股动脉假性动脉瘤外科治疗18例分析

回顾性分析股动脉假性动脉瘤1 8例的临床资料。1例因介入穿刺引起的股动脉假性动脉瘤行局部压迫治疗,1 5例行假性动脉瘤切除术,2例行股动脉结扎术。结果示1例股动脉结扎术患者术后出现肢体坏死,行膝上截肢后康复出院,另1 7例痊愈出院。提示对股动脉假性动脉瘤行动脉瘤切除、股动脉端端吻合可作为首选的手术方式。

外科手术机器人的研究进展及临床应用

手术机器人是近年发展起来的计算机辅助内窥镜手术器械控制系统。手术机器人的出现使外科手术模式发生了革命性的变化。由于其突出的优越性,受到越来越多的关注,现已逐渐推广应用于临床各科疾病的诊治,并取得了良好的社会和经济效益。本文就近年来国内外手术机器人系统的研究进展和临床应用现状作一简要综述,对外科手术机器人的优势、局限性和存在的缺陷进行总结,并对未来外科手术机器人的发展方向进行预测。

原发性肝癌合并肝硬化脾功能亢进的外科治疗

原发性肝癌有75-90%合并有肝硬化,11-33%继发性脾脏肿大和脾功能亢进.脾肝亢硬化的存在,增加了手术的风险,影响患者的预后,因此,肝癌合并肝硬化脾功能亢进是肝癌外科治疗的难题.近年来,随着对脾脏生理功能、肿瘤免疫功能方面的基础及临床研究的全面深入,人们认识到脾脏在抗肿瘤免疫中发挥重要作用,但其抗肿瘤作用具有双相性.在肿瘤早期,脾脏具有抗肿瘤作用,宜予保留;晚期,脾脏不仅无功能且表现为负性免疫作用.对肝癌合并肝硬化脾功能亢进患者行同期联合切除,不仅可改善术后肝功能,还可减少肝癌复发转移,提高远期疗效.而且切脾后可纠正脾亢所致的外周血白细胞、血小板的减少,提高术后预防性和治疗性栓塞化疗的安全性.

青蒿琥酯诱导瘢痕成纤维细胞凋亡的实验研究

目的探讨青蒿琥酯（artesunate，Art）诱导皮肤瘢痕成纤维细胞凋亡的作用及机制。方法取自愿捐献的人耳垂增生性瘢痕，采用组织块贴壁法进行细胞培养。经免疫组织化学染色鉴定后，取第3～5代成纤维细胞，采用含60、120和240mg／LArt培养液各5ml培养作为实验组，仅加入等量的培养液作为对照组。于倒置显微镜及透射电镜观察，采用流式细胞仪观察细胞凋亡及细胞周期。另取第3～5代成纤维细胞，实验组采用30、60和120mg／LArt培养液，对照组仅加入等量的培养液，观察细胞内钙离子的变化。结果原代成纤维细胞呈典型的梭形贴壁生长，免疫组织化学鉴定细胞波形蛋白呈阳性表达；倒置显微镜下观察Art在60～240mg／L浓度范围内抑制成纤维细胞生长且呈剂量及时间依赖性，细胞出现凋亡征象；透射电镜观察，各实验组出现染色质浓缩，沿着核膜排列，甚至核碎裂现象。细胞周期分析显示各实验组与对照组比较，凋亡细胞比例、处于G0～G1、S、G2～M期细胞数差异均有统计学意义（P〈0．05），实验组均出现典型的凋亡峰，且随药物浓度增加，峰值越大。Art在30～120mg／L作用成纤维细胞24h可引起细胞内钙离子浓度持续增加，与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论Art通过作用于成纤维细胞周期诱导细胞凋亡，细胞内钙离子浓度升高可能是其诱导成纤维细胞凋亡的机制之一。

大鼠骨髓间充质干细胞体外分离培养表型鉴定与标记

目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外分离培养、表型鉴定和标记的方法,为临床进行细胞移植治疗心、肝、脑等器官急性衰竭提供种子细胞。方法无菌条件下取大鼠股骨、胫骨和腓骨,用冲洗法冲出骨髓,用直接贴壁法分离纯化MSCs,体外扩增,用免疫细胞化学法及流式细胞仪分别对培养的MSCs进行鉴定,并检测第3代MSCs的细胞周期。结果体外培养的原代MSCs 72 h内可见有少量贴壁细胞,7 d左右达到汇合。免疫细胞化学示,MSCs CD29、CD44、CD73、CD105、CD166表达阳性,而CD14、CD34、CD45表达阴性。流式细胞仪示,CD14阳性率为0.19%、CD29为64.36%、CD34为0.17%、CD44为86.73%、CD45为0.18%、CD73为90.21%、CD105为74.25%、CD166为54.60%。细胞周期显示,第3代MSCs约有90%的细胞处于G0/G1期。结论MSCs在体外很容易分离培养和扩增,DAPI标记MSCs敏感性好,标记效率高,可作为标记细胞的一种有效手段,MSCs体外培养成功为细胞移植治疗急危重症器官衰竭提供新的治疗途径。

