浅谈提高内分泌科临床带教质量的几点思考

内分泌科属于临床小科,实习时间短,但又是内科实习不可或缺的重要科室;内分泌知识点繁杂且不易掌握,而代谢病的发生正在逐年增高,新知识的更迭日新月异,只有紧跟前沿、特色教育、灵活授课的教学方式,才能在较短的时间内给学生较大的收获。随着人民生活水平的提高,

现代医学发展趋势下内分泌教学改革的一点思考

在21世纪医学发展趋势下,为进一步提高内分泌教学质量,提出关于采用多媒体与网络技术相结合,双语教学和PBL教学方法相结合的教学改革尝试,为提高内分泌临床教学水平提供可借鉴的思路与方法。

氯沙坦对血管紧张素Ⅱ损伤RIN-m细胞胰岛素分泌功能的保护及机制探讨

目的观察氯沙坦对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)损伤β细胞(RIN-m)功能的保护,并对其机制进行探讨。方法常规培养RIN-m细胞,分为空白对照组、100nmol/LAngⅡ组和氯沙坦预处理组,各组干预24h后使用放射免疫法检测基础(3.3mmol/L)和葡萄糖(16.7mmol/L)刺激下RIN-m细胞胰岛素分泌量;DCFH-DA染色流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平;RT-PCR和Western blotting分别检测RIN-m细胞解偶联蛋白2(UCP2)mRNA和蛋白的表达。结果①各组基础胰岛分泌没有显著差异(P>0.05),在高糖刺激下,100nmol/LAngⅡ组胰岛素分泌量明显低于空白对照组(P<0.001),氯沙坦预处理组胰岛素分泌量与空白对照组无显著差异(P>0.05),但较AngⅡ组明显增加(P<0.001);②100nmol/LAngⅡ组细胞内ROS水平、UCP2mRNA和蛋白表达均较空白对照组明显增加(P<0.001),氯沙坦预处理组与空白对照组无显著差异(P>0.05),但较100nmol/LAngⅡ组显著降低(P<0.001)。结论AngⅡ损伤β细胞葡萄糖刺激胰岛素分泌(GSIS)功能,氯沙坦预处理可以拮抗AngⅡ的作用,减少β细胞内ROS水平,下调UCP2表达,最终对β细胞起到保护作用。

西吡氯铵含片对口源性口臭患者口腔内致臭菌的影响

目的研究西吡氯铵含片对口源性口臭致臭菌的抑制作用,探讨西吡氯铵含片治疗口源性口臭的效果。方法(1)选择中间普雷沃菌,致臭菌牙龈卟啉单胞菌、具核梭杆菌以及唾液链球菌作为实验菌,通过体外抑菌实验确定西吡氯铵含片对四种实验菌的最低抑菌浓度(MIC);(2)使用硫化物检测仪Halimeter测量加入西吡氯铵含片的三种菌培养液厌氧培养4 h和8 h后产生的挥发性硫化物(VSCs)数值;(3)通过检测药物作用的持续时间长短以及VSCs水平的下降情况,来评价西吡氯铵含片在人体内抑制致臭菌,降低挥发性硫化物的产生,消除口臭的功效。结果(1)西吡氯铵含片对所有实验细菌均有较强的抑菌作用;(2)西吡氯铵含片抑制牙龈卟啉单胞菌,中间普雷沃菌,具核梭杆菌产VSCs的效果明显,其效果与氯己定的抑菌效果相近;(3)与蒸馏水漱口相比,口腔含服一片西吡氯铵含片后,半胱氨酸激发VSCs的水平下降百分比明显(P<0.05),作用持续时间为230 min。结论西吡氯铵含片对口源性口臭患者口腔内致臭菌有明显的杀灭作用,对治疗口源性口臭有良好的效果。

