高迁移率族蛋白1诱导内皮细胞释放细胞因子的作用及其与脂多糖对白细胞介素6释放的协同效应

目的 观察高迁移率族蛋白1（HMGB1）对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）释放细胞因子的影响及其对脂多糖（LPS）诱导细胞因子白细胞介素6（IL-6）表达的作用。方法 用LiquiChip液相蛋白芯片系统检测重组HMGB1蛋白（15ng／ml）诱导HUVEC 11种细胞因子／趋化因子的水平变化；检测不同浓度HMGB1（0～75ng／ml）刺激后不同时间点（0、1、3、6、12和24h）HUVEC分泌IL-6的水平以及HMGB1（15ng／ml）与LPS（10ng／ml）共同刺激对HUVEC分泌IL-6的影响。结果 HMGB1刺激后HUVEC分泌粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、干扰素γ（IFN-γ）、IL-6、IL-8和单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）的水平明显升高（均P〈0．01），分别是对照（未加刺激）的5．7、4．2、27．8、12．8和5．4倍；HMGB1蛋白以时间和剂量依赖方式诱导IL-6的分泌，在刺激后3～6h，IL-6水平开始增加，在6h时IL-6由对照的32ps／ml±21pg／ml增加到75pg／ml±22pg／ml（P〈0．01），12h（453pg／ml±78pg／ml）～24h（901pg／ml±184pg／ml）持续升高（P〈0．01）；随着HMGB1浓度的增加，IL-6的水平也明显增加，当HMGB1浓度为3、15、75ng／ml时，IL-6分别是155ps／ml±33pg／ml、901pg／ml±184pg／ml、1508pg／ml±378pg／ml，与基础值32pg／ml±21pg／ml相比，差异有统计学意义（P〈0．01）。分别用LPS（10ng／ml）和HMGB1（15ng／ml）单独刺激HUVEC时，IL-6的含量从基础的32pg／ml±22pg／ml分别增加至289pg／ml±42pg／ml和901pg／ml±184pg／ml（均P〈0．0l）；如果用二者共同刺激HUVEC，IL-6的生成量大大增加（2361pg／ml±299pg／ml），二者存在协同作用（F=69．405，P〈0．01）。结论 HMGB1蛋白可诱导HUVEC释放多种炎性细胞因子；HMGB1诱导IL-6的上调具有时效性和量效性关系，并可协同LPS刺激HUVEC释放IL-6，在脓毒症的发生和发展中起重要作用。