药学本科抗病毒药物和分子病毒学双语教学探索和思考

抗病毒药物和分子病毒学是药学本科生开设的中英文双语教学课程。从授课对象和目的、授课形式与内容、授课的效果等方面总结了教学实践过程和体会，并根据出现的问题提出了改进的方案和想法。

基于病毒靶点的乙型肝炎的抗病毒药物研究进展

乙型肝炎病毒(HBV)感染是导致肝硬化和肝癌的主要原因,抗病毒是治疗慢性乙型肝炎的关键。目前用于治疗HBV感染的药物主要集中于干扰素和核苷类似物,但效果并不十分令人满意。因此,寻找具有新的靶点和作用机制的抗HBV药物至关重要。文中对近年来发展的部分抗HBV药物的作用靶点和作用机制进行综述。

采用哺乳动物细胞表面展示技术构建全长人源抗肾癌抗体基因库

目的采用哺乳动物细胞表面展示技术构建全长人源抗肾癌抗体基因库。方法分离肾癌患者的外周血淋巴细胞(PBMC),提取PBMC的总RNA,采用RT-PCR的方法扩增抗体全长Kappa型轻链(LCκ)和重链可变区(VH)基因,分别插入载体pDGB-HC-TM,电击转化感受态大肠杆菌TOPO10,构建轻、重链抗体基因库,然后将轻、重链抗体基因库联合转染293T细胞,流式细胞仪分析全长人源抗体在293T细胞表面的表达。结果成功构建IgG1-Kappa型抗肾癌抗体基因库,随机挑选的克隆经DNA序列分析显示轻、重链库的序列正确性达90%(9/10)和80%(8/10),流式细胞仪分析显示来自轻、重链库的上述克隆各有7个可检测到相应基因在293T细胞表面的表达,可表达抗体库库容量高达7.5×1010。结论 IgG1-Kappa型抗肾癌抗体基因库转染293T细胞后能够在细胞表面表达全长人源抗体,抗体的多样性为下一步筛选特异性抗体奠定良好的基础。

脱氧胆酰酪氨酸的体外杀精和抗HIV活性研究

目的:检测自制的避孕型杀微生物剂的候选化合物脱氧胆酰酪氨酸(deoxycholyltyosine,DCT)体外杀精和抗HIV活性。方法:采用改良的Sander-Cramer方法,并用计算机辅助精子分析技术检测与DCT孵育后的各项精子运动参数。采用ELISA法检测核心抗原p24的含量,并采用染料转移法检测DCT抑制HIV诱导的细胞-细胞融合的活性。采用XTT法检测DCT对阴道上皮细胞VK2/E6E7的毒性。结果:DCT的体外杀精作用最小有效浓度(MEC)为1.0±0.2mg/ml;抑制HIV复制的半数有效浓度(IC50)为21.50±3.17μg/ml;不能阻止HIV病毒进入靶细胞;DCT对阴道上皮细胞系VK2/E6E7的细胞毒性较低。结论:DCT可作为避孕型杀微生物剂进行研发,预防意外妊娠和HIV的性传播。

VIR576通过与TCR跨膜区结合抑制抗原特异性T细胞活化

目的探讨抗HIV多肽VIR576抑制抗原特异性T细胞活化的作用机制。方法OVA体外刺激分离的DO11.10小鼠抗原特异性T细胞,CCK-8法检测VIR576对其活化的影响。采用溶血试验、溶血抑制实验、荧光结合法等方法检测VIR576与TCR跨膜区序列(TCR-TMD)之间的相互作用。结果体外实验显示,VIR576能逆转HIVgp41融合多肽(FP)介导的抗原特异性T细胞活化,并且其自身也能抑制抗原特异性的T细胞活化(P<0.05)。溶血试验、溶血抑制实验、荧光结合法等方法证实,VIR576能与TCR-TMD特异性结合。结论VIR576对T细胞活化的作用是TCR依赖性的,通过与TCR-TMD结合抑制抗原特异性T细胞活化。VIR576兼具抑制HIV进入和抗原特异性T细胞活化的特性,可望作为预防HIV性传播的杀微生物剂进行研究。

