多重耐药鲍曼不动杆菌的耐药性和同源性研究

目的了解重症监护病房(ICU)的多重耐药鲍曼不动杆菌的耐药谱特征及其同源性,为临床防治和控制院内感染提供依据。方法收集该院重症监护病房2007年3～9月分离出的14株鲍曼不动杆菌,采用E-test法测定15种抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC)并采用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术分析其耐药株的同源性。结果14株菌对头孢菌素类,氨基甙类和氟喹若酮类等抗菌素均显示出较高水平的多重耐药性;RAPD分型11株菌有高度同源性。结论分离自ICU的鲍曼不动杆菌多重耐药率较高,且大多数菌株有高度同源性。

腹腔镜胆囊切除术后并发胰腺炎的原因分析

目的分析腹腔镜胆囊切除术(LC)后并发胰腺炎的原因,并提出预防和处理措施。方法回顾性分析12例LC术后胰腺炎病例的临床资料,并总结其发病原因。结果12例胰腺炎的发病情况分别为:LC术后继发性胆总管结石5例;术后胆漏、腹腔感染诱发者1例;胆囊结石合并胆总管结石,分期行EST/ENBD术后胰腺炎2例;术前漏诊1例;隐匿性胰腺炎基础上的急性发作1例;原因不明2例。12例中的2例(1例继发性胆总管结石和1例腹腔感染)及时行剖腹手术,5例(4例继发性胆总管结石和1例胰腺炎漏诊者)行EST/ENBD,其余5例给予生长抑素为主的综合性保守治疗措施,12例均治愈。结论LC术后胰腺炎的主要原因与手术操作并发症有关(如继发性胆总管结石,EST/ENBD术后,胆漏、腹腔感染等);及早发现和正确处理,其预后均较佳;提高对其原因和发病机制的认识及对手术操作相关环节的重视是预防的关键。

妊娠妇女自身免疫性甲状腺疾病筛查、监测和干预研究

目的调查深圳市妊娠早中期妇女自身免疫性甲状腺疾病（AITD）的发病情况，探索建立筛查、监测、干预机制，预防孕母甲状腺功能紊乱特别是甲低对胎儿发育的损害。方法检测深圳市妊娠早中期妇女（12-20周）血清TSH、TPO-Ab水平，必要时进行FT3、FT4检测及其它辅助检查，根据检测结果，按照设定流程进行必要的监测和干预。结果361例被调查者中，共发现10例临床甲低（2．78％），6例临床甲亢（1．66％），初次筛查TPO-Ab阳性率14．13％（51／361），初次筛查TSH异常率5．26％（19／361），发病率和阳性率与AITD家族史密切相关。结论对妊娠早中期妇女进行AITD系统筛查、监测十分必要，应当将TSH和TPO-Ab检测作为孕期保健的常规项目。

CD4^+CD25^+调节性T细胞在ITP患者发病机制中的作用

目的研究慢性特发性血小板减少性紫癜(CITP)患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞数量及Foxp3基因的表达水平,探讨它们在CITP发病机制中的作用。方法分别收集40例CITP患者及健康对照组外周抗凝静脉血,分离纯化T淋巴细胞。利用PE标记的抗-CD4单抗,FITC标记的抗-CD25单抗,作双色流式细胞术,分析CITP患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞百分率,采用RT-PCR法检测T细胞Foxp3 mRNA表达水平。结果CITP患者外周血CD4+T、CD4+CD25+T细胞百分率及T细胞Foxp3 mRNA水平均低于对照组(P<0.01),且CD4+CD25+T细胞百分率与Foxp3 mRNA水平呈正相关。结论CITP患者细胞免疫功能失调,CD4+CD25+调节性T细胞的数量与功能发生改变,T淋巴细胞耐受机制的破坏可能与CITP的发病机制有关。

