circMYO9A_006通过翻译蛋白MYO9A-208aa发挥抑制心肌细胞肥大的作用

目的:研究环状RNA MYO9A_006(circMYO9A_006)对心肌细胞肥大表型的调控作用及可能机制。方法:利用腺病毒介导在乳小鼠心室肌细胞(NMVCs)中过表达circMYO9A_006,并以腺病毒介导过表达同样带有绿色荧光蛋白标签的空载体为对照,检测NMVCs中心肌肥大相关蛋白β-肌球蛋白重链(β-MHC)、骨骼肌肌动蛋白α1(ACTA1)和心房钠尿肽(ANP)的表达。建立去氧肾上腺素(PE)诱导的乳大鼠心室肌细胞(NRVCs)肥大模型,通过鬼笔环肽染色检测过表达circMYO9A_006对NRVCs表面积的影响。双萤光素酶报告基因实验检测circMYO9A_006包含的潜在内部核糖体进入位点(IRES)的活性。通过Western blot实验检测circMYO9A_006翻译蛋白MYO9A-208aa及其在细胞内分布情况。分别制备circMYO9A_006-ORF(直接表达MYO9A-208aa)和circMYO9A_006-ATG-mut(不能表达MYO9A-208aa)重组病毒,以空载体病毒和circMYO9A_006重组病毒分别感染NRVCs,检测circMYO9A_006翻译蛋白MYO9A-208aa对心肌细胞肥大表型的特异调节作用。结果:利用腺病毒可在NMVCs中有效介导circMYO9A_006过表达。过表达circMYO9A_006可显著抑制NMVCs中心肌肥大相关蛋白的表达(P<0.01),并显著抑制PE诱导的NRVCs中心肌肥大相关蛋白的表达和细胞表面积的增加(P<0.05)。双萤光素酶报告基因实验结果提示,circMYO9A_006包含的2个IRES均具有活性。Western blot检测结果显示,在NRVCs中过表达circMYO9A_006可翻译预期大小为28 kD的MYO9A-208aa蛋白,并主要分布于细胞质中。过表达MYO9A-208aa和circMYO9A_006可一致地抑制NRVCs心肌肥大相关蛋白表达(P<0.01),并可逆转PE诱导的NRVCs肥大反应(P<0.05);而过表达circMYO9A_006-ATG-mut没有抑制NRVCs肥大的作用。结论:circMYO9A_006通过翻译蛋白MYO9A-208aa发挥抑制心肌细胞肥大的作用。

狭缝引导配体13′UTR通过miR-34a-5p/SIRT1轴调节内皮细胞表型

在高等生物的进化过程中,mRNA的3′非翻译区(3′untranslated region,3′UTR)序列显著增加,提示3′UTR在生物功能调节中可能发挥重要作用。我们发现狭缝引导配体1(slit guidance ligand 1,SLIT1)3′UTR在肥厚型心肌病(HCM)患者心肌中水平降低,但其对肥厚心肌中血管功能调节的作用机制不清楚。利用腺病毒介导在主动脉内皮细胞(human aortic endothelial cells,HAECs)中过表达SLIT13′UTR,检测HAECs中一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthases,eNOS)和血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor,VEGFA)表达。分别采用划痕实验和基于Matrigel胶的管腔形成实验检测HAECs的迁移和成管腔能力。结果发现,过表达SLIT13′UTR会升高HAECs中p-eNOS、eNOS和VEGFA水平(P<0.01),并促进HAECs迁移和成管腔能力(P<0.01)。生物信息学预测提示,SLIT13′UTR上有多个微RNA(miRNA)的潜在结合位点,反义RNA纯化技术(RNA antisense purification,RAP)筛选和利用Ago2抗体进行RNA结合蛋白质免疫沉淀(RNA binding protein immunoprecipitation,RIP)结果显示,SLIT13′UTR与miR-34a-5p存在结合作用,而过表达SLIT13′UTR的HAECs中miR-34a-5p水平显著降低(P<0.05)。Western印迹结果证实,miR-34a-5p可逆转过表达SLIT13′UTR对去乙酰化酶SIRT1的上调作用(P<0.05)。在HAECs中转染miR-34a-5p和si-SIRT1,可一致地抑制过表达SLIT13′UTR引起的p-eNOS、eNOS和VEGFA增加(P<0.05,P<0.01),及促进HAECs迁移和成管腔的能力(P<0.01,P<0.001)。因此,SLIT13′UTR可以特异性吸附miR-34a-5p,通过miR-34a-5p/SIRT1轴发挥促进内皮细胞迁移和管腔生成的作用。