皱瘤海鞘水提物体外抗HSV-2活性实验研究

目的:了解皱瘤海鞘水提物体外抗单纯疱疹病毒2型的活性。方法:采用HSV-2在Vero细胞上的增殖为模型,用细胞病变法和MTT法对皱瘤海鞘水提物体外抗HSV-2的药效活性进行评价。结果:皱瘤海鞘水提物CC_(50)值大于10 mg·ml^(-1),毒性低;对HSV-2具有很好抑制和杀伤作用,2 mg·ml^(-1)时对病毒的生物合成抑制蟀达到82.98%,对HSV-2的直接杀伤率为74.29%。对HSV-2的吸附阻断作用较小。结论:皱瘤海鞘水提物具有良好的抗HSV-2活性。

皱瘤海鞘体外抗单纯疱疹病毒2型感染及其作用机制

目的:研究皱瘤海鞘醇提物体外抗单纯疱疹病毒2型(HSV-2)的效果及其作用机制。方法:用HSV-2在Vero细胞上的增殖为模型,运用细胞病变法(CPE法)和四甲基偶氮唑盐比色法(MTT比色法)对皱瘤海鞘醇提物体外抗HSV-2的药效学作用进行评价,在HSV-2复制的不同阶段用药物进行干预,探讨皱瘤海鞘醇提物对HSV-2复制的影响机制。结果:皱瘤海鞘醇提物的毒性低,对Vero细胞的CC50值大于10mg.mL-1。对HSV-2有良好的抑制作用,EC50值为0.40mg.mL-1,TI>25。皱瘤海鞘醇提物对HSV-2具有杀伤作用和抑制HSV-2复制,对HSV-2的吸附作用影响较小。结论:皱瘤海鞘醇提物对HSV-2复制具有良好的抑制作用。

作用于HIV gp120的进入抑制剂研究进展

HIV-1病毒为包膜病毒,其感染靶细胞的第一步是由HIV包膜蛋白表面亚基gp120与靶细胞上的CD4分子和辅助受体(趋化因子受体CCR5或CXCR4等)结合,导致gp41的构型发生改变,启动病毒包膜与靶细胞膜的融合。与gp120相结合的一些抗体、蛋白、多糖、多肽和小分子化合物,都可能影响HIV-1病毒包膜和靶细胞膜融合的过程,从而起到抗HIV-1病毒的作用。该文对近年来以HIV gp120为靶点的HIV进入抑制剂的研究进展进行综述。

靶向血凝素的流感病毒进入抑制剂研究进展

目的概述流感病毒包膜蛋白血凝素(Hem agglutin in,HA)的生物学特征,以及以HA为靶点的抗流感病毒进入抑制剂的研究进展。方法分析、整理和归纳近年来的代表性论文。结果在流感病毒感染宿主细胞过程中,其包膜糖蛋白HA在病毒的侵入以及与靶细胞的融合过程中起关键的作用。流感病毒与靶细胞结合以及膜融合的过程是药物干预的重要环节。HA由HA1和HA2两个亚基组成,其中HA1亚基与靶细胞膜上的唾液酸受体结合,HA2则为跨膜亚基,介导病毒膜与胞内体膜的融合。流感病毒HA可作为药物的作用靶点,寻找能够抑制流感病毒进入靶细胞的抗流感药物。作为一种新机制的抗流感药物,流感病毒进入抑制剂可望治疗对现有抗流感药物耐药的流感患者。若与M2离子通道阻断剂、神经氨酸酶抑制剂等抗流感药物联合应用,将有助于提高疗效,降低毒副作用及病毒耐药的发生。结论流感病毒进入抑制剂作为一种新机制的抗流感药物,将对流感的防治起到突破性的作用。

CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T细胞和类风湿关节炎的治疗

类风湿关节炎(RA)是难治性自身免疫性疾病,而CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)是一群重要的负性调节细胞。这群细胞在RA中存在缺陷,与其发病相关,然而它是否是一个较好的疾病治疗的靶点、如何看待它与RA治疗的关系?本文在阐明Treg与RA关系的基础上,从促进Treg对RA及其动物模型的治疗、临床治疗RA的药物对Treg的影响、Treg对RA骨免疫学的影响、以细胞为基础的Treg疗法等多个方面,综述Treg和RA治疗的关系,并提出了问题和展望。