胚胎时期小鼠小肠的组织发生

目的观察小鼠胚胎各个时期小肠组织的形态结构及杯状细胞在小肠内的分布规律，为小鼠小肠的组织发生提供形态学依据。方法采用HE染色和PAS染色，对小鼠胚胎第13．5天（E13．5d）至出生后第1天（Pld）胚胎的石蜡切片染色并行光学显微镜观察。结果（1）小鼠肠壁于E13．5d已分化出现黏膜层、黏膜下层、肌层及浆膜。（2）肠绒毛于E15．5d分化形成，杯状细胞于E16．5d逐渐发育分化出现，肠腺于E18．5~Pld发育分化形成，此时小肠基本结构形成。（3）杯状细胞主要分布于小肠绒毛上皮，其中以回肠末端最多，回肠、空肠、十二指肠顺次递减（P〈0．05）。杯状细胞数量随胎龄逐渐增加而逐渐增多，于P1d最多（P〈0．05）。结论小肠上皮分化于E15．5d至E17．5d最为迅速，胚胎时期小肠基本结构形成，其吸收消化功能基本建立完成。

四种固定液对肾上腺组织冰冻切片固定效果的比较

目的以肾上腺组织为例观察比较丙酮、4%多聚甲醛、AAF和95%乙醇四种固定液的固定效果,为临床做出更好的快速冰冻切片,及时、准确的做出病理诊断提供实验基础。方法取人正常肾上腺组织,冰冻切片后分别用四种固定液进行固定,然后行HE染色,观察各组的组织结构、细胞核染色、细胞质染色和核质对比度情况。结果经冷丙酮固定的肾上腺组织切片,镜下组织结构清晰,高倍镜下观察:细胞核形态清晰完整,核染色和胞质染色清晰对比度好;经4%多聚甲醛固定的切片,镜下组织结构不清,细胞核形态较清晰,核染色和胞质染色对比度差;经AAF液固定的组织切片,镜下组织结构尚清晰,细胞核部分溶解,核染色均一,胞质染色较清晰;经95%乙醇固定的组织,组织结构尚清晰,核溶解普遍,胞质染色不清晰。结论四种固定液都可用于固定肾上腺组织及其它细胞成分较多的病理肿瘤组织,但冷丙酮效果最好。

不同潮气量机械通气对大鼠支气管和肺组织细胞凋亡的影响

目的研究不同潮气量机械通气对大鼠支气管和肺组织细胞凋亡的影响,初步探讨细胞凋亡在机械通气所致肺损伤中的作用机制及其意义。方法将30只健康雄性SD大鼠随机分成A、B、C3组,气管切开、插管后,分别给予不同潮气量(VT)机械通气4h(A组:VT=10ml/kg;B组:VT=20ml/kg;C组:VT=40ml/kg),采用光镜和电镜观察3组大鼠肺组织的病理和超微结构改变,用湿干重比值来比较肺水肿的程度,用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的末端标记法检测损伤的肺组织中细胞凋亡的发生程度,用免疫组织化学技术检测肺组织caspase-3酶的表达及组织分布。结果依次给予A、B、C3组以小、中、大3种不同的潮气量机械通气后,3组动物大体和病理改变依次加重,肺湿干重比值依次增高,支气管和肺组织细胞凋亡明显增加(P<0.01);在细胞凋亡执行阶段起中心作用的caspase-3酶在肺泡上皮细胞、血管内皮细胞的胞浆和核中的表达也明显增强,尤其以在支气管上皮caspase-3酶的表达增强更为显著。结论给予3组动物3种不同潮气量机械通气后,动物病理改变和细胞凋亡数量及凋亡效应酶caspase-3的变化趋势基本一致,推测细胞凋亡在大潮气量机械通气引起的肺损伤中起重要作用。