天花粉蛋白对体内体外单纯疱疹病毒-1的抑制作用

目的探讨天花粉蛋白对体内体外单纯疱疹病毒-1(HSV-1)的抑制作用。方法动物随机分为模型对照组和天花粉蛋白治疗组,小鼠颅内接种HSV-1建立病毒性脑炎模型,治疗组于接种HSV-1前30min腹腔注射天花粉蛋白注射液,接种病毒后12、24、48和96h、7d分别测定各组脑组织病毒滴定度。培养神经细胞分为正常对照组、病毒对照组、药物预处理组,接种病毒后12、24、48和96h分别测定各组培养神经细胞的病毒滴定度。结果天花粉蛋白治疗组于小鼠颅内接种HSV-1后12、24、48和96h、7d脑组织病毒滴度分别为(1.32±0.39)、(1.27±0.44)、(1.33±0.41)、(1.29±0.48)、(1.16±0.45),明显低于模型组(2.91±0.55)、(2.95±0.56)、(2.93±0.54)、(2.89±0.58)、(2.89±0.44),差异有显著性(P<0.001)。药物预处理组在12、24、48和96h后培养神经细胞病毒滴度分别为(1.12±0.34)、(1.18±0.40)、(1.24±0.38)、(1.26±0.42),明显低于病毒对照组(2.65±0.64)、(2.59±0.53)、(2.83±0.55)、(2.82±0.57),差异有显著性(P<0.001)。天花粉蛋白治疗组小鼠存活率为53.3%,模型组小鼠生存率为6.7%;天花粉蛋白预处理组神经细胞存活率均明显高于病毒对照组,差异有显著性(P<0.01)。结论天花粉蛋白对体内体外单纯疱疹病毒-1具有抑制作用。

早期生长反应基因1敲除对肝癌组织基因表达谱的影响

目的:对比观察早期生长反应基因1(EGR-1)敲除大鼠与野生大鼠肝癌模型基因表达谱的变化,探讨EGR-1基因是否参与调控肝癌的生长与转移。方法:应用cDNA表达芯片对EGR-1基因敲除大鼠和野生大鼠肝癌模型的癌标本组织抽提的mRNA进行芯片杂交,并对两者的基因表达谱进行对比分析。将同一基因在一个模型中的表达高于另一个模型的3倍以上作为基因差异表达的判断标准。结果:野生大鼠肝癌模型与EGR-1敲除大鼠肝癌模型相比较,前者有25条已知基因和2条未知基因表达上调,而后者有41条已知基因和23条未知基因表达上调;其中包括与细胞增殖和肿瘤转移相关的重要基因。结论:EGR-1基因敲除可引起大鼠肝癌模型基因表达谱的明显变化;EGR-1很可能参与了肝癌细胞生长与转移的调控。

腺病毒介导的p53基因对人肝癌细胞抑制作用的实验研究

目的:研究重组腺病毒介导的野生型p53基因对人肝癌细胞系HepG2的抑制作用。方法:用MTT比色法检测重组人p53腺病毒(Ad-p53)在不同感染滴度、不同感染时间对人肝癌细胞HepG2生长的抑制作用,用流式细胞仪检测Ad-p53作用后HepG2细胞的凋亡率;采用瘤内注射的方法观察Ad-p53对裸鼠移植瘤的抑制作用。结果:Ad-p53对HepG2细胞有明显的抑制效应,效靶比(MOI)越高、作用时间越长,抑制作用越强;当rAd-p53在125MOI效靶比时,细胞生长基本达到完全抑制;p53转导显著增加了HepG2细胞的凋亡率;瘤内注射Ad-p53后,荷瘤裸鼠的肿瘤生长受到明显抑制。结论:Ad-p53对人肝癌HepG2细胞有明显的抑制效应,其抑制效应具有时间、剂量依赖关系,Ad-p53转导野生型p53基因可能是一种有效的肝癌基因治疗途径。

