慢病毒介导小干扰RNA沉默人结肠癌HT-29细胞芳香烃受体核转位蛋白基因的研究

目的获取有效沉默人结肠癌HT29细胞的芳香烃受体核转位蛋白基因（ARNT）的短发卡RNA（shRNA）重组慢病毒。方法构建4组表达ARNT—shRNA的慢病毒载体和1组无效干扰慢病毒载体并测序鉴定。用合成的5组重组慢病毒转染HT29细胞，通过克隆稀释扩大培养获取5组稳定转染细胞株，实时荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）和Westernblot检测沉默效率。结果成功构建4组表达ARNT．shRNA的重组慢病毒，其中1组（LV—ARNT—RNAi一3）转染HT29细胞后能有效沉默ARNT基因，mRNA相对表达下降70％（P〈0．05），蛋白水平表达下降60％（P〈0．05）。结论重组慢病毒LV—ARNT—RNAi一3可以下调人结肠癌HT29细胞ARNT基因的表达。