鸡羽根管作为组织工程支架材料的初步研究

目的了解鸡羽根的结构特点,观察其在活体组织内的降解情况及其对周围组织的影响,为其作为组织工程备选支架材料提供依据。方法健康鸡羽根,采用序贯的、不同程度(轻、中、重)理化处理程序,得到3种鸡羽根角蛋白(CCK-I、CCK-II、CCK-III),光学显微镜/扫描电镜观察其形态结构。大鼠背部肌组织内植入鸡羽根角蛋白片(实验组)和未处理鸡羽根片(对照组),以及坐骨神经束间植入鸡羽根角蛋白丝(实验组)和未处理羽根丝(对照组),于不同时间点取材,观察其降解情况和组织相容性。结果(1)光镜:鸡羽根管壁从内到外依次为4个致密层:嗜碱性均质状粗线,3￣5层的嗜酸性角质层,60￣100层含大量色素颗粒的环行角蛋白束和10￣20层含少量色素颗粒的角蛋白束。扫描电镜:未处理的鸡羽根结构致密,管壁平整,无孔洞;处理后结构较疏松,可见大小、深浅不等的孔洞。(2)肌组织内植入:第8周材料呈细丝状或散在细颗粒状,部分被降解吸收,仍有少量炎性细胞,可见多核巨细胞;第12周材料降解为细小碎片。对照组各时间段材料结构完整。(3)神经束间植入:引起的组织反应与细胞类型同肌组织内植入组,神经组织无变性、坏死。结论未处理的鸡羽根由多层致密的角蛋白束构成,含色素颗粒和少量基质。处理后表面出现许多孔洞,结构疏松,且体内可降解,其降解产物不引起机体组织的变性、坏死。鸡羽根有可能成为组织工程化器官或组织构建的备用支架材料。

大鼠乳腺胚胎期和出生早期发育的形态观察

哺乳动物的乳腺是一个很特殊的器官,是雌性动物出生后唯一可以多次重复再生的器官.雌性小鼠出生时,乳腺只有乳头及与乳头相连接的简单导管结构.从出生到性成熟,小鼠乳腺一直处于导管伸长的阶段.怀孕开始后,随着胎儿的发育和分娩,大部分的乳腺结构发育才完成;哺乳期结束后,乳腺开始退化并恢复到怀孕前的状态.就这样,怀孕开始,乳腺生长发育形成腺泡和腺小叶等分泌性功能结构,哺乳结束,

人发角蛋白-胶原海绵-聚甲基丙烯酸羟乙酯复合生物敷料对大鼠烧伤创面修复作用的实验研究

目的以人发角蛋白-胶原海绵为敷料内层,复合包裹药物虎杖的聚甲基丙烯酸羟乙酯载体,制备一种双层复合生物材料,研究其对烧伤创面的促愈合作用,探讨将其作为烧伤敷料的可行性。方法(1)将在体内具有慢(Z)、中(B)、快(F)三种吸收速度的人发角蛋白组分材料编织成网孔为1mm×1mm的网格,与从牛跟腱中抽提I型胶原溶液混合后放入模具,经真空冷冻干燥后制成海绵状膜(作复合内层敷料),扫描电镜观察其结构。(2)用聚合法制备聚甲基丙烯酸羟乙酯,再与药物虎杖一同成膜,制备药物缓释载体膜(作复合外层敷料),紫外光谱仪测定其释药度。(3)用SD大鼠制备深Ⅱ°烧伤动物模型,并于烧伤后2～5d内清除坏死组织,保留部分变性真皮组织。清创后将用与创面相同大小的人发角蛋白-胶原海绵-聚甲基丙烯酸羟乙酯复合敷料覆盖创面,已用于临床的戊二醛猪皮作为阳性对照组。术后以创面完全上皮化为标准,记录创面愈合时间并分别计算第7、14、21天愈合率。(4)分别于覆敷料后1、2、4、6、8周切取整个创面及其周围组织(每组每个时间点取6个标本),行光学显微镜观察和免疫组织化学染色观察,作3组的愈合时间及第7、14、21天的愈合率比较。结果胶原海绵膜为孔径为50～300μm的三维立体状结构。经测定在0～48h内药物虎杖从聚甲基丙烯酸羟乙酯膜内不断释出。深Ⅱ°烧伤治疗实验结果:实验组创面覆盖后渗出明显减少且保持一定湿度,而对照组创面较干燥;实验组及阳性对照组的创面愈合时间较阴性对照组提前;创面在第7、14、21天的愈合率均较阴性对照组高,且实验组在第14天的愈合率较阳性对照组高。结论人发角蛋白-胶原海绵-聚甲基丙烯酸羟乙酯/虎杖复合生物敷料可促进深Ⅱo烧伤实验大鼠创面的愈合,起到在体内构建组织工程化皮肤的目的。通过控制合成工艺,聚甲基丙烯酸羟乙酯膜作为药物缓释载体是可行的。

