在高脂条件下足细胞特异性PTEN敲进对肾脏有保护作用

目的观察在高脂饮食（HFD）条件下体内足细胞特异性过表达PTEN对小鼠肾脏的作用，并探讨体外氧化低密度脂蛋白（OX—LDL）刺激环境中足细胞内PTEN调控清道夫受体A（SR—A）介导的脂质摄取的机制。方法构建足细胞特异性PTEN敲进（PPKI）转基因小鼠，HFD诱导转基因小鼠肾损伤。小鼠分为正常饮食（ND）＋对照（Ctrl）组、ND＋PPKI组、HFD＋Ctrl组、HFD＋PPKI组。于饮食干预后第24周，检测4组小鼠临床生化指标，包括血肌酐、尿白蛋白排泄（尿白蛋白与肌酐比）等；油红O染色和肾皮质胆固醇定量观察肾脂质积聚情况；PAS染色和电镜评估肾小球硬化情况。体外OX．LDL刺激诱导足细胞损伤。Western印迹检测siRNA沉默YAP表达（si—YAP）后OX—LDL诱导足细胞SR—A蛋白表达的变化，及在siRNA沉默PTEN表达（si—PTEN）、PTEN抑制剂（Bpv—PTEN）、腺病毒过表达PTEN（ad—PTEN）的作用下OX—LDL诱导足细胞YAP磷酸化的变化。结果与ND＋Ctrl组相比，HFD＋Ctrl组小鼠的血肌酐、尿白蛋白排泄水平上升，足细胞SR—A表达及肾内脂质含量明显增加，系膜基质增生，足突融合增加及基底膜增厚（均P〈0．05）；而与HFD＋Ctrl组相比，HFD＋PPKI组小鼠上述肾损伤指标均减轻（均P〈0．05）。体外OX．LDL刺激能上调足细胞SR．A表达，与正常对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）；敲除YAP可使ox-LDL诱导的SR—A表达下降，si—YAP＋ox—LDL组SR—A表达低于ox—LDL组（P〈0．05）。在ox—LDL刺激下足细胞内磷酸化（p）-YAP表达增加，与正常对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）；上调PTEN的表达可抑制ox—LDL诱导的p-YAP表达上调，ad—PTEN＋ox—LDL组p-YAP表达低于ox—LDL组（P〈0．05）；而敲除PTEN或抑制PTEN磷酸酶活性均能进一步上调OX—LDL诱导的p-YAP的表达，si-PTEN＋ox-LDL组和Bpv—PTEN＋OX—LDL组p-YAP表达均高于OX—LDL组（均P〈0．05）。结论足细胞特异性过表达PTEN对脂质。肾损伤有保护作用，且PTEN可能通过使p-YAP去磷酸化进而抑制sR—A介导的脂质摄取缓解OX—LDL诱导的足细胞损伤。