经蓝碟(LapDisc)手助腹腔镜结直肠癌根治术

目的探讨手助腹腔镜结直肠癌根治术的临床效果. 方法应用LapDisc手助腹腔镜技术完成27例结直肠癌根治术. 结果手术全部成功,无一例中转开腹.手术时间90～260 min,平均140 min.术中出血50～200 ml,平均110 ml.术后无死亡及吻合口漏等并发症.随访6～23个月,平均8.6月,未见切口种植复发. 结论手助腹腔镜结直肠癌根治具有安全、创伤小、术后恢复快及降低标准腹腔镜手术难度等优点,值得临床推广应用.

非转流小型猪原位肝移植模型的建立及评价

目的:建立标准化程度高、重复性和稳定性好的小型猪原位肝移植模型。方法:实验于2004-06/2006-02在南方医科大学南方医院动物研究所完成。选用健康中国版纳小型猪36只,按随机数字表法分为供、受体各18只,施行非转流小型猪原位肝移植手术18例。在非体外静脉转流的条件下行同种异体原位肝移植术,严格控制动物无肝期时间,应用套管法吻合胆总管,另外加强围手术期的处理,使无肝期的血压维持在满意水平。监测动物无肝期时间、手术时间、失血量、输血量及动物存活期;术中监测动物的血液动力学及动脉血气分析、生化指标变化;猪死后当天行尸体解剖明确死亡原因。结果:成功建立非转流小型猪原位肝移植模型18只,均纳入结果分析,无脱失。①实验动物无术中死亡,术后当天死亡1只,死亡原因为急性肺水肿;术后第2天死亡1只,死亡原因为胆总管吻合口胆瘘。术后7d存活率为88.9%。②手术时间、无肝期时间、术中失血量及输血量分别为(179.61±14.27)min,(27.28±3.43)min,(422.22±66.91)mL及(444.44±51.13)mL。③与无肝前期相比,实验动物无肝期平均动脉压、中心静脉压、pH值及碱剩余明显下降(P<0.05￣0.01),心率及血清钾水平显著升高(P<0.01);手术结束时平均动脉压及中心静脉压恢复,经药物调整后血清钾水平下降,pH值逐渐恢复。结论:非转流条件下的小型猪原位肝移植模型是肝移植实验的理想动物模型。

大鼠骨髓间充质干细胞诱导为类肝细胞移植修复急性肝损伤

背景:对于肝衰竭或肝功能支持替代方法来讲,原位肝移植供体来源有限,肝细胞移植受供体缺乏和免疫排斥反应的困扰,肝脏干细胞存在数量少且体外增殖困难等限制。目的:观察大鼠骨髓间充质干细胞经肝细胞生长因子、表皮细胞生长因子联合诱导为类肝细胞后移植对损伤肝脏的形态学修复效果。设计、时间及地点:细胞观察,于2006-10/2007-09在解放军总医院第一附属医院创伤实验室完成。材料:清洁级Wistar大鼠48只,随机分为诱导组、对照组,24只/组。另取Wistar大鼠3只用于分离制备骨髓间充质干细胞。肝细胞生长因子、表皮细胞生长因子由Sigma公司生产。方法:贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,胰酶消化传代,传至第3代向细胞中加入含20μg/L肝细胞生长因子、10g/L表皮细胞生长因子的D/F12培养液悬浮诱导,调整细胞密度为108L-1。两组大鼠均腹腔注射D-氨基半乳糖建立肝脏损伤模型,造模后24h,诱导组门静脉移植诱导后的骨髓间充质干细胞悬液1mL,对照组移植等量未经诱导的骨髓间充质干细胞。主要观察指标:移植后第l,7,14天,免疫组化检测CK18、CD34阳性细胞的分布迁移情况。透射电镜观察汇管区新增生细胞的超微结构。结果:①与对照组比较,诱导组汇管区CK18、CD34阳性细胞明显增多,并从汇管区向肝小叶内迁移,不断分化为成熟的肝细胞;同时汇管区新生的小胆管数量亦明显增多,且有部分向坏死区迁移,参与肝脏的修复。②透射电镜下对照组卵圆形细胞数量较少,而诱导组汇管区有新生内源性细胞,可发现数个细胞排列成的小胆管,并逐渐演变为体积较大的肝细胞。结论:从形态学角度看,骨髓间充质干细胞向类肝细胞诱导分化后移植于受损伤的肝脏,可一定程度上修复肝脏损伤。