血液净化治疗毒鼠强中毒的临床研究

目的:探索血液净化对毒鼠强中毒的治疗价值,并评价中毒严重程度评分(thepoisoningseverityscore,PSS)与毒鼠强中毒患者的预后的关系。方法:应用血液净化方法治疗13例毒鼠强中毒患者,与常规治疗的11例患者进行疗效比较,并对所有患者作入院时即刻PSS评分及随访PSS评分。结果:血液净化治疗后患者心肌酶、APACHEⅢ评分及脑电图评分明显低于治疗前(P<0.05),且明显低于常规组治疗后(P<0.05)。入院时PSS评分≥2分的患者死亡率明显高于PSS评分<2分者(P<0.01)。结论:血液净化治疗毒鼠强比常规方法更有效。PSS评分能较准确地判断毒鼠强中毒患者的预后及病情严重程度。

中华眼镜蛇膜毒素和碘-131协同免疫导向对体外鼻咽癌细胞的抑制作用

目的为探索鼻咽癌新的特异性治疗方法,制备了中华眼镜蛇膜毒素(CT)和碘-131(131I)与抗鼻咽癌单克隆抗体BAC5的偶联物,观察其对体外鼻咽癌细胞CNE2的抑制作用。方法采用氯胺T法将131I标记于BAC5,Iodogen法将125I标记于CT,用异型双功能交联剂SPDP偶联BAC5和125I-CT,并用噻唑蓝法观察抑瘤效应。结果125I-CT-BAC5的IC50为9.17×10-8mol/L,131I-BAC5的IC50为5.83×108Bq/L,联合用药后抑制率明显提高。结论125I-CT-BAC5和131I-BAC5对体外培养的CNE2细胞均有抑制作用,二者联合应用则抑制作用更为明显。

重组腺病毒介导的野生型p53基因对HepG2细胞抑制作用的研究

目的:研究重组腺病毒介导的野生型p53基因对人肝癌细胞系HepG2的抑制作用。方法:用MTT比色法检测重组人p53腺病毒(Ad-p53)在不同感染滴度、不同感染时间对人肝癌细胞HepG2生长的抑制作用,用流式细胞仪检测Ad-p53作用后HepG2细胞的凋亡率;采用瘤内注射的方法观察Ad-p53对裸鼠移植瘤的抑制作用。结果:Ad-p53对HepG2细胞有明显的抑制效应,效靶比(MOI)越高、作用时间越长,抑制作用越强;当rAd-p53在125MOI效靶比时,细胞生长基本达到完全抑制;p53转导显著增加了HepG2细胞的凋亡率;瘤内注射Ad-p53后,荷瘤裸鼠的肿瘤生长受到明显抑制。结论:Ad-p53对人肝癌HepG2细胞有明显的抑制效应,其抑制效应具有时间、剂量依赖关系,Ad-p53转导野生型p53基因可能是一种有效的肝癌基因治疗途径。

PKC对ITP患儿T细胞核因子-κB活化的调控研究

目的：探讨蛋白激酶C（PKC）对ITP患儿T细胞核因子-κB（NF-κB）活化的调控作用。方法分别从35例ITP患儿及30例正常健康儿童的外周血中分离出T细胞并分成3组培养，即空白对照组，加入PKC的激活剂PMA的PMA组，同时加入PKC激活剂PMA与抑制剂H-7的PMA＋H-7组，分别用免疫组化法和Western blot检测NF-κB和抑制蛋白κB（I-κB）的表达。结果ITP患儿的PMA组NF-κB活化的细胞百分比显著高于空白对照组和正常儿童的PMA组（P〈0．05），且I-κB水平显著低于上述两组（P〈0．05），而ITP的PMA＋H-7组NF-κB活化的细胞百分比显著低于ITP的PMA组，且I-κB水平显著高于该组（P〈0．05）。结论ITP患儿T细胞NF-κB的活化可能受PKC信号传导的调控，T淋巴细胞PKC-NF-κB信号传导途径的激活可能是ITP的发病机制之一。

