胞增殖有明显的抑制作用。艾迪注射液200、300、400mL/L培养基组特异性地抑制缺氧条件下Hela细胞HRE-LUC相对荧光素酶值(P<0.05),且抑制作用随剂量增加而增强;Western blot显示艾迪注射液抑制氯化钴诱导的HIF-1α蛋白聚集,且抑制作用随剂量增加而增强;RT-PCR证实不同剂量的艾迪注射液均有抑制AK3基因转录的作用。结论艾迪注射液对Hela细胞的增殖具有明显的抑制作用,其抗癌机制可能与抑制HIF-1α亚基蛋白稳定性及降低其转录活性有关。