腺病毒重组绿色荧光蛋白转染脂肪组织来源干细胞的特点

目的:体外基因转染成人脂肪组织来源的干细胞后,观察腺病毒载体能否有效地转染及对细胞的影响。实验应用腺病毒增强型绿色荧光蛋白进行体外基因转染以验证基因修饰效果。方法:实验于2006-10/2007-02在南方医科大学生物技术工程研究所实验室完成。实验对象:脂肪组织取自南方医科大学附属医院整形科手术室5例成年女性腹部吸脂术患者,排除了冠心病、高血压及糖尿病等。手术前均与患者本人谈话并征得其同意,获取脂肪组织进行实验,并经医院伦理委员会批准。实验方法:分离人脂肪组织,进行原代和传代培养。取第4代脂肪组织来源干细胞进行流式细胞术表型鉴定,并将0,10,20,30,50,100感染复数值的腺病毒重组增强型绿色荧光蛋白,通过活力和增殖实验进行体外转染,观察其对脂肪组织来源干细胞的影响。结果:5份标本均成功培养出脂肪组织来源干细胞,生长良好,均成功进行了腺病毒重组增强型绿色荧光蛋白基因转染。①原代细胞培养48h后可见细胞贴壁,13d后可见细胞铺满瓶底80%细胞绝大多数呈梭形。1∶2传代后细胞增殖速度明显加快,3d后细胞即已长满培养瓶底,即可传代。第4代的脂肪组织来源干细胞表型,呈CD29+,CD34-,CD44+,CD106-,CD133-和HLA-DR-。②腺病毒重组增强型绿色荧光蛋白转染24h可见绿色荧光,5d荧光表达强度最强,脂肪组织来源干细胞细胞传代培养后仍有强荧光表达。③转染组和未转染组细胞培养1,3,5,7,9,11d时细胞活力、增殖分化均无统计学差异。结论:腺病毒重组增强型绿色荧光蛋白可成功进入脂肪组织来源干细胞,感染复数值为50时较为理想。

人脂肪组织来源基质干细胞成脂分化及Ad-EGFP体外转染研究

目的探讨重组腺相关病毒载体能否有效地转染脂肪组织来源基质干细胞及(ADSC)其影响,同时为组织工程寻找一种理想的病毒载体及细胞示踪标记方法。方法采用抽脂法分离培养ADSC,诱导培养液诱导细胞成脂分化,行细胞形态学检查,细胞表面抗原鉴定,油红O染色,评价细胞成脂情况。在此基础上转染Ad-EGFP,观察细胞形态学改变及荧光表达的时间与强度,计算转染效率,确定转染的理想感染复数(MOI)值,同时通过活力和增殖实验进行Ad-EGFP体外转染对ADSC的影响研究。结果细胞扩增迅速,形态良好,经诱导后呈现明显的成脂改变。实验确定Ad转染细胞的较佳MOI值为50,以此值转染Ad-EGFP后细胞荧光持续高效稳定表达,并可传至子代,可以满足示踪标记的需要。Ad转染效率高,对细胞活性影响小。结论ADSC的培养和分化能满足脂肪组织工程的要求;Ad长期稳定表达目的基因,是一种理想的组织工程病毒载体;基因转染方法高效稳定表达EGFP,可作为种子细胞良好的示踪标记方法。

股前外侧穿支皮瓣移植在四肢严重创伤后皮肤缺损修复中的应用

目的探讨股前外侧穿支皮瓣移植修复四肢严重创伤后皮肤缺损的临床效果。方法选取2012年4月至2016年3月在惠东县人民医院治疗的四肢远端皮肤软组织缺损导致的骨和肌腱外露的患者20例,对患者进行股前外侧穿支皮瓣移植修复,观察患者术后并发症发生情况。结果所有患者进行植皮的游离股前外侧穿支皮瓣均成活,切口为Ⅰ级愈合。切除的皮瓣面积范围为(8×9)^(12×22)cm。出现皮肤边缘坏死患者有2例,12例患者皮神经成功吻合,8例吻合效果不佳。随访发现2例患者出现皮肤感觉异常现象;2例患者存在明显的瘢痕。感觉恢复情况:在行股外侧皮神经吻合的11例患者中,随访6个月,恢复至S2患者共4例,S3+共7例,其余9例未行股外侧皮神经吻合。结论应用股前外侧穿支皮瓣移植修复四肢严重创伤后皮肤缺损的临床效果明显,值得在临床上推广应用。

色度值评价光动力治疗鲜红斑痣的疗效

鲜红斑痣是一种发生在真皮浅层的血管扩张畸形，表现为出生即有的皮肤红斑，脉冲染料激光（pulse dye laser．PDL）和光动力疗法（photodynamic therapy，PDT）是较为有效的治疗手段。我们运用颜色光学的原理，采用光谱光度测色仪对光动力治疗鲜红斑痣的效果进行定量分析。

生物化学精品课程的建设与实践

生物化学是基础医学里的主干学科,研究所通过近几年的课程建设,在优化课程内容、改善教学方法、加强教育技术、强化师资队伍等环节上进行了诸多有益的改革,起到了很好的教学效果,并被评为2005年度国家级精品课程。