一例儿童Leigh综合征

Leigh综合征(Leigh Syndrome,LS)又称亚急性坏死性脑脊髓病(SNEM),是一种罕见的、由遗传基因缺陷导致的以脑和肌肉受累为主的线粒体疾病。其特征性表现为肌无力、慢性进行性眼外肌麻痹、智能障碍、共济失调、发作性肌阵挛、视神经病变等。典型影像学MRI表现为基底节区及脑干对称性异常信号。据目前报道,约48%至80%的患者在1岁以内发病[1,2],幼儿期发病者少见。另外,近年国外研究显示,线粒体疾病患者中仅约7-10%可检测出线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)变异[1,3],更鲜见合并核基因变异者。

组蛋白在脓毒症相关细胞因子分泌及细胞毒效应中的作用研究

目的 探讨组蛋白在脓毒症相关细胞因子释放中的作用,研究组蛋白细胞毒效应及可能作用途径。方法用不同浓度组蛋白H4(Histone H4,hH4)刺激人单核细胞(THP-1)并与加入IgG及TLR-4抗体干预组对比,测定不同时间点细胞上清液中细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-10的浓度;在含组蛋白的培养基中加入抗Toll样受体4 (tolllike receptor,TLR-4)抗体后孵育THP-1及人血管内皮细胞(human microvascular endothelial cell,HMEC),通过细胞上清液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)水平及流式细胞检测评估细胞损伤凋亡程度。结果 ①低浓度组蛋白处理组IL-1β水平与对照组采用student’s t检验方法比较,P>0.05,无统计学差异;IL-10及TNF-α水平不同程度升高,中、高浓度蛋白处理组前述各细胞因子浓度均升高,抗TLR-4抗体干预组炎症因子水平较对照组及IgG干预组下降,P<0.01,差异显著。②经含高浓度组蛋白的混合培养基孵育24h后,THP-1及HMEC组清液中LDH含量采用Mann-Whitney u检验方法比较,均较标准培养基组升高,P<0.05,有统计学意义。流式细胞计数显示凋亡细胞比例上升。加入IgG组上清液LDH含量变化无统计学意义;加入TLR-4抗体组上清液LDH水平与凋亡细胞的比例均显著降低。③对于THP-1细胞,与仅含组蛋白的对照组比较,加入TLR-4抗体的实验组凋亡细胞比例与细胞因子水平均显著下降,且凋亡细胞比例的变化率(-63.77%)较细胞因子变化率(36.14%至45.18%)高。结论 ①组蛋白H4在离体环境下可刺激THP-1细胞分泌多种细胞因子;②组蛋白H4对THP-1和HMEC均表现出细胞毒性效应;③上述两种效应均可被TLR-4抗体拮抗,TLR-4可能为胞外组蛋白参与脓毒症发病的途径之一;TLR-4抗体可能主要通过拮抗组蛋白的细胞毒效应发挥抗炎作用。

一岁以内脓毒症患儿血清组蛋白H4水平的测定

目的 研究1岁以内脓毒症患儿血清组蛋白H4（hH4）的浓度变化,探讨hH4在婴儿脓毒症中的可能作用.方法 回顾性分析2016年11月至2017年12月于深圳市妇幼保健院PICU住院治疗的40例1个月～1岁脓毒症患儿,按小儿危重病例评分（PCIS）评估结果分为非危重组（n=21）、危重组（n=11）和极危重组（n=8）,40例相同年龄组别健康体检患儿作为对照组,收集各病例组入院第1天、第3天及对照组血清标本,测定其血清hH4浓度并作统计学分析.结果 各病例组入院第1天血清hH4水平非危重组（97.22±16.92）μg/L,危重组（148.09±33.00）μg/L,极危重组（195.04±45.85）μg/L,均高于健康对照组（46.07±18.06）μg/L,差异有统计学意义（H=64.16,P〈0.001）;第3天血清hH4水平非危重组（98.96±16.29）μg/L、危重组（152.57±29.04）μg/L、极危重组（239.52±49.84）μg/L,前两者血清hH4浓度较第1天变化不显著,极危重组该指标显著升高（Z=-2.67,P=0.008）.以出院日或入院第7天为观察终点,存活组第1天血清hH4浓度为115.21（96.38,136.15）μg/L,死亡组为241.53（229.19,245.07）μg/L,两者差异有统计学意义（Z=-2.80,P=0.005）;第3天存活组血清hH4浓度为150.05（128.28,181.06）μg/L,死亡组为277.10（245.34,292.62）μg/L,两者差异有统计学意义（Z=-2.54,P=0.011）.病例组入院第1天血清hH4浓度与PCIS呈明显负相关（r=-0.853,P〈0.001）,第3天血清hH4水平与当日PCIS评分存在明显负相关性（r=-0.554,P〈0.001）.结论 儿童hH4浓度水平随脓毒症严重程度增高而显著增高,随时间推移,血清hH4水平与疾病的进展及预后存在明显负相关性,提示组蛋白可能在儿童脓毒症疾病发展过程中发挥了一定的调节作用.

曲古霉素A对脂多糖诱导的人微血管内皮细胞损伤和凋亡的影响

目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古霉素A(TSA)对脂多糖(LPS)诱导的人微血管内皮细胞(HMEC)损伤和凋亡的影响。方法以HMEC为实验细胞,建立LPS诱导的脓毒症细胞模型,根据处理方式不同分为3组:空白对照组(加入磷酸盐缓冲液150μL)、LPS处理组(加入5μg/mL的LPS 150μL)、LPS+TSA干预组(加入5μg/mL的LPS和500μg/L的TSA 150μL)。各组细胞处理后继续培养24 h和48 h,ELISA法检测细胞培养液上清中乳酸脱氢酶(LDH)浓度并使用流式细胞术检测细胞凋亡程度,进行组间比较。结果与空白对照组比较,LPS处理组LDH浓度在24 h[(4.67±1.27)ng/L比(11.57±0.83)ng/L]和48 h[(7.93±0.80)ng/L比(12.72±0.89)ng/L]显著升高;与LPS处理组比较,LPS+TSA干预组LDH浓度在24 h[(6.01±0.29)ng/L]和48 h[(5.96±0.27)ng/L]明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。与空白对照组相比,LPS处理组HMEC细胞凋亡率在24 h[(0.92±0.89)%比(1.66±0.09)%]和48 h[(1.09±0.14)%比(5.01±0.16)%]明显升高;与LPS处理组比较,LPS+TSA干预组HMEC细胞凋亡率在24 h[(1.36±0.01)%]和48 h[(4.19±0.23)%]有所下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论TSA在脓毒症中具有降低细胞损伤和减少细胞凋亡的保护作用。