口服L-苏糖酸镁预防长春新碱诱导的大鼠记忆和情感障碍

目的:观察L-苏糖酸镁(magnesium-L-threonate,L-TAMS)对长春新碱(vincristine,VCR)诱导的大鼠记忆和情感障碍的影响并探讨其机制。方法:采用随机数表法将SD大鼠随机分为三组:Control组(饮用正常水并注射等量生理盐水)、VCR组(大鼠腹腔注射长春新碱并饮用正常水)、L-TAMS+VCR组(VCR注射前7天起至实验结束在饮用水中加入L-TAMS),每组5~7只。采用新颖物体识别测试(novel object recognition test,NORT)检测大鼠记忆能力;高架十字迷宫实验(elevated plus-maze test,EPMT)检测大鼠焦虑行为;强迫游泳实验(forced swimming test,FST)检测大鼠抑郁行为。使用在体电生理实验技术记录海马CA3-CA1突触后诱发场电位的幅度;Western blot检测海马内N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-Methyl-D-Aspartate-Receptors,NMDARs)亚基NR2B表达的情况;免疫荧光检测海马CA1与前扣带回皮质(anterior cingulate cortex,ACC)内小胶质细胞的表达情况。结果:与Control组比较,VCR组认知系数降低,静止不动时间延长,进入高架十字迷宫开放臂的时间和次数减少,海马CA3-CA1突触后场电位幅度降低,海马内NR2B含量显著降低,海马CA1和ACC内小胶质细胞的表达增多,腹腔注射VCR之前,提前7天直至实验结束口服L-TAMS可预防VCR所引起的上述变化。结论:L-TAMS可通过上调海马突触后膜NMDARs亚基NR2B,逆转VCR引起的CA3-CA1突触后场电位幅度显著降低,改善海马突触传递受损,同时,降低大鼠海马CA1和前扣带回皮质的小胶质细胞表达,减轻神经炎症,进一步预防VCR诱导的记忆和情感功能障碍。

理想体质量可作为低体质量患者喉罩型号的选择依据:137例随机对照临床试验

目的对比基于理想体质量与实际体质量确定经典喉罩型号对低体质量指数患者喉罩首次放置成功率的影响。方法选取137例18~60岁、体质量指数低于18.5 kg/m^(2)、根据实际体质量和理想体质量选择喉罩型号时存在差异的患者,以随机数字表法将患者分为理想体质量组(n=68)和实际体质量组(n=69)。理想体质量组患者根据公式计算体质量,实际体质量组则根据实际测量体质量,作为经典喉罩型号选择依据。记录喉罩首次放置成功率、总体成功率、纤维支气管镜下视野等级、喉罩漏气压力、麻醉维持期间及麻醉复苏期喉罩相关并发症。结果理想体质量组患者喉罩首次放置成功率高于实际体质量组(86.8%vs 68.1%,P=0.016),理想体质量组患者较实际体质量组使用较大型号喉罩(P<0.005),且具有较好的纤支镜视野评分(P=0.001)和较高的气道密封压(P<0.005),两组患者吸气气道峰压的差异无统计学意义(P=0.154),且麻醉维持期间和复苏期喉罩相关并发症发生率的差异无统计学意义(P>0.05)。结论低体质量指数患者基于身高、性别的理想体质量选择经典型喉罩型号能显著提高喉罩首次放置成功率。