^(99m)Tc-DTPA脑池显像在交通性脑积水诊疗中的应用

【目的】探讨99mTc-DTPA脑池显像在交通性脑积水诊疗中的应用。【方法】对23例脑室扩大患者,腰穿注入99mTc-DTPA后1,3,6,24h进行脑池显像,观察示踪剂分布情况,计算6h和24h前位图像的V/T值。【结果】16例出现左右侧脑室持续显影,且24h图像大脑凸面和上矢状窦区放射性分布明显减少,6h和24h前位图像V/T比值分别为0.42±0.28(n=23)和0.37±0.21(n=23),13例V/T值大于32%的患者进行了侧脑室-腹腔分流术。【结论】脑池显像对交通性脑积水的诊断与鉴别诊断、判断是否具有侧脑室-腹腔分流术适应证、预测、观察分流术的效果及评估分流管阻塞的位置和程度等,均具有较高的临床应用价值。

体外反搏对难治性癫痫患儿局灶性脑血流灌注的影响

目的探讨体外反搏治疗对难治性癫痫患儿局灶性脑血流灌注的影响。方法研究对象随机分成治疗组和对照组,治疗组在对照组药物治疗基础上加用体外反搏治疗,体外反搏每天1次,每15次为1个疗程,各疗程间休息10d,共治疗6个疗程。应用SPECT仪测定,观察两组病例入组时和治疗5个月后癫痫灶脑血流灌注变化,以及痫性放电变化。结果体外反搏治疗组治疗后癫痫发作明显减少,显效5例,有效1例,无效3例,有效率66.7%;对照组显效1例,有效1例,无效7例,有效率22.2%。治疗组治疗前均存在不同部位和程度的局灶性脑血流灌注及功能异常,治疗后5例局灶性脑血流灌注及功能明显改善,2例治疗后病灶基本消失,好转率77.8%。治疗后脑电图痫性放电显著减少,好转率55.6%。结论体外反搏治疗能明显改善难治性癫痫患儿局灶性大脑血流灌注,从而抑制痫性放电,控制癫痫发作。

不同通气状态下丙泊酚对颅脑损伤患者脑组织氧分压的影响

过度通气可使颅内压(ICP)迅速下降.临床上急性闭合性颅脑损伤(TBI)患者常用过度通气控制颅内高压,但过度通气可使腩血管收缩,有造成脑缺血,加重继发性脑损伤的危险[1].

调节性T细胞及Foxp3基因在特发性血小板减少性紫癜患儿免疫失调中的作用

特发性血小板减少性紫癜（idiopathic thrombocytopenic purpura，ITP）是一种儿童常见的出血性自身免疫病，但发病机制尚未完全明了，难以找到真正特异而有效的治疗方法。近年研究发现CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（regulation T cell，Tr细胞）是维持机体免疫耐受的重要调控者，在自身免疫病中的作用逐渐成为研究的热点。为探讨CD4^＋CD25^＋调节性T细胞与ITP发生、发展的关系及其临床意义，我们于2005年2月-2006年7月采用流式细胞术和RT—PCR检测了ITP患儿外周血中Tr细胞的数量及相关基因Foxp3的表达。

基底细胞样型浸润性乳腺癌中PTEN、p53、Ki-67的表达及意义

目的探讨基底细胞样型浸润性乳腺癌中PTEN、p53、Ki-67的表达情况,并分析其意义。方法采用免疫组织化学方法检测57例基底细胞样型浸润性乳腺癌中PTEN、p53、Ki-67的表达水平。结果基底细胞样型浸润性乳腺癌中PTEN、p53、Ki-67的阳性表达率分别是38.6%(22/57)、56.1%(32/57)、82.5%(47/57),与对照组非特殊类型浸润性导管癌中PTEN、p53、Ki-67的表达水平相比,差异有统计学意义(P<0.05)。PTEN阳性标本中Ki-67的阳性率(68.2%,15/22)与PTEN阴性标本中Ki-67的阳性率(91.4%,32/35)相比差异显著,统计学分析显示PTEN表达与Ki-67表达呈负相关(P<0.05)。结论抑癌基因PTEN、p53的异常表达与基底细胞样型浸润性乳腺癌的发生和发展有关,PTEN在一定程度上可以抑制肿瘤细胞的增殖。

