一种恶性梗阻性黄疸介入治疗的新方法—经皮肝穿刺胆道内射频消融内支架置入术

目的探讨介入治疗恶性梗阻性黄疸的新方法:经皮肝穿刺胆道射频消融内支架置入术的临床经验。方法经临床筛选2例晚期恶性梗阻性黄疸患者,其中肝门部胆管癌1例,胰头癌1例。采用经皮肝穿刺胆道内肿瘤射频消融,然后置入相匹配的金属内支架。结果 2例患者均完成手术,血清总胆红素明显下降,其中一例CA-199降至正常,临床症状显著改善。结论经皮肝穿刺胆道内射频消融内支架置入术率先在国内开展,是一种安全可行的新的手术方式。相对于传统的介入治疗方式,射频消融能减少操作时肿瘤的出血,进一步阻止肿瘤的局部增长,从而延长内支架的通畅期和患者的存活期,改善患者生存质量。

B超引导下持续循环腹腔热灌注化疗治疗恶性腹水的临床应用初探

目的：探讨B超导向腹腔热灌注化疗（HIPEC）治疗恶性腹水的方法、可行性及临床初步疗效。方法：对本院2011年7月至2013年6月收治的36例恶性腹水患者应用B超导向HIPEC共3次，持续循环灌注生理盐水400～600mL／min，治疗温度（43±0．2）℃，灌注90min，灌注药物选择5-氟尿嘧啶加丝裂霉素或卡铂．对其治疗效果进行长期随访。结果：36例患者治疗过程顺利，治疗后一般状况、精神状态好转，近期临床疗效满意。26例患者腹水全部消失，8例部分缓解，2例无效，有效率为94．44％。患者治疗后KPS评分上升（P〈0．001）；肿瘤标志物下降，CA199（P〈0．001）、CEA（P〈0．001）、CA125（P=0．003）。结论：B超导向HIPEC可维持腹腔内灌注液体速度一致．维持腹腔内温度稳定，保证化疗药物与肿瘤的充分接触，具有创伤小、患者痛苦少、简便、省时、术后恢复快、疗效肯定等优点，有着很好的临床应用前景。

原发性肝癌组织标本采集、保存数据库及组织库的建立与管理

背景:目前,肝癌的遗传资源并没有得到很好的收集和保护,为了保存广东省宝贵的肝癌家系,南方医科大学附属珠江医院建立了肝癌组织库及数据库。目的:探讨肝癌组织标本的采集和保存以及组织库的建立和信息化管理方法。方法:收集手术切除的肿瘤组织、癌旁组织、远端正常组织及患者的血清、血浆以及从肿瘤组织中提取的核酸,分别保存组织块、核酸、血清、血浆、淋巴细胞、干细胞等,液氮或-80℃冷冻保存;同时建立一套信息系统用于肿瘤组织库的管理,包括标本存放位置、标本使用、实验结果、综合查询、标本废除管理等。结果与结论:收集标本45例,其中良性肿瘤5例,恶性肿瘤40例,共350份标本,1年来肿瘤组织库运转良好。建立肝癌组织库及数据库可以对标本进行质量控制及信息化管理,保存少见、罕见标本,达到资源保存和共享的目的。

腹腔镜肝切除术25例临床分析

目的研究腹腔镜肝切除的手术操作技术和适应证。方法分析2006年5月～2009年6月行腹腔镜肝切除术25例患者的临床资料。其中,原发性肝细胞癌15例,肝海绵状血管瘤3例,肝内胆管结石7例,肝功能Child-Pugh评分A级21例,B级4例;甲胎蛋白[AFP(+)]8例,位于肝脏边缘或右肝表面的肿瘤行肝脏局部切除,结石患者行规则性肝切除术。结果 25例均成功完成腹腔镜肝切除术,无中转开腹。平均手术时间148 min(60～340 min),术中平均出血量260 mL。除小量胆漏外,25例患者均未出现其他与手术相关的并发症。术后平均住院时间8.5 d(7～20 d)。结论合理选择手术适应证,可以安全地进行腹腔镜肝叶切除术。

非人灵长类动物急性肝功能衰竭模型的建立

目的:构建一种稳定的非人灵长类大动物急性肝衰竭模型.方法:将15只食蟹猴随机分成3组,经颈外静脉分别注射0.45、0.3和0.15g/kgD-氨基半乳糖胺,构建食蟹猴肝衰竭动物模型.动态检测给药前(0h)、给药后12、24、36、48、60、72、96h生命体征、颅内压(ICP)及血清丙氨酸转氨酶(ALT)、凝血酶原时间(PT)、总胆红素(TBIL)、血氨(NH3)的变化.观察动物临床表现及病程进展情况,记录动物生存时间,动物死亡后行组织病理学检查.结果:0.45g/kg和0.3g/kg组动物全部死亡,生存时间分别为56.1h±8.1h和109.8h±11.2h,0.15g/kg实验猴除1只98h死亡外其余全部存活.0.45g/kg和0.3g/kg组动物各时点的ALT、TBIL、PT、NH3及ICP均明显高于基线值(0h),差异有统计学意义(P<0.05),0.15g/kg实验猴各指标在60h后渐恢复正常.死亡动物组织病理检查见肝细胞坏死,肝内炎性细胞浸润.结论:以0.3g/kg的D-氨基半乳糖胺诱发食蟹猴急性肝功能衰竭动物模型,符合急性肝功能衰竭的临床表现、病理变化,可用于急性肝功能衰竭的动物实验研究.

