寻常型银屑病患者体内半乳糖凝集素家族蛋白表达研究

目的:探讨寻常型银屑病(PV)患者体内半乳糖凝集素(Gal)家族蛋白表达情况。方法:采用ELISA法检测30例PV患者与30例正常对照者血清中Gal-1、Gal-3、Gal-7、Gal-9的水平;采用免疫组化检测15例PV患者皮损与10例正常皮肤中Gal-1、Gal-3、Gal-7、Gal-9的表达及细胞定位;以平均光密度值评价表达水平,比较其在PV患者与正常对照组中表达的差异。结果:与正常对照者相比,PV患者血清中Gal-1水平明显上调[(39.57±11.33) ng/mL比(31.93±7.98) ng/mL,t=3.02,P=0.004)],且与PASI评分呈正相关(r=0.37,P=0.049);皮损中Gal-1主要表达于真皮且表达明显上调(0.030±0.043比0.011±0.002,t=3.34,P=0.003);PV患者表皮中Gal-3表达下调(0.016±0.001比0.060±0.018,t=-2.85,P=0.009)、 Gal-7上调(0.090±0.011比0.049±0.009,t=2.58,P=0.017)、 Gal-9下调(0.011±0.002比0.049±0.007,t=-6.16,P<0.001)。结论:Gal家族成员Gal-1、Gal-3、Gal-7、Gal-9在PV患者血清中的水平及皮损局部的细胞定位与表达各不相同,提示其在PV中的功能也存在差异,有可能参与了PV的发病机理。

Fonsecaea monophora聚酮合酶基因的CRISPR-Cas9敲除载体的构建

目的改造pFC332质粒,简化实验流程,构建Fonsecaea monophora PKS1基因的CRISPR-Cas9敲除载体。方法设计引物PCR扩增pFC334质粒上的gRNA骨架,获得已经插入AarⅠ酶切位点的gRNA骨架片段后,使用PstI和MerI酶线性化pFC334载体,构建pFC334-AarⅠ载体,使用MreⅠ和BglⅡ酶对其和pFC332质粒进行双酶切,连接后获得pFC332-gRNA-AarⅠ载体,设计gRNA,最后将各片段插入到载体中。结果测序得到16533bp大小的改造后的pFC332-gRNA-AarⅠ质粒,构建了PKS1基因的CRISPR-Cas9敲除载体,通过PCR,酶切以及测序的方法确定敲除载体构建成功。结论成功构建Fonsecaea monophora聚酮合酶基因的CRISPR-Cas9敲除载体,为研究PKS1基因及DHN-黑素在Fonsecaea monophora的生物学功能奠定了良好的基础。

皮肤科领域单细胞转录组测序研究进展

单细胞RNA测序(scRNA-seq)是在单个细胞水平上对其含有的转录组信息进行测序分析,用于发现新的细胞亚型,揭示细胞异质性,监视疾病的动态发展过程,最终提高对组织、器官和生物复杂性的理解。目前scRNA-seq已广泛应用于肿瘤和胚胎发育等领域,在皮肤科领域的应用也陆续增多。本文将简要介绍scRNA-seq的技术流程,并重点阐述其在皮肤科领域的研究进展。

McCoy和Hela229细胞沙眼衣原体持续感染模型及omcB与Euo基因的表达

目的比较阿奇霉素诱导McCoy细胞与Hela229细胞建立的沙眼衣原体持续性感染模型及omcB和Euo基因表达情况。方法用相同浓度的沙眼衣原体分别感染McCoy和Hela229细胞,在感染22h后加入0.08μg/ml阿奇霉素,构建沙眼衣原体持续性感染模型;通过荧光显微镜观察细胞形态,反转录PCR(RT-PCR)检测omcB和Euo基因表达。结果 McCoy细胞和Hela229细胞内,未加阿奇霉素处理组,沙眼衣原体包涵体较大,加入阿奇霉素处理组,沙眼衣原体包涵体均较小。持续性感染时,Hela229细胞omcB基因的表达较急性感染下调0.138±0.042倍,差异有统计学意义(t=35.120,P<0.001);McCoy和Hela229细胞Euo基因的表达较急性感染分别上调2.445±0.460倍和3.317±0.556倍,差异均有统计学意义(t=5.441,P=0.006;t=7.210,P=0.002);在McCoy和Hela229细胞持续感染时,Euo/omcB比值较急性感染分别上升2.100±0.050倍和24.820±2.630倍,差异均有统计学意义(t=32.201,11.240;均P<0.001)。结论在阿奇霉素诱导下,Hela229比McCoy细胞更容易建立沙眼衣原体持续性感染模型。