C57BL/6小鼠皮肤毛囊发育的实验研究

目的探讨胎鼠,乳鼠和成鼠毛囊发育的规律。方法石蜡和冰冻超薄切片,采用HE染色,AP活性染色,油红O染色,凋亡细胞鉴定等方法观察不同时期C57BL/6小鼠毛囊的发育情况。结果胚胎发育第15.5d(E15.5)开始出现毛囊,至E18.5胎鼠背部皮肤逐渐增厚,毛囊逐渐增多。乳鼠出生第1d毛囊大部分处于第4阶段之前,毛囊数量继续增加,至出生第4d皮肤基底层未见新生的毛囊,此时毛囊数量维持不变,出生第9d毛囊达到第8阶段。成鼠脱毛后第9d约有95%的毛囊进入生长Ⅳ期,第17d约有63.3%的毛囊进入退化期,第22d约有85%的毛囊处于退化期。结论小鼠毛囊的早期发育起始于E15.5,从E17.5到出生后3d毛囊数量呈快速增加趋势,因此,这一时期可以用于探讨毛囊再生机制等相关研究。

刺蒺藜对小鼠毛囊黑素细胞刺激素表达的影响

目的观察刺蒺藜水提物对C57BL/6J小鼠毛囊黑素细胞刺激素表达的影响,探讨刺蒺藜在毛囊休眠期黑素细胞活化、增殖及移行至表皮过程中的作用。方法选择在离体实验中对酪氨酸酶有激活作用、对黑素细胞有增殖作用及在临床应用中对白癜风有治疗作用的中药刺蒺藜,用SPF级C57BL/6J小鼠为实验动物,采用免疫组织化学技术观察高剂量(相当于成人1g/(kg·d)刺蒺藜水提物灌服后小鼠毛囊黑素细胞刺激素水平的变化,并用χ2检验进行统计学分析。结果黑素细胞刺激素在试验组小鼠毛囊细胞中阳性表达率为75.00%,在对照组小鼠毛囊细胞中阳性表达率为18.75%,两者比较有显著性差异(P<0.01)。结论高剂量刺蒺藜水提物可以提高小鼠毛囊黑素细胞刺激素的表达水平,并可能通过上调毛囊黑素细胞刺激素表达这一途径来活化酪氨酸酶、促进毛囊休眠期黑素细胞的增殖、移行及黑素合成。

白藜芦醇通过影响线粒体膜电位诱导HepG2细胞凋亡

目的研究白藜芦醇诱导HepG2细胞凋亡的机制,探讨白藜芦醇诱导HepG2细胞凋亡过程中线粒体膜电位的变化。方法采用MTT法测定白藜芦醇对HepG2细胞的生长抑制作用,通过荧光染色及流式细胞术检测细胞凋亡,电子显微镜观察细胞超微结构的变化,用Rhodamine123和TMRE标记细胞线粒体膜电位(ΔΨ),并分别通过流式细胞仪和共聚焦激光扫描显微镜检测。结果低浓度白藜芦醇(≤25 μmol/L)对HepG2细胞的生长抑制作用不显著,而高浓度白藜芦醇(>25μmol/L)显著地抑制HepGZ细胞的生长,且呈时间和浓度的依赖性(F=18．532,P<0．05);流式细胞术分析显示,白藜芦醇能显著诱导HepG2细胞凋亡,且呈浓度依赖性(P<0．05);白藜芦醇能降低HepG2细胞线粒体膜电位。结论白藜芦醇抑制HepG2细胞增殖,并诱导细胞凋亡,白藜芦醇使HepG2细胞线粒体膜电位去极化,提示线粒体膜电位去极化在白藜芦醇诱导细胞凋亡的过程中起作用。

Nestin转基因小鼠模型的建立及nestin基因在器官中的表达

目的构建人nestin基因表达载体,制备nestin过表达转基因小鼠。方法以人神经胶质瘤细胞株U251的cDNA为模板,分3段扩增出nestin基因cDNA全序列,并将其克隆入含有强启动子ROSA26的pBROAD3载体,酶切鉴定、测序,除去原核序列,纯化。显微原核注射建立转基因小鼠。PCR验证nestin基因整合,确定建立首建者。将阳性鼠传代。Western blot方法检测F3代转基因小鼠与野生型小鼠主要器官(心、肺、脑、肾)的nestin表达。结果测序结果证明成功构建了受ROSA26启动子调控的nestin转基因载体。出生34只小鼠,PCR检测证实存在首建者2只。Western blot方法证实,与野生型小鼠相比,F3代转基因小鼠脑、肺组织存在较高水平nestin表达。结论首次成功建立nestin过表达转基因小鼠,外源基因可遗传到子代并在脑和肺组织中稳定表达,为深入研究nestin在肿瘤转移、细胞"干性"的维持和细胞的分化等功能提供了良好的实验动物模型。