锁骨上入路臂丛神经阻滞技术体系:精准阻滞已向临床迈进

锁骨上入路臂丛神经阻滞是上肢手术麻醉和镇痛的常用技术。近年来,超声使臂丛神经轨迹、筋膜层次和周围解剖标记可视化,在此基础上通过规范的扫描和成像、穿刺和注药方法,形成精准锁骨上入路臂丛神经阻滞技术体系。然而,临床应用精准锁骨上入路臂丛神经阻滞技术处于起步阶段,神经内注射风险、膈神经麻痹、阻滞动力学数据缺乏等是限制其临床应用的难点和痛点。本文着重从解剖基础、入路和技术特点和临床应用如肩关节镜手术进行系统阐述,以期提高麻醉医师对该精准技术体系的认识并促进其临床应用。

丙泊酚对不同发育时期斑马鱼鞘磷脂蛋白表达的影响

目的探讨丙泊酚对斑马鱼鞘磷脂蛋白(MBP)表达的影响及相关机制。方法将受精后6~48 h胚胎(共180个)采用随机数字表法分别浸泡于新鲜养鱼水(对照组)、含二甲基亚砜养鱼水(二甲基亚砜组)和含30μg/mL丙泊酚养鱼水(丙泊酚组)中,每组60个胚胎。于受精后3、4、5、6、7、10 d收集幼鱼,通过RT-qPCR法和Western blot法检测不同发育时期mbp mRNA及蛋白表达。采用TUNEL、免疫荧光法检测3 d少突胶质细胞的凋亡情况。采用RT-qPCR和Western blot法检测凋亡相关因子caspase-8、caspase-9和caspase-3的表达。结果与对照组相比,丙泊酚组出生后3~7 d幼鱼mbp mRNA和蛋白表达均降低(P<0.05);丙泊酚组少突胶质细胞凋亡增多,并伴随caspase-8、caspase-9和caspase-3 mRNA和蛋白的表达上调。结论丙泊酚抑制MBP表达具有短期持续性,其机制可能与少突胶质细胞凋亡相关。

丙泊酚诱导新生大鼠少突胶质细胞的凋亡:基于激活caspase家族蛋白和抑制抗凋亡程序

目的探讨丙泊酚诱导少突胶质细胞凋亡的分子机制。方法采用随机数字表法将45只7 d SD乳鼠分为对照组(n=15)、脂肪乳剂组(n=15)和50 mg/kg丙泊酚组(n=15)。单次腹腔注射丙泊酚,0.4 mL/只(体积不足者用生理盐水补齐)。对照组和脂肪乳剂组腹腔注射等体积的生理盐水和中长链脂肪乳。丙泊酚腹腔注射麻醉8 h后,采用qPCR和Westernblot检测不同组别caspase-3、caspase-8、caspase-9 mRNA和蛋白表达水平;检测NGF mRNA和P-PI3K/P-PAkt表达水平。结果与对照组相比,丙泊酚组caspase-3、caspase-8、caspase-9 mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05);NGF mRNA和P-PI3K/P-PAkt表达水平降低(P<0.05)。结论丙泊酚通过激活凋亡程序中caspase家族蛋白成员和抑制抗凋亡程序,诱导少突胶质细胞的凋亡。

腹腔镜肾部分切除术中突发寂静肺一例

患者,男,69岁,身高170 cm,体重60 kg。因“发现肾占位性病变1年余”入院。一年前患者自觉小便颜色变黄,尿泡沫增多,偶有尿急。随后至当地医院就诊完善相关检查后考虑左肾占位病变。为进一步治疗至我院就诊。既往史无特殊。吸烟30余年,未戒烟。心肺腹查体无特殊。实验室检查无特殊。CT示:左肾占位病变(肿瘤可能)。诊断:肾占位性病变。拟全麻下行腹腔镜肾部分切除术。

