强直性脊柱炎患者骨髓间充质干细胞的生物学及免疫学特性

目的：探讨强直性脊柱炎（AS）患者骨髓间充质干细胞（BMSCs）的生物学及免疫学特性，为进一步阐明AS的发病机制和寻找新的治疗靶点提供理论依据。方法：选取37例活动期AS患者（AS组），男34例，女3例，平均年龄（24.3±5.4）岁，HLA-B27均为阳性；49例健康志愿者作为对照组（HD组），男43例，女6例，平均年龄（25.7±4.9）岁；其中HLA-B27阴性44例（HD1组），HLA-B27阳性5例（HD2组）。从每例受检者髂后上棘穿刺采集骨髓组织，分离BMSCs，培养扩增至第3代，以1×104/ml的浓度接种于96孔板中，100μl/孔，从第1天开始每日取3孔进行细胞计数，共计12d，绘制生长曲线；每日取3孔经MTT处理后测定吸光度值，绘制细胞活力曲线，观察BMSCs的生物学特性。使用流式细胞仪检测各受检者BMSCs的细胞表面表型。将第3代BMSCs细胞接种于U形底96孔板，培养4h后使用60Co照射30Gy；取健康志愿者外周血采用密度梯度法分离单个核细胞（PBMCs），加入细胞培养液，计数后按BMSCs∶PBMCs 1∶20、1∶10、1∶5、1∶2、1∶1的比例接种于已接种BMSCs的96孔板，共培养5d，观察双向混合淋巴细胞反应情况；同样获取PBMCs，计数后同样以5个比例接种于96孔板，加入植物血凝素（PHA）4μg/ml，充分接触后共培养5d，观察淋巴细胞增殖反应情况。对组间进行统计学比较。结果：AS组、HD1和HD2组第3代BMSCs体外培养1~12d时的增殖能力、细胞活力无显著性差异（P〉0.05）；三组细胞表面表型均为高水平表达CD105、CD73和CD90，不表达CD45、CD34、CD14和HLA-DR。HD1组和HD2组BMSCs与不同比例PBMCs共培养的双向混合淋巴细胞反应和PHA刺激的淋巴细胞增殖反应均无显著性差异（P〉0.05）；AS组与HD组比较有显著性差异（P〈0.05）。结论：AS患者BMSCs的生物学特性无明显改变，但其免疫调节功能明显下降，其可能在AS的发病机制中扮演重要角色。