人GFP-AWP1融合基因载体的构建及其在293细胞中的表达

目的克隆、构建绿色荧光蛋白(GFP)-AWP1(associatedwithproteinkinaseCrelatedkinase1,AWP1)表达载体,观察AWP1在293细胞中表达和定位。方法采用逆转录PCR(RT-PCR)法从人ECV304内皮细胞中扩增AWP1cDNA编码区,并将其重组于GFP表达载体pEGFP-C2中。经酶切、序列鉴定分析后,将该重组质粒通过DOTAP脂质体介导,转染293细胞。荧光显微镜观察AWP1在细胞内的表达和分布。结果GFP-AWP1融合基因表达载体经酶切鉴定和测序分析确认构建成功,并在293细胞中获得了高效表达。荧光显微镜下,在不携带外源基因的空载体pEGFP-C2转染的对照组293细胞,绿色荧光均匀分布于整个细胞中;在重组质粒pEGFP-C2/AWP1转染的293细胞,绿色荧光弥散分布于细胞质内。结论成功构建GFP-AWP1融合基因表达载体并表达于293细胞胞质中。