糖尿病与无症状低血糖

糖尿病患者在治疗过程中出现的低血糖可表现为无症状低血糖。其原因是糖尿病患者存在升血糖调节障碍及中枢神经介导的交感神经肾上腺对低血糖反应的缺陷。无症状低血糖的发生与先前多次发生低血糖(医源性低血糖)、睡眠、运动及自主神经病变有关。先前低血糖可致交感神经肾上腺反应阈值下调,进而导致无症状低血糖,称为低血糖性自主神经功能障碍。无症状低血糖的防治主要是避免发生先前低血糖(医源性低血糖)。

一氧化氮合酶抑制剂对软骨修复组织胶原表达的影响

目的探讨应用苦味酸-天狼猩红染色观察诱导型一氧化氮合酶(iNOS)抑制剂对关节软骨修复组织胶原表达的影响及胶原定量表达的新方法。方法24只新西兰大白兔双侧股骨髁间关节面造成全层软骨缺损,随机均分为对照组、骨形态发生蛋白(BMP)组和iNOS抑制剂S-甲基异硫脲(SMT)组。术后16周及1年各组分别处死4只动物。应用苦味酸-天狼猩红染色检测胶原的分布情况,图像分析技术定量胶原的表达及进行修复组织软骨厚度的测量。结果图像分析结果经GLM-GeneralFactorialANOVA作均数的显著性检验,显示术后16周SMT组Ⅰ型胶原表达量为61.8%,明显少于BMP组的83.6%,和对照组的89.4%相比,差异有统计学意义(F=23.562);术后1年SMT组Ⅰ型胶原表达量为65.9%,明显少于BMP组88.5%和对照组94.6%,差异有统计学意义(F=36.747)。术后16周SMT组Ⅱ型胶原表达量为36.5%,明显多于BMP组12.6%和对照组8.2%,差异有统计学意义(F=68.326);术后1年SMT组Ⅱ型胶原30.7%的表达量多于BMP组的10.8%和对照组的4.5%,差异有统计学意义(F=83.876)。术后16周及1年后SMT组软骨厚度(2.08±0.6,1.85±0.56),与BMP组(1.56±0.38,0.67±0.31)和对照组(0.64±0.43,0.24±0.10)相比,差异有统计学意义(F值分别为57.836,45.087)。结论iNOS抑制剂SMT的应用能明显增加Ⅱ型胶原表达和软骨厚度,对于维持软骨表型有积极意义。而苦味酸-天狼猩红染色是一种观察软骨修复组织中胶原表达的理想方法。

一氧化氮合酶抑制剂对软骨修复组织蛋白多糖代谢和胶原表达的影响

目的研究诱导型一氧化氮合酶(iNOS)抑制剂对软骨修复组织蛋白多糖代谢和胶原表达的影响。方法双侧股骨髁间关节面全层软骨缺损新西兰大白兔24只,随机均分为对照组、骨形态发生蛋白(BMP)组和iNOS抑制剂S-甲基异硫脲(SMT)组。术后1年处死动物。应用组织切片番红O-快绿染色检测蛋白多糖,苦味酸-天狼猩红染色检测胶原的分布情况,利用图像分析技术检测糖胺聚糖含量和胶原的表达以及软骨厚度。结果术后1年,SMT组软骨修复组织番红O-快绿染色百分率(89.28%)明显高于BMP组(36.54%)和对照组(13.4%),SMT组软骨修复组织番红O-快绿染色平均灰度值(134.5)分别为BMP组(56.8)和对照组(26.4)的2.5倍和7倍。修复组织软骨平均厚度,SMT组(1.75cm)分别为BMP组(0.76cm)和对照组(0.25cm)的2倍和7倍。SMT组修复组织Ⅰ型胶原表达量为65.9%,明显少于BMP组(88.5%)和对照组(94.6%);Ⅱ型胶原表达量(30.7%)多于BMP组(10.8%)和对照组(4.5%)。结论iNOS抑制剂SMT的应用能明显增加软骨修复组织中糖胺聚糖含量,并能明显增加Ⅱ型胶原表达,对于维持软骨表型和提高软骨修复质量有积极意义。