PTP-1B小干扰RNA对缺氧/复氧诱发的大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的探讨蛋白质酪氨酸磷酸酶-1B(PTP-1B)小干扰RNA对缺氧/复氧诱发的大鼠心肌细胞凋亡的影响及其分子机制。方法分离的大鼠心肌细胞在PTP-1B小干扰RNA转染后培养24h,然后缺氧处理4h,再复氧6h(4H/6R)。心肌细胞的凋亡用TUNEL染色法测定;Western blot检测心肌细胞PTP-1B和磷酸化Akt的表达水平;比色法衡量凋亡酶Caspase3和Caspase8的活性;共免疫沉降法检测与Fas受体结合的PTP-1B的数量。结果缺氧/复氧的处理不仅严重损伤了培养的大鼠心肌细胞,同时也上调了心肌细胞PTP-1B蛋白的表达水平;PTP-1B小干扰RNA显著地减少了缺氧/复氧诱发的心肌细胞凋亡,PTP-1B小干扰RNA组与阴性对照组的凋亡指数分别为:(12.1±1.4)%和(23.2±1.6)%,P<0.05;与阴性对照组比较,PTP-1B小干扰RNA显著增加了Akt的磷酸化水平,抑制了Caspase3和Caspase8的酶活性,同时降低了PTP-1B与Fas受体的结合。结论PTP-1B是一个缺氧/复氧(4H/6R)诱发的心肌细胞凋亡的关键调节因子,针对PTP-1B的小干扰RNA可有效地抑制心肌细胞的损伤。其机制可能与增加的Akt磷酸化水平,凋亡酶Caspase3和Caspase8的酶活性被抑制,以及PTP-1B与Fas受体结合的减少相关联。