金诺芬对卵巢癌细胞活性的影响及其分子机制

目的 探讨金诺芬对卵巢癌细胞活性的影响及其可能的分子机制。方法 细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法测定金诺芬处理卵巢癌细胞系SKOV3、Caov3和SW626细胞和永生化的正常人胚肾HEK-293T细胞的剂量反应存活率曲线和半抑制剂量(IC_(50))。流式细胞术测定细胞周期。酶标仪测定细胞内总谷胱甘肽(GSH)、还原型GSH和氧化型谷胱甘肽(GSSG)的水平、硫氧还蛋白还原酶(TrxR)和活性氧自由基(ROS)的水平,并计算还原型GSH/GSSG的比值。Western blot测定细胞内细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)4、CDK6、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和P53、p-P53、啮齿类双分蛋白2(MDM2)的表达情况。结果 与HEK-293T细胞相比,卵巢癌SKOV3、Caov3和SW626细胞的剂量反应存活率曲线和IC_(50)值显示卵巢癌细胞对金诺芬的敏感性更高(P<0.05)。与未处理组相比,经各自IC_(50)浓度金诺芬处理的SKOV3、Caov3细胞内总GSH、还原型GSH/GSSG的比值和TrxR的活性均降低(t=25.11、31.18,14.72、19.92,43.30、10.74,P<0.05),ROS水平均升高(t=23.82、27.71,P<0.05);G_(0)/G_(1)期细胞数量增多,S期和G2期细胞数量减少(P<0.05);且CDK4、CDK6、Cyclin D1及MDM2的表达水平均下调(t=7.51、15.59,17.32、11.26,20.78、20.78,24.25、17.32,P<0.05),而P53和p-P53的表达水平均上调(t=17.32、24.25,12.12、10.39,P<0.05)。结论 金诺芬通过抑制TrxR的活性引起卵巢癌细胞内氧化应激,并通过部分降解MDM2以稳定并激活P53,将癌细胞阻滞于G_(0)/G_(1)期,发挥抗卵巢癌活性。