肝脏缺血预处理所致PKC活性改变及细胞内信号转导机制的实验研究

目的研究大鼠肝脏缺血预处理保护效应中蛋白激酶C(PKC)的活性改变及细胞内信号可能的转导机制。方法通过建立大鼠肝脏缺血预处理模型,应用PKC抑制剂、激动剂,检测PKC和P44/42MAPKs磷酸化水平的变化,同时观察光镜下细胞形态学损害。结果与缺血再灌注(IR)组比较,预处理(IP)组和PKC激动剂组的PKC磷酸化水平显著提高(P<001),P44/42MAPKs磷酸化水平、HSP70表达量明显增加,肝细胞结构改变较小。与IP组相比,PKC抑制剂组相应指标呈相反变化,PKC磷酸化水平显著降低(P<001),肝组织细胞结构出现较明显的改变。结论体内缺血预处理保护作用中,PKC的激活对P44/42MAPKs通路激活起重要作用,PKC对P44/42MAPKs起正性调控作用,HSP70表达受P44/42MAPKs的调控。

智能人工肠内容物感知神经的初步研究

背景:现有的人工肛门括约肌都缺乏感知大便的功能,患者控制排便主要是通过自己的习惯而不是根据肠道内是否存在大便的实际情况来决定排便。目的:研究能够感知不同肠内容物状态的人工感知神经。方法:选用20只健康新西兰兔,于近结肠远端约10cm肠管制作肠管内容物固体、流体、气体、空虚状态4种模型。各个状态的每段肠管随意选取5个测量点,利用超声波"智能人工肠内容物感知神经"系统对新西兰兔近结肠内4种状态肠内容物进行判断。结果与结论:固体、流体、气体、空虚状态的正确判断率分别为96%,99%,100%,100%。提示该超声波探测系统可有效感知肠道内是否具有内容物和分辨肠管内容物的不同状态。

大肠癌组织KISS-1,hOT7T175基因表达与转移的关系

目的:研究KISS-1,hOT7T175基因在大肠癌组织表达及其与转移的关系.方法:大肠癌组织60例,采用逆转录聚合酶链式扩增反应对KISS-1,hOT7T175mRNA的表达进行检测.结果:大肠癌组织和周缘正常组织KISS-1,hOT7T175阳性表达例数相比有显著差异(P=0.000和P=0.037)肿瘤Ⅰ-Ⅱ期和Ⅲ-Ⅳ期KISS-1阳性表达例数对比有显著差异(P=0.020).结论:KISS-1,HOT7T175有可能成为预计大肠癌恶性程度的一个指标.

直接手助腹腔镜与开腹脾切除的临床研究

目的探讨应用直接手助腹腔镜下脾切除的可行性及近期临床疗效。方法将该院2005年1月～2007年4月收治的脾功能亢进的患者分为直接手助腹腔镜和传统开腹组各15例进行相应手术,对其临床资料进行回顾性分析。结果腹腔镜组无1例中转开腹。腹腔镜组与开腹组手术时间分别为(185±46.6)min和(158±35.6)min,两组差异无显著性(P>0.05);术中平均出血量分别为(255±45.9)mL和(523±59.5)mL,两组差异有显著性(P<0.05);肠道功能恢复时间分别为(2±0.86)d和(3±0.52)d(P<0.05);手助切口长5～7cm,开腹切口长18～25cm,两组差异有显著性(P<0.05);术后并发症发生率分别为4.2%和11.4%(P<0.05);平均住院日由开腹的12d缩短到9d。结论直接手助腹腔镜治疗脾切除能取得与开腹手术同样的治疗效果,并具有出血少、手术时间缩短、术后患者恢复快等优点。

RNA干扰技术抑制Galectin-3表达对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和凋亡的影响