Akt/mTOR信号通路介导小鼠海马区神经胶质细胞激活对心力衰竭后认知功能障碍的影响

目的探讨蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/雷帕霉素靶分子(molecular target of rapamycin,mTOR)信号通路介导的小鼠海马区神经胶质细胞激活在心力衰竭(heart failure,HF)引起认知功能障碍中的作用。方法将22只成年雄性C57BL/6小鼠按随机数字表法分为两组:假手术组(Sham组,10只)、慢性心力衰竭组(HF组,12只)。HF组小鼠行左冠状动脉前降支结扎,Sham组小鼠仅开胸不结扎。造模后1个月,对两组小鼠进行超声心动图检查,记录其左室舒张末期内径、左室收缩末期内径、左室舒张末期容积、左室收缩末期容积、左室射血分数及左室缩短分数。随后进行水迷宫实验,记录逃避潜伏期、穿越平台次数和目标象限停留时间。水迷宫实验结束后处死小鼠,取两组小鼠心脏组织和海马组织。心脏组织进行马松染色,并用免疫组织化学法检测小鼠海马组织胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、离子化钙结合接头分子1(ionized calcium binding adapter molecule 1,Iba1)、少突胶质细胞转录因子2(oligodendrocyte lineage transcription factor 2,Olig2)水平;Western blot法检测海马组织Akt、磷酸化蛋白激酶B(p⁃Akt)、mTOR、磷酸化雷帕霉素靶分子(p⁃mTOR)水平。结果马松染色结果显示HF组小鼠心肌出现明显的纤维化,Sham组心肌呈现正常状态。与Sham组小鼠比较:HF组小鼠左室舒张末期内径、左室收缩末期内径、左室舒张末期容积、左室收缩末期容积明显增加(P<0.05),逃避潜伏期明显增长(P<0.05),海马组织GFAP、Iba1、Olig2、p⁃Akt/Akt、p⁃mTOR/mTOR水平明显升高(P<0.05),左室射血分数、左室缩短分数明显降低(P<0.05),穿越平台次数、目标象限停留时间减少(P<0.05)。结论慢性HF小鼠在造模1个月后出现了认知功能障碍,并伴有海马组织神经胶质细胞激活,且Akt/mTOR信号通路也呈现出激活状态。

右美托咪定联合艾司氯胺酮在小儿无痛胃镜检查中的应用研究

目的探讨右美托咪定联合艾司氯胺酮在小儿无痛胃镜检查中的应用效果。方法选取2022年5月至2023年5月在南方医科大学附属广东省人民医院行无痛胃镜检查的患儿98例作为研究对象,按照不同麻醉方案分为两组,对照组48例使用丙泊酚联合艾司氯胺酮麻醉,观察组50例使用右美托咪定联合艾司氯胺酮麻醉。对比两组患儿的无痛胃镜麻醉用药前(T0)、手术开始时(T1)、胃镜进入胃内时(T2)、手术完成时(T3)血流动力学指标及镇静评分,对比两组T0、苏醒后10 min(T4)、苏醒后30 min(T5)认知功能,并记录两组麻醉恢复时间(麻醉起效时间、苏醒时间、正常行走时间)、不良反应发生率。结果观察组苏醒时间、正常行走时间短于对照组(P<0.05);对照组T2、T3平均动脉压、心率均升高(P<0.05),观察组T2、T3平均动脉压、心率均低于对照组(P<0.05);两组T0、T4、T5简易智力状态测定表评分均无明显变化(P>0.05);观察组T1~T3 Ramsay镇静评分较对照组低(P<0.05);观察组不良反应发生率低于对照组(P<0.05)。结论在小儿无痛胃镜检查中,右美托咪定联合艾司氯胺酮患儿血流动学稳定,镇静作用良好,安全性高。