急性胰腺炎肝巨噬细胞表达的FasL在肝损伤中的作用

目的:探讨肝巨噬细胞表达的Fas配体(FasL)在实验性急性胰腺炎(AP)肝损伤中的作用。方法:建立AP小鼠模型。雄性ICR小鼠30只,随机分为5组,每组6只,其中一组为对照组,腹腔注射0.1m l等渗盐水,4 h后心脏穿刺抽血,并处死小鼠留取标本;另4组均腹腔注射雨蛙素50μg/kg,每4 h注射1次至24 h,分别在4、8、16和24 h心脏穿刺抽血,并处死小鼠留取标本。用自动化生化仪检测血清ALT、AST、LDH和AMY的浓度,用ELISA试剂盒检测血清FasL浓度,用W estern b lot检测肝FasL蛋白的表达。结果:雨蛙素诱导的小鼠AP组与对照组相比,各个检测时间点血清AST、ALT、LDH、AMY水平明显增加。在4、8、16和24 h时AP组血清FasL浓度为(532.17±46.92)、(496.73±32.62)、(485.57±18.31)和(448.08±26.44)pg/m l,均显著高于对照组(80.34±6.81)pg/m l,AP组各检测时间点肝FasL蛋白表达也增加,与对照组相比,差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论:AP通过上调肝巨噬细胞表达的FasL介导肝损伤。

抗坏血酸、β-甘油磷酸钠和地塞米松联合诱导大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞的分化

背景：成骨细胞来源于骨髓中的间质干细胞,但骨髓间充质干细胞经过高度扩增后,细胞群会出现生长速率减慢等变化,并出现没有分裂倾向的扁平状细胞。目的：进一步验证在一定诱导条件下,体外分离培养的大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞的定向分化情况。设计、时间及地点：细胞学体外对照观察,于2007-03/10在南方医科大学解剖实验室完成。材料：4周龄SD大鼠3只,由南方医科大学实验动物中心提供。成骨诱导过程所使用的抗坏血酸、地塞米松、β-甘油磷酸钠为美国Sigma公司产品。方法：采用密度梯度离心＋贴壁筛选法体外分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞,融合后用EDTA及胰蛋白酶消化,按1∶3传代培养。取生长良好的第2代骨髓间充质干细胞,调整细胞数量为1×10^7L^-1,分为2组：对照组加入含体积分数为0.1胎牛血清的DMEM-LG培养基,诱导组加入成骨诱导液进行培养,成骨诱导液为含50mg/L抗坏血酸、0.1μmmol/L地塞米松、0.5mmol/Lβ-甘油磷酸钠、体积分数为0.1胎牛血清的DMEM-LG培养基。主要观察指标：骨髓间充质干细胞的生物学特性,成骨诱导前后细胞碱性磷酸酶活性,诱导后矿化结节的形成。结果：刚接种的骨髓间充质干细胞呈圆形;原代培养24h后大部分细胞贴壁生长,呈短梭形、三角形、多边形;72h时贴壁细胞分裂增殖,逐渐呈长梭形;至第5天可见明显细胞集落形成;第9-10天细胞达80%以上融合;传代后细胞贴壁和增殖速度加快,呈有规则的方向性排列。与诱导前比较,骨髓间充质干细胞成骨诱导7d后碱性磷酸酶活性明显提高（P〈0.05）。连续成骨诱导20d后,诱导组可见多个散在分布的圆形不透明钙化结节,对照组未见矿化结节沉积。结论：在抗坏血酸、β-甘油磷酸钠和地塞米松联合诱导下,大鼠骨髓间充质干细胞可定向分化为成骨细胞。

大鼠胰岛微血管内皮细胞分离、纯化与培养的改进

目的:建立稳定可靠的大鼠胰岛微血管内皮细胞分离培养方法。方法:分离纯化大鼠胰岛后进行内皮细胞选择性培养,使用UEA-1包被的免疫磁珠对胰岛微血管内皮细胞进行纯化。免疫荧光法检测经典的内皮细胞标志物第Ⅷ因子相关抗原(vWF)和CD34的表达和吞噬Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白(Dil-Ac-LDL)能力。结果:胰岛培养4-5d后,可见内皮细胞从贴壁的胰岛内爬出,通过UEA-1包被的免疫磁珠筛选出胰岛微血管内皮细胞接种后24h细胞开始贴壁。该细胞具有单层生长、接触抑制的特性。大鼠胰岛微血管内皮细胞表达vWF和CD34,可摄取Dil-Ac-LDL。结论:本研究方法是一种较为高效的分离、纯化和培养大鼠胰岛微血管内皮细胞的方法。