目的观察半乳凝集素-3(Galectin-3)表达与肿瘤细胞增殖和凋亡的关系,探讨利用RNA干扰技术作为抗肿瘤基因治疗的方法。方法设计并化学合成Galectin-3小干扰片段并瞬时转染乳腺癌细胞系MDA-MB-231(Galectin-3siRNA组),以未转染细胞为空白对照组,以转染无关siR-NA为阴性对照组。荧光倒置显微镜和实时定量PCR检测干扰结果,MTT法观察干扰后24、48、72、96 h各组细胞增殖吸光度(A)值,流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况,划痕实验和Transwell实验比较不同组间细胞迁移和侵袭情况。结果①转染后24 h,荧光倒置显微镜显示转染效率为(80.60±5.62)%,实时定量PCR提示Galectin-3siRNA转染后相应Galectin-3的表达明显下降(P<0.01);②干扰后24、48、72、96 h Galectin-3siRNA组细胞继续生长,但细胞生长减慢,抑制率低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05);③流式细胞术分析发现,Galectin-3siRNA组比空白对照组和阴性对照组凋亡率高(P<0.01);④Transwell侵袭实验显示Galectin-3siRNA组穿膜细胞数少于空白对照组和阴性对照组。细胞划痕实验显示Galectin-3siRNA组细胞迁移能力明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.01)。结论RNA干扰能抑制Galectin-3的表达以及MDA-MB-231细胞的增殖,并诱导细胞凋亡、降低其迁移侵袭能力。

“蓝碟”手助腹腔镜结肠癌根治术20例报告

为探讨手助腹腔镜(HALS)结肠癌根治术的可行性和临床疗效,笔者对20例结肠癌患者采用HALS行结肠癌根治术.其中升结肠癌8例,横结肠癌1例,降结肠癌11例.结果示所有患者手术均获成功,无中转开腹.平均手术时间140min.出血量平均60mL.术后疼痛轻,仅1例需使用镇痛药.肠道恢复通气平均时间38h.术后住院时间平均11d.1例术后发生胰瘘.随访6～20个月,无操作孔种植,除1例术后4个月复发外,其余病例无复发和转移.提示HALS结肠癌根治术是治疗结肠恶性肿瘤切实可行的手术方法,其短期疗效与开腹手术相当.

手助腹腔镜结直肠癌根治术

目的:探讨手助腹腔镜结直肠癌根治术的临床效果. 方法:应用手助腹腔镜技术(HALS)对27例结直肠癌患者行结直肠癌根治术. 结果:手术全部成功,无并发症及中转开腹手术.手术时间90-260 min,平均140 min,术中出血50-200 mL,平均110 mL.术后患者疼痛轻,病理检查淋巴结清扫及切除范围满意.肠道功能恢复时间24-60 h,平均28 h,住院时间3- 10 d,平均住院时间6.5 d,无近期复发及穿刺孔或切口种植. 结论:手助腹腔镜结直肠癌根治具有微创、安全、术后恢复快、肿瘤根治彻底等优点,值得临床推广应用.

聚酰胺纳米分子介导survivin反义寡核苷酸诱导结肠癌细胞凋亡(英文)

背景:传统的病毒载体及非病毒载体在基因治疗中均存在明显的缺点,采用纳米材料作为反义寡核苷酸载体有望获得更好更安全的基因转导,提高基因治疗的有效性和安全性。实验拟采用聚酰胺纳米分子介导反义寡核苷酸阻断survivin表达,诱导大肠癌凋亡。目的:探讨聚酰胺树形分子高聚合物介导survivin反义寡核苷酸(survivin antisense oligonucleotide,survivin-asODN)转染结直肠癌SW620细胞的可行性以及对结直肠癌SW620细胞survivin表达、细胞凋亡的影响。设计、时间及地点:肿瘤基因治疗体外实验,于2007-09/2008-05在上海交通大学微纳米科学技术研究院生物纳米工程研究室及南方医科大学珠江医院中心实验室完成。材料:人结直肠癌细胞株SW620购自中国科学院上海细胞研究所,聚酰胺树形分子由上海交通大学微纳米研究院生物纳米工程研究室崔大祥教授提供,转染试剂脂质体LipofectamineTM2000购自美国Invitrogen公司。survivin-asODN由上海生工公司合成。方法:采用300μg/L survivin-asODN和4.06μg/L聚酰胺制备聚酰胺反义基因复合物,同时制备阳离子脂质体反义基因复合物作为对照。透射电镜观察复合物的形态,激光散射粒径分析仪测定粒径,zeta电位分析仪测定zeta电位,离心法和紫外分光光度仪测定复合物的的包封率、载药率和体外DNA释放速度。将上述两种基因转染复合物转染结直肠癌细胞,测定其转染效率;Western blotting检测转染后细胞中survivin蛋白的表达;流式细胞术检测两组细胞的凋亡率。主要观察指标:阳离子脂质体-survivin-asODN复合物及聚酰胺-survivin-asODN复合物的粒经,zeta电位,基因载药率,包封率,释放率,转染后survivin表达率及对凋亡的诱导率。结果:聚酰胺-survivin-asODN复合物的粒径小于脂质体-survivin-asODN复合物的粒径(P<0.01),但zeta电位高于后者(P<0.05);基因载药率、包封率两组差异无显著性意义;聚酰胺对DNA持续释放14d,但脂质体只持续5d。聚酰胺-survivin-asODN转染结直肠癌细胞的效果强于脂质体-survivin-asODN(P<0.05)。转染后结直肠癌细胞survivin蛋白的表达低于脂质体复合物(P<0.05),细胞的凋亡率高于脂质体复合物(P<0.05)。结论:聚酰胺能将survivin-asODN高效递送到结直肠癌SW620细胞,降低survivin蛋白表达并诱导结直肠癌细胞凋亡。

