条件性胰岛β细胞DEPTOR基因敲除小鼠构建及鉴定

目的构建并鉴定条件性胰岛β细胞DEPTOR基因敲除小鼠,为研究DEPTOR基因在糖尿病发生机制的研究提供动物模型。方法将引进的条件性胰岛β细胞特异性表达Cre重组酶小鼠与DEPTOR^(loxp/loxp)小鼠进行杂交繁殖,并对子代进行基因型鉴定,获得基因型为DEPTOR^(loxp/-)Cre^(+/-)的小鼠;再让DEPTOR^(loxp/-)Cre^(+/-)的小鼠与DEPTOR^(loxp/loxp)小鼠杂交获得DEPTOR^(loxp/loxp)Cre^(+/-)小鼠;基因型为DEPTOR^(loxp/loxp)Cre^(+/-)的小鼠即为本实验所需要构建模型小鼠。3周龄时通过PCR法鉴定小鼠的基因型;8周龄时腹腔注射他莫昔芬诱导Cre重组酶表达后,免疫荧光验证DEPTOR基因敲除效果。结果从引进这两种小鼠开始繁殖10个月,共获得基因型为DEPTOR^(loxp/loxp)Cre^(+/-)的小鼠10只,PCR结果证实小鼠的基因型符合DEPTOR^(loxp/loxp)Cre^(+/-)。免疫荧光结果提示敲除效果明显。结论利用Cre/loxp系统,本研究成功构建并鉴定了条件性胰岛β细胞DEPTOR基因敲除小鼠,为在动物水平研究DEPTOR基因在糖尿病发病机制中的作用提供研究平台。

类风湿关节炎患者血清趋化因子配体20与疾病严重程度的相关性研究

目的:探讨类风湿性关节炎患者(RA)血清趋化因子配体20(CCL20)水平与疾病严重程度的相关性。方法:采用横断面研究,选取2018年7月至2019年7月南方医科大学第三附属医院风湿免疫科门诊及住院诊断的RA患者105 例,对照组是同期年龄、性别相匹配的在同院进行体检的健康人90名。根据Steinbrocker分级,将RA患者分成Steinbrocker 2级组(35例)、Steinbrocker 3级组(38例)、Steinbrocker 4级组(32例);根据 DAS28 评分,将RA患者分成缓解期组(DAS<2.6)(39例)、轻度活动期组(DAS28 2.6~3.2)(25例)、中度活动期组(DAS28 3.2~5.1)(20例)及重度活动期组(DAS28≥5.1)(21例)。采用ELISA法检测CCL20、红细胞沉降率(ESR)和C反应蛋白(CRP)。比较各组CCL20水平,分析CCL20与其他指标的相关性,并做CCL20诊断 RA 的受试者工作(ROC)曲线。结果:RA 患者组与对照组相比,血清CCL20水平显著升高,差异有统计学意义[(48.1±16.7)pg/ml vs (17.6±5.9)pg/ml, t=19.39, P<0.001]。RA患者Steinbrocker 4级组血清CCL20显著高于Steinbrocker 3级组[(59.5±10.1)pg/ml vs (47.4±17.5)pg/ml, t=3.472, P<0.001],Steinbrocker 3级组血清CCL20水平显著高于Steinbrocker 2级组[(47.4±17.5)pg/ml vs (38.4±14.6)pg/ml, t=2.370, P=0.021],Steinbrocker 2级组CCL20水平显著高于对照组[(38.4±14.6)pg/ml vs (17.6±5.9)pg/ml, t=7.738, P<0.001]。此外,血清CCL20水平与Steinbrocker评分具有显著正相关性( r=0.505, P<0.001);活动期RA患者CCL20水平显著高于缓解期RA患者[(57.2±13.2)pg/ml vs (32.7±8.9)pg/ml, t=10.31, P<0.001]。重度活动度组血清CCL20水平显著高于中度活动度组[(60.6±10.9)pg/ml vs (51.7±16.2)pg/ml, t=0.212, P=0.040],中度活动度组血清CCL20水平显著高于轻度活动度组[(51.7±16.2)pg/ml vs (40.5±18.6)pg/ml, t=0.217, P=0.037]。血清CCL20水平与DAS28评分具有显著正相关性( r=0.451, P<0.001)。血清CCL20水平与血清CRP具有正相关性( r=0.332, P<0.001)。根据ROC曲线,Steinbrocker 2级组向Steinbrocker 3级进展,特异度为0.53,敏感度为0.74,曲线下面积为0.659;Steinbrocker 3级组向Steinbrocker 4级进展,敏感度为0.78,特异度为0.66,曲线下面积为0.734;疾病活动度轻度期 vs疾病活动度中度期:敏感度为0.64,特异度为0.70,曲线下面积为0.699;疾病活动度中度期 vs疾病活动度重度期:敏感度为0.57,特异度为0.68,曲线下面积为0.678。 结论:RA患者血清CCL20水平显著升高并与疾病严重程度呈正相关,可能是一种监测和评价RA疾病进展的生物标志物。