RGD肽修饰壳聚糖作为种植体表面基因载体的研究

目的探索改善钛种植体表面处理的新方法,提高种植体植入后成骨效率。方法将RGD肽与壳聚糖(CS)通过酰化反应发生偶联形成RGD-CS,采用复凝聚法制备RGD-CS/pDNA复合体,并将RGD-CS/pDNA复合体接枝到经物理、生化处理后的纯钛表面。采用红外光谱仪和元素分析仪对RGD-CS进行化学结构的表征检测,凝胶电泳阻滞试验结合原子力显微镜观察RGD-CS对质粒的包裹情况及RGD-CS/pDNA复合体的形态,EB染色法检测钛片表面RGD-CS/pDNA复合体的接枝效果。结果红外光谱检测结合元素分析表明,CS和RGD肽偶联成功;凝胶电泳阻滞试验结合原子力显微镜观察表明,在N/P≥2时,RGD-CS与pDNA完全复合,RGD-CS/pDNA复合体呈类球形;EB染色表明RGD-CS/pDNA复合体接枝钛片成功。结论经RGD肽修饰的壳聚糖可以携带pDNA作为钛种植体表面质粒包装的载体。

艾塞那肽对间歇性高糖环境下胰岛INS-1细胞的保护作用

目的评价间歇性高糖对胰岛β细胞的损害及艾塞那肽(Exenatide)的保护作用。方法取大鼠胰岛INS-1细胞分为5组;正常糖(5.5mmol/L)对照组、恒定性高糖(30mmol/L)组和恒定性高糖+Exenatide(100nmol/L)组按分组所述对细胞进行培养,间歇性高糖组和间歇性高糖+Exenatide组采用高糖与正常糖交替(每24h更替1次)培养细胞。培养7d后检测各组细胞内活性氧自由基(ROS)和黄嘌呤氧化酶(XOD)水平,同时检测细胞增殖和凋亡情况。结果与正常糖对照组比较,恒定性高糖组及间歇性高糖组细胞内ROS、XOD水平和细胞凋亡率明显增加(P<0.01),细胞增殖活性明显降低(P<0.01),尤以间歇性高糖组更为明显。恒定性高糖+Exenatide组的ROS、XOD水平和细胞凋亡率明显低于恒定性高糖组(P<0.05),而间歇性高糖+Exenatide组明显低于间歇性高糖组(P<0.01);恒定性高糖+Exenatide组和间歇性高糖+Exenatide组的细胞增殖活性与正常糖对照组无统计学差异。结论间歇性高糖和恒定性高糖均能增加大鼠INS-1细胞内氧化应激水平,从而促进细胞凋亡、抑制细胞增殖,尤以间歇性高糖更为明显;Ex-enatide可显著减轻高糖对细胞的损害。

碘克沙醇及Ficoll-400分离纯化大鼠胰岛细胞的效果对比

目的:分别使用碘克沙醇和Ficoll-400密度梯度液纯化大鼠胰岛细胞,比较两者分离纯化大鼠胰岛细胞的收获量、纯度、活性和功能.方法:将20只SD大鼠随机分为碘克沙醇纯化组和Ficoll-400纯化组,以胶原酶P消化分离SD大鼠胰腺,分别采用碘克沙醇及Ficoll-400密度梯度液来纯化胰岛细胞.通过DTZ染色,计数胰岛细胞的数量和纯度,用胰岛素释放试验和胰岛移植评估胰岛细胞的功能.结果:碘克沙醇-HCA液纯化组的胰岛细胞收获量及纯度与Ficoll-HCA无明显差别,碘克沙醇-HCA组纯化的胰岛细胞活率则显著高于Ficoll-HCA组(93.3%±3.5% vs 84.8%±3.8%,P<0.01),同时胰岛细胞逆转糖尿病大鼠高血糖状态的时间显著延长(11.4±2.1 vs 7.0±1.6 d,P<0.05).结论:与Ficoll-400相比,使用碘克沙醇纯化大鼠胰岛可提高胰岛细胞的活率及功能.

ACE_2基因A9570G多态性与2型糖尿病及糖尿病心肌病的相关性研究

目的探讨血管紧张素转化酶2(angiotensin l converting enzyme2,ACE2)基因A9570G多态性与2型糖尿病(Type 2 diabetes,T2DM)及糖尿病心肌病(diabetic cardiomyopathy,DCM)的相关性。方法选择广东地区无血缘关系的T2DM患者共358例,其中84例并发DMC,所有病人按是否并发DMC分为DMC组和DM组,应用聚合酶链反应和限制性内切酶片段长度多态性的方法检测ACE2基因A9570G多态性,并结合临床、生化指标及超声心动图参数进行分析。结果在男性,对照组和T2DM组等位基因频率及基因型构成差异无统计学意义(χ2=0.002,P=0.964),但DCM组G等位基因频率/G基因型分布高于对照组及T2DM组,差异有统计学意义(χ2=4.409,P=0.036,χ2=6.105,P=0.013)。在女性,三组间等位基因频率及基因型构成差异无统计学意义(χ2=0.037,P=0.981及χ2=0.890,P=0.926)。根据不同基因型对DMC组患者进行亚组分析发现,男性G基因型患者反映心脏早期舒张功能的室间隔舒张末期厚度(IVSTd)值明显高于A等位基因,差异有统计学意义(t=2.243,P=0.029);女性则未观察到这种差异(F=1.156,P=0.324)。结论ACE2基因A9750G多态性可能与男性T2DM并发DCM的遗传易感性相关,并且与其早期舒张功能不全严重程度有一定关系。