白藜芦醇抑制HepG2细胞生长和对细胞间隙连接通讯的影响

目的研究白藜芦醇对人肝癌细胞HepG2的生长抑制作用以及对细胞间隙连接通讯(GJIC)的影响。方法利用MTT法观察白藜芦醇对HepG2细胞的生长抑制作用,流式细胞仪检测细胞周期的时相分布,使用荧光探针5'-CFDA/AM标记细胞,采用荧光漂白后重恢复技术(FRAP)和共聚焦显微镜技术观察白藜芦醇对HepG2细胞间隙连接通讯的影响。结果不同浓度的白藜芦醇处理细胞不同时间后,HepG2细胞的生长增殖明显受到抑制,抑制率最高达92.1%,各处理组间比较均有显著性差异(F=18.532,P<0.05);细胞周期分析显示,白藜芦醇能诱导HepG2细胞在S期停滞,抑制细胞DNA的合成并可诱导细胞凋亡;另外,白藜芦醇有恢复HepG2细胞间隙连接通讯的功能,且随浓度增加而增加。结论白藜芦醇可抑制HepG2细胞增殖,使细胞停滞于S期,并能诱导细胞凋亡;白藜芦醇还有恢复HepG2细胞间隙连接通讯功能的作用,提示此作用可能是白藜芦醇抑制HepG2细胞增殖和抗肿瘤作用的机制之一。

睾丸内注射和体内电穿孔法建立转基因小鼠的实验研究

目的探讨在体睾丸生精小管注射合并体内电穿孔建立转基因小鼠的可行性。方法将两种不同处理的转染液分别注射到4组SPF级雄性昆明小鼠睾丸生精小管内,然后对同一种转染液注射的两组动物中的一组进行体内电穿孔,另一组则不进行体内电穿孔;2周后各组SPF级雄性昆明小鼠分别与超排处理的SPF级雌性昆明小鼠合笼交配,最后对各组新生仔鼠进行PCR-Southern检测。结果PCR检测,四组之间存在显著差异(P<0.01),并且以A组最高(45%);Southernblotting检测,4组之间差异不显著(P>0.05),但A组的整合效率(25%)仍高于其他3组。结论运用在体睾丸生精小管内注射合并体内电穿孔技术可以显著地提高外源基因的转染效率,该方法是否可广泛用于生产转基因动物还有待于进一步深入研究。

卵胞质移植——问题和展望(英文)

人类卵细胞间的胞质转移最近作为人类辅助生殖生物技术的手段并成为研究热点。许多研究表明线粒体对卵母细胞的受精和胚胎发育有显著影响。但是, 卵胞质转移伴随着DNA异质即线粒体的异质性。本文对国内外近年来卵胞质转移的研究进展进行综述, 并结合克隆技术对其进一步的发展提出自己的见解—逆克隆技术。

中晚期孕期束缚应激对子代下丘脑多巴胺能神经元发育的影响

目的研究中晚期孕期束缚应激对子代下丘脑多巴胺能神经元发育的影响。方法使用怀孕SD大鼠，实验组在孕期第15～21d进行束缚应激，对照组则不受任何干扰。子代大鼠出生的当天为出生后的第0天。在子代大鼠出生后的第1天（P1），第7天（P7）和第30天（P30），分别测子代大鼠的体重，通过免疫组织化学染色和Western Blotting，观察和比较下丘脑内合成多巴胺的关键酶酪氨酸羟化酶（TH）染色像素密度及TH蛋白水平变化。结果与正常对照组相比，中晚期孕期束缚应激子代大鼠在P1体重较低，下丘脑TH染色像素密度和TH蛋白水平上调，这种异常在P7和P30消失。结论孕期府激使子代下丘脑多巴胺神经元早期发育异常，可能是造成子代神经系统行为学异常的原因之一。

新生血管可视化转基因小鼠的建立

目的建立新生血管的内皮中有绿色荧光蛋白(GFP)表达的转基因动物。方法构建含巢蛋白第二内含子和GFP的载体nestin-hsp68-gfp,转入U251细胞,验证其在真核细胞中的表达。然后用显微注射的方法,建立转基因动物。小鼠出生后,剪尾提基因组,用PCR初筛,然后对初筛阳性的小鼠检测GFP的表达。结果出生13只小鼠,初筛2只阳性。能检测到GFP在出生后和胚胎小鼠中有表达。结论成功制作标记新生血管的转基因小鼠。

