肝螺杆菌甲基基团接受趋化信号转导蛋白的克隆表达及纯化

目的克隆肝螺杆菌(H.hepaticus)甲基基团接受趋化信号转导蛋白(MCP)基因,制备MCP重组蛋白,为以后检测我国人群肝螺杆菌感染率提供实验基础。方法利用PCR方法扩增目的基因片段,连接至原核表达载体pET22b(+),构建MCP的原核表达质粒pET22b+/MCP。将质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,通过Ni-NTA亲和层析系统纯化重组蛋白。结果构建了原核表达质粒pET22b+/MCP,含有该质粒的大肠杆菌经1 mmol/L IPTG诱导4 h后表达一相对分子质量约14 kD的重组蛋白,经Ni-NTA亲和层析系统纯化获得了MCP的纯化重组蛋白rhMCP。结论获得了肝螺杆菌MCP的纯化重组蛋白,为进一步利用血清学方法调查我国人群肝螺杆菌感染率提供可能。

经皮射频毁损治疗肝癌监测可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅰ,Ⅱ的临床意义

目的探讨可溶性肿瘤坏死因子受体检测在超声引导下经皮射频毁损(RFA)治疗原发性肝癌(HCC)的临床意义。方法采用RF2000型射频治疗仪,在B超引导下经皮RFA治疗30例HCC患者。采用双抗体夹心酶联免疫法(ELISA),检测患者RFA治疗前后血清sTNFRⅠ,sTNFRⅡ水平的改变,并检测25例HCC血清sTNFRⅠ,sTNFRⅡ与健康对照组比较。结果HCC患者RFA治疗后血清sTNFRⅠ,sTNFRⅡ水平较治疗前水平显著降低(P<0.05);HCC与对照组比较有非常显著性差异(P<0.01)。结论检测HCC患者血清sTNFRⅠ,sTNFRⅡ的水平,有助于了解患者的免疫状况,RFA治疗能有效减轻瘤负荷,改善患者机体免疫功能。

乙酰肝素酶在溃疡性结肠炎肠黏膜中的表达及在致病机制中的作用

目的 探讨乙酰肝素酶(heparanase,HPSE)在溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)患者肠黏膜中表达的改变,及其表达是否与不同临床分期和不同炎症程度相关。同时也讨论了 HPSE表达在UC致病机制中的作用。方法 正常对照组为13名健康成人,确诊的 28 例 UC患者中 25 例根据病情分为活动期11例、缓解期14例,并对 24 例的病理组织学炎症进行分级,Ⅲ、Ⅳ级 10 例,Ⅰ、Ⅱ级 14例。分别采用RT-PCR和Western印迹法对不同分组的HPSE表达水平进行检测。结果 HPSE在正常对照组肠黏膜中无表达,在缓解期和病理分级Ⅰ、Ⅱ级的肠黏膜中均呈现低表达,而在活动期和病理分级Ⅲ、Ⅳ级的肠黏膜中表达显著升高。结论 HPSE在UC肠黏膜中呈阳性表达,且其表达水平与病情轻重和炎症严重程度呈正相关,它可能在UC肠黏膜上皮重塑和疾病的发生和发展中起重要作用,而HPSE抑制剂则有可能用于UC的治疗。

异常表达的miRNA对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的了解胰腺癌中异常表达的微小RNA（miRNA）对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法利用miRNA芯片比较胰腺癌组织、胰腺癌细胞株ASPC-1和正常胰腺组织的miRNA表达谱。根据表达谱结果选择4个异常表达的miRNA：miR-21、24、191、221，利用脂质体转染反义核苷酸方法下调这些miRNA的活性。荧光显微镜监测转染效率；荧光定量PCR检测miRNA的表达。MTT法细胞活力分析、流式细胞仪分析下调miRNA后的细胞活力、生长周期和凋亡的变化。结果下调miR．21增加细胞凋亡，降低细胞活性；下调miR-221改变细胞周期，增加G0／G1期细胞，减少S期细胞，但对细胞活性无明显影响；miR-221和miR-21共同下调后，细胞活力则明显下降。其他miR转染对细胞生长和凋亡的影响不明显。结论部分在胰腺癌中异常表达的miRNA对胰腺癌细胞的生长有一定影响，选用一定组合的联合转染，对细胞生长和凋亡的影响比单独转染时加强。

带细菌去旅行

你知道吗。1990年,在美军对伊拉克的＂沙漠盾牌＂行动中,导致美军减员的首要因素不是战争失败,而是拉肚子。 一项对美军2022名参战官兵的调查显示,57%的人至少发生一次腹泻,32%的人发生两次或两次以上的腹泻,17%的人腹泻并伴有发热,

人碱性成纤维生长因子重组质粒的构建

目的通过基因体外拼装（PBGA）获得带有BamHI和PstI内切酶位点的重组人碱性成纤维生长因子（rhbFGF）cDNA，并利用TA克隆技术构建含rhbFGF基因片段的重组质粒。方法（1）根据己知的hbFGF氨基酸序列并结合乳酸链球菌蛋白表达密码子来设计适于乳链菌内表达的hbFGF基因序列，分别在5’和3’端设计BamHI和PstI酶切位点，通过DNASTAR6．0将上述目的基因序列设计成22个可以相互重叠的寡核苷酸片段，bFGFl-bFGF22。（2）采用基因拼装技术，通过PCR反应，拼接I～22段寡核苷酸片段，合成带有设定内切酶位点的rhbFGFcDNA。（3）构建rhbFGFTA克隆载体。纯化上步拼接rhbFGF基因片段，产物与PMD18-TVECTOR进行连接反应。连接产物转化于E．coliTOP10感受态细胞，涂板、筛选、培养后提质粒，酶切鉴定并测序。结果（1）体外拼装带有BamHI和PstI内切酶酶切位点的rhbFGFcDNA经2％琼脂糖电泳验证；（2）构建了载体hrbFGF—PMD18，经酶切鉴定和测序证实碱基序列完全正确。结论利用PBGA和TA克隆技术可成功构建rhbFGF．PMD18重组质粒。

吃阿司匹林，先跟细菌打个招呼

急诊科来了一位消化道出血的老年男性病人。胃镜检查是急性胃黏膜出血，且幽门螺杆菌的检测呈阳性。医生询问病吏后，了解到病人有冠心病吏，一直在服用肠溶型阿司匹林以预防心梗。