骨髓腔注射骨髓间充质干细胞防治模拟失重大鼠的骨质疏松

背景:模拟失重条件下自身骨髓间充质干细胞的增殖受到抑制,并且向成骨细胞分化的能力减弱,造成骨量减少与骨微结构的破坏,最终导致骨质疏松。目的:观察同种异体骨髓间充质干细胞骨髓腔注射对模拟失重大鼠胫骨骨密度和骨组织微结构的影响。方法:将雄性SD大鼠随机分为自由活动对照组、尾吊模拟失重组、细胞治疗组(尾吊模拟失重同时给予双侧胫骨骨髓腔注射成骨诱导的同种异体BMSCs细胞)。结果与结论:与自由活动对照组相比,尾吊模拟失重组胫骨骨密度、骨小梁面积百分比、骨小梁数量和厚度均显著降低(P<0.01),骨小梁分离度显著增加(P<0.01)。与尾吊模拟失重组相比,细胞治疗组中胫骨骨密度、骨小梁面积百分比、骨小梁数量和厚度均显著增加(P<0.01),骨小梁分离度显著降低(P<0.01)。说明骨髓腔注射能够增加模拟失重大鼠骨密度,改善骨超微结构,减缓骨量丢失,有效防治骨质疏松。

实时定量PCR法分析2型糖尿病患者肠道乳酸杆菌菌种数量的改变

目的:明确2型糖尿病患者与正常对照人群比较是否存在总乳酸杆菌及其具体菌种嗜酸乳杆菌、保加利亚乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌数目的差异,以及探索乳酸杆菌与血糖、血脂等代谢指标是否相关.方法:选取2型糖尿病患者50人、正常对照者30人作为研究对象,两组性别、年龄、BMI相匹配.检测糖尿病患者空腹血糖、餐后2h血糖、血脂、C反应蛋白等指标,并收集糖尿病患者及对照者粪便提取细菌总DNA,通过实时荧光定量PCR方法测定目标细菌的拷贝数.结果:2型糖尿病组肠道乳酸杆菌(P<0.001)及嗜酸乳杆菌(P<0.001)、保加利亚乳杆菌(P<0.001)、干酪乳杆菌(P=0.008)、鼠李糖乳杆菌(P<0.001)显著高于对照组,且乳酸杆菌与低密度脂蛋白胆固醇显著负相关(P=0.04).结论:2型糖尿病患者肠道总乳酸杆菌及其某些具体菌种数量增多,乳酸杆菌数量的改变对血脂也存在影响.通过饮食调节肠道乳酸杆菌含量可能有助于改善糖尿病、高脂血症等代谢性疾病.

1,25(OH)_2D_3对模拟失重大鼠股骨远端松质骨的扫描电镜观察

目的观察1,25-二羟维生素D3对模拟失重状态下大鼠股骨远端松质骨超微结构的影响。方法SPF级雄性SD大鼠66只,随机分为自由活动组、悬吊对照组和悬吊实验组,同时悬吊实验组给予1,25-二羟维生素D3皮下注射(0.05μg/kg.d),实验期为14d、28d。取股骨远端沿冠状面切开,蒸馏水冲洗净骨髓腔,乙醇梯度脱水,表面喷金后利用扫描电镜对大鼠股骨远端松质骨的形态结构进行观察。结果悬吊对照组与自由活动组比较大鼠骨小梁变细,断裂,数目减少,胶原纤维排列杂乱,微损伤增多;悬吊实验组较悬吊对照组大鼠骨小梁数目增多,胶原纤维排列规整,未见明显微骨折发生,且悬吊14d实验组较悬吊28d实验组保持了更好的微结构。结论1,25-二羟维生素D3能够对模拟失重状态下大鼠股骨远端松质骨的超微结构产生有利影响。