腹腔镜技术在肝胆外科中的应用进展

由于微创手术的迅速发展,腹腔镜技术已经在临床上得到了广泛推广。腹腔镜下行肝胆外科手术已较为普遍,并且仍不断的在向前发展,术式逐渐增多,适应证逐渐扩大,创伤不断减少,对美学影响越来越小。笔者参阅近年来国内外相关文献,结合自身经验,对腹腔镜技术在肝胆外科中的应用现状及进展进行综述。

脱细胞化肝脏生物衍生支架的制备及鉴定

背景:肝细胞在体外迅速失去极性及合成代谢障碍成为肝脏组织工程研究需要克服的一个难题,在体外寻找一个有利于肝细胞生长与功能维持的细胞外基质微环境成为目前研究的焦点。目的:制备肝脏去细胞化细胞外基质生物衍生支架,并对该生物衍生支架进行初步鉴定。设计、时间及地点:观察性实验,于2008-02-15/05-01在广东省脑功能修复与再生研究所完成。材料:10只雄性SD大鼠用于制备去细胞肝脏细胞外基质支架。10只雄性SD大鼠用于制备原代肝细胞。方法:将SD大鼠肝脏切成10mm×5mm的组织片后,经过胰酶-乙二胺四乙酸作用24h、去垢剂曲拉通×10072h后得到肝脏去细胞化生物衍生支架。每只大鼠获取2×108个肝细胞,将所得原代细胞与肝脏去细胞化生物衍生支架放入含DMEM-F12,体积分数为10%胎牛血清,胰岛素0.5U/mL,地塞米松1×10-7mmol/L,表皮生长因子10μg/L的培养基中共培养,并与单纯原代细胞培养相比较。主要观察指标:培养14d时组织块行苏木精-伊红染色,Masson染色进行组织学分析。并行扫描电镜观察。对培养1,3,5,7,9,14d上清液进行白蛋白及尿素水平检测。结果:组织学检查未见明显细胞核残存,大量胶原纤维得到保留,扫描电镜示纤维成网状排列。支架与原代肝细胞共培养上清液白蛋白和尿素水平高于单纯原代肝细胞培养(P<0.05)。结论:利用去垢剂与胰酶-乙二胺四乙酸低渗溶液处理可以有效完整去除肝脏组织块的细胞成分,较完整地保留细胞外基质;该生物衍生支架有利于肝细胞的生长及功能维持。

供体特异性体内免疫状态的定量检测

背景:由于免疫反应的复杂性,目前的免疫学检测方法均有其局限性,虽然各种检测技术精确程度不断提高,但是单一指标不足以判断机体复杂的免疫状态。建立一种在多指标基础上的联合评估模式来监测移植后受体免疫状态是当前需要解决的难题。目的:建立具有供体抗原特异性的体内免疫状态定量检测方法,探索该方法的流式检测技术参数、荧光染色条件、输注细胞数及确定最佳测试时间点。方法:取C57及BALB/c小鼠脾脏制备脾细胞单细胞悬液,分别用不同浓度活细胞染料羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFSE)染色后制备1∶1混合细胞悬液,按混合细胞输注C57→BALB/c小鼠皮肤移植排斥模型,分别于输注后1,2,4,10h,1,2,3,6d应用流式细胞仪检测外周血两种荧光细胞的比例变化,同时设未移植BALB/c小鼠为对照,探索CFSE荧光染色条件、输注细胞数及确定最佳测试时间点,按公式计算供体特异性细胞杀伤率。结果与结论:供体特异性体内免疫状态定量检测方法流式检测设定在淋巴细胞门,两种细胞CFSE的染色浓度差控制在20倍左右,输注细胞总数在一定范围内对结果没有影响,输注细胞后2～4h为最佳检测时间点。提示体内细胞毒性试验是一种简单、准确、稳定的免疫状态体内定量监测方法,可以全面反映小鼠皮肤移植后受体的免疫状态。

荧光染料CFSE差异浓度标记活细胞体内示踪方法

背景:利用荧光染料标记活细胞体内示踪的方法较多,但是应用荧光染料浓度差异实现不同细胞体内示踪的方法目前仍不成熟。目的:观察不同浓度荧光活性染料CFSE标记的小鼠脾细胞体内示踪情况,建立稳定的单染料差异浓度标记活细胞的体内示踪方法。方法:取C57BL/6J及BALB/c小鼠脾脏制备脾细胞单细胞悬液,分别用不同浓度CFSE染色后制备1∶1混合细胞悬液;锥虫蓝染色鉴定细胞活性;将染色的混合细胞输注BALB/c小鼠后不同时间点,流式细胞仪检测小鼠外周血两种荧光细胞的比例。结果与结论:CFSE标记的小鼠脾细胞活力良好,荧光显微镜下见全部细胞标记后均发绿色荧光,形态正常,CFSE标记阳性率为95%。CFSE染色时,在浓度相差20倍时流式直方图才显示为两个完全独立的峰,即CFSE低浓度用0.3μmol/L高浓度用6μmol/L。异基因的C57BL/6J脾细胞在输注1d后就快速消失,而同基因BALB/c脾细胞能够在BALB/c小鼠外周血中长期存在,但是两种细胞荧光强度均未见降低,说明荧光染料CFSE差异浓度标记活细胞进行体内示踪是一种稳定的示踪方法。

新型免疫状态定量监测皮肤移植模型小鼠的特异性

背景:器官移植后如何监测受者的免疫状态,并预测排斥反应的发生,从而调整免疫抑制剂的用量是当前