Sca-1,CD24和Muc1在雌性大鼠静止期乳腺中的表达

目的研究干细胞抗原(Sca-1),CD24和Muc1在静止期乳腺中的表达。方法用Western免疫印迹法检测Sca-1和CD24在6周龄和9周龄大鼠乳腺中的含量变化,制备6周龄、9周龄SD雌性大鼠乳腺标本,切片(4μm),运用免疫组化酶标和免疫组化荧光法对乳腺中Sca-1,CD24,Muc1进行标记。结果Sca-1,CD24在6周龄的大鼠乳腺中的含量略低于9周龄大鼠;Sca-1在乳腺叶间导管、分支导管及腺泡周围表达;CD24在分支导管、乳脂垫及腺泡周围中表达;Muc1在分支导管和叶间导管中表达。结论Sca-1阳性细胞可能代表一类乳腺祖细胞,CD24阳性细胞代表一类乳腺干细胞,而Muc1阳性细胞代表成熟腺上皮细胞。本实验为上述细胞的鉴定提供了一些形态学证据,但需要细胞移植实验进一步实证。

茶多酚预防慢性酒精中毒对精子损伤的作用及机制研究

目的探讨茶多酚预防慢性酒精中毒对精子损伤的作用及其可能机制。方法 40只雄性小鼠随机分为4组:酒精损伤组(CA组)、茶多酚低剂量组(TP-L组)及茶多酚高剂量组(TP-H组)每天先喂服酒精,8 h后再分别喂服纯水、或浓度为1%或2%的茶多酚悬液。正常对照组(NC组)以同样方式和剂量每天2次喂服纯水。90 d后取材制备精子悬液用于精子密度、精子活动率及畸形率的检测。同时,取睾丸组织行免疫组织化学检测Bcl-2和Bax的表达。结果与NC组比较,CA组的精子密度和精子活动率明显下降,精子畸形率明显增加。相对于CA组,TP-L组及TP-H组精子密度和精子活动率增高,精子畸形率降低,其中TP-H组的效果比TP-L组更显著。CA组睾丸组织中Bcl-2的阳性细胞比NC组显著减少,Bax的阳性率却明显升高。喂服茶多酚却能明显逆转由酒精导致的上述变化。结论茶多酚能预防酒精对精子的损伤,这可能与精子发生过程Bcl-2及Bax的表达变化有关。

Shh对发育中小鼠视觉传导通路的影响(英文)

目的探察Shh对E13-E15小鼠胚胎中视觉传导通路发育的影响。方法E13至E15小鼠胚胎的眼至视束部分制备成脑厚片,置于含10%的小牛血清的DMEM/F12的培养液中,在37℃恒温滚动培养箱中培养5h。实验组中将Shh抗体加入培养液中。培养结束后,将脑厚片以4%多聚甲醛固定,将DiI颗粒置于视盘。7d后,在手术显微镜下,暴露被标记的视神经纤维,在激光扫描共聚焦纤维镜下观察。结果用Shh抗体阻抑Shh的功能,可引起E13跨越中线的视神经纤维减少以及E15投射至同侧的视束的神经纤维的增多。结论在视交叉形成的早期,Shh引导视神经纤维跨越中线。在视交叉形成的后期,Shh引导视神经转弯。

胎肝干细胞的分离、培养与鉴定

目的体外扩增培养大鼠胎肝干细胞,研究其形态、生物学特性及表面标志物,探讨胎肝干细胞的性质。方法分离培养胎龄12-16d的胎肝细胞,SABC法检测原代、传代后及细胞克隆中的肝干细胞特异表面标志物OV-6、CK-19及nestin的表达。结果原代、传代培养的胎肝细胞部分表达OV-6、CK-19及nestin;培养3d开始出现小细胞团,1个月即形成肉眼可见的细胞集落,5-7d传代一次;细胞克隆几乎全部为干细胞标志阳性细胞。结论胎肝干细胞可通过克隆筛选法进行体外扩增,胎肝内存在nestin阳性干细胞,可能是一种更为原始的干细胞,在胚胎发育中起重要作用。

心血管系统学科整合教学模式初探

传统的以学科为中心的教学模式与现阶段各大医学院校广泛试行的PBL教学法相比,各有其优缺点。南方医科大学和中山大学中山医学院合作,在传统教学模式的基础上,吸收借鉴PBL教学法的部分特色,在心血管领域开展学科整合教学模式的尝试与探索。