c-myc反义寡核苷酸对结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响

目的:研究体外c-myc反义寡核苷酸(ASODN)对人结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响.方法:利用脂质体LipofectamineTM2000介导将c-myc ASODN转染入大肠癌HT-29细胞中,逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)、Western blot方法检测c-myc基因mRNA及蛋白的表达,MTT、流式细胞仪(FCM)检测c-myc ASODN对人结肠癌HT-29细胞增殖抑制及其对奥沙利铂敏感性影响.结果:转染c-myc ASODN后,HT-29细胞内c-mycm RNA水平显著降低(0.464±0.029vs0.974±0.027,0.945±0.012,均P<0.01).在HT-29细胞中存在分子质量62kDa的特异性条带,与c-myc分子质量相符,ASODN组在PVDF膜上的特异性条带明显弱于对照组;MTT结果显示转染c-myc ASODN48h后的HT-29细胞的增殖速度较对照组细胞明显减慢.FCM显示c-myc ASODN转染后72h后,奥沙利铂+c-myc ASODN组细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.05).结论:体外c-myc ASODN可抑制c-myc mRNA及蛋白的表达,阻断c-myc可抑制HT-29细胞增殖并增强其对奥沙利铂的敏感性,可能为大肠癌的基因治疗提供新的靶点.

Survivin反义寡核苷酸抑制肝癌裸鼠皮下移植瘤生长的作用

目的:研究survivin反义寡核苷酸(ASODN)对人肝癌耐药细胞株移植裸鼠皮下后,移植瘤生长的抑制作用。方法:将人肝癌耐药细胞系SMMC-7721/ADM裸鼠移植瘤模型,随机分为:空白对照组、单纯脂质体转染组、正义链转染组、200μg/LASODN组、400μg/LASODN组和600μg/LASODN组,观察裸鼠移植瘤体积,计算抑瘤率。免疫组化检测Survivin蛋白的表达。结果:A组、B组和C组移植瘤随时间增长而增大,但3组间无显著差异(P>0.05)。D组、E组和F组注射ASODN后,裸小鼠移植瘤的体积随着注射ASODN时间的延长和ASODN浓度的增加,移植瘤生长越来越小,并呈时间-剂量-效应依赖性。实险第20dD组、E组和F组的肿瘤抑制明显大于A组、B组和C组(P<0.05)。HE染色见对照组移植瘤细胞密集成群,核大深染,而ASODN组见肿瘤细胞少,癌细胞皱缩变圆,胞核固缩深染。免疫组化见对照组肝癌细胞浆Survivin蛋白表达较强,而ASODN组Survivin蛋白表达较弱。结论:Survivin反义寡核苷酸能够抑制裸鼠皮下移植瘤的生长。

VEGF反义寡核苷酸对体外生长的大肠癌HT-29细胞的抑制作用

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸(ASODN)对体外生长的人大肠癌HT-29细胞的抑制作用.方法:实验设空白对照组、脂质体转染组、错义链转染组(SODN组)和不同浓度反义链转染组(ASODN组).用LipofectamineTM2000介导的VEGF ASODN和错义寡核苷酸(SODN)转染人大肠癌细胞株HT-29,半定量RT-PCR检测各组细胞VEGF mRNA的表达;Western blot测定转染48、72h后VEGF蛋白表达;MTT法和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡.结果:转染48h后,ASOND组的VEGF mRNA表达水平明显低于脂质体对照组和SODN组(0.455±0.032vs0.934±0.031,0.915±0.004,P<0.01);脂质体对照组与SODN组之间无显著差异.细胞转染48、72h后,ASODN组蛋白表达明显弱于脂质体对照组和SODN组,且72h弱于48h.与对照组比较,VEGF ASODN对HT-29细胞有明显的生长抑制作用,并且抑制呈剂量和时间依赖性(P<0.05).结论:VEGF ASODN通过抑制VEGF的基因表达,对体外生长的人大肠癌HT-29细胞的增殖进行抑制.