间歇性高糖对胰岛β细胞生长及细胞周期进程的影响

背景:间歇性高糖可阻滞胰岛β细胞生长,增加β细胞的凋亡,但具体作用机制尚不清。目的:观察间歇性高糖对大鼠胰岛素细胞增殖、凋亡及对细胞周期进程的影响。方法:实验对大鼠胰岛素细胞进行培养,分为正常糖对照组,恒定性高糖组和间歇性高糖组,分别含葡萄糖5.5,30,30和5.5mmol/L间歇换液。采用细胞计数试剂盒检测细胞增殖活性,流式细胞仪测定细胞周期,Annexin-V/PI双标流式细胞术检测细胞凋亡,应用Westernblot检测细胞周期调控蛋白CyclinD1的表达水平。结果与结论:与正常糖对照组相比,恒定性高糖组及间歇性高糖组均明显抑制大鼠胰岛素细胞细胞的生长(P<0.01),增加大鼠胰岛素细胞的凋亡(P<0.01),明显抑制细胞周期进程,使大鼠胰岛素细胞的细胞周期更多滞留在G0/G1期(P<0.01),能显著减弱细胞周期调控蛋白CyclinD1的表达(P<0.01)。与恒定性高糖组相比,间歇性高糖以上各指标作用均更显著(P<0.01)。结果证实,间歇性高糖能够抑制大鼠胰岛素细胞的生长,增殖和诱导凋亡,其机制可能是通过降低CyclinD1的活性,使细胞阻滞在G0/G1期,抑制细胞周期进程,从而减弱细胞的增殖活性。

小鼠胚胎成纤维细胞重编程为多能干细胞

背景:目前胚胎干细胞研究面临伦理争议及来源困难等诸多问题,人们一直在寻找不需破坏胚胎或卵细胞的建立多潜能干细胞的方法。目的:构建小鼠诱导性多潜能干细胞系并对其进行鉴定。方法:利用反转录病毒将3个干细胞基因Oct4、Sox2、Klf4导入小鼠胚胎成纤维细胞中,将其诱导为多潜能干细胞。通过镜下观察、碱性磷酸酶染色、反转录PCR(RT-PCR)、免疫荧光实验及畸胎瘤形成实验等对诱导性多潜能干细胞形态、多能性基因表达情况、干细胞表面标记及全能性等进行鉴定分析。结果与结论:从小鼠胚胎成纤维细胞诱导而来的诱导性多潜能干细胞镜下观察呈典型的克隆状生长,圆形或椭圆形,与饲细胞分界清楚;RT-PCR、碱性磷酸酶染色及免疫荧光检测诱导性多潜能干细胞高表达胚胎干细胞相关基因及蛋白;种植在免疫缺陷鼠体内能够形成向内中外3个胚层分化的畸胎瘤,表明诱导性多潜能干细胞具有多潜能性。通过转导3种重编程因子可以将小鼠成纤维细胞诱导为类似胚胎干细胞的多潜能干细胞。

看图对话教育模式对2型糖尿病病人自我护理行为及血糖控制的影响

目的探讨看图对话教育模式对2型糖尿病病人血糖控制及自我护理行为的影响。方法按入院时间次序编号,根据随机数字表法,将84例2型糖尿病病人分为实验组和对照组,每组各42例。对照组实施传统的糖尿病知识教育,实验组采用看图对话教育模式。1次/周,60~90 min/次,共8周。比较干预前后两组病人空腹血糖、餐后2 h血糖、糖化血红蛋白（gycated hemoglobin,Hb Alc）值及自我护理行为的差异。结果干预后两组病人各项血糖指标值比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）。干预后除遵医嘱服药外,两组病人饮食控制、规律运动、血糖监测、足部护理和血糖异常处理评分比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论实施看图对话教育模式,提高了糖尿病病人自我护理行为,从而提高血糖控制水平。

基础胰岛素新剂型——地特胰岛素

从上个世纪20年代胰岛素在临床领域的问世，到目前各式各样的胰岛素及其类似物的广泛应用，胰岛素治疗糖尿病已经由单纯的延长生命衍变为一种颇具艺术技巧的治疗手段。内分泌医生不但要会用胰岛素，更要懂得如何针对不同患者选择合适的胰岛素；既要最大程度地使患者的糖代谢状态接近正常，又要尽可能的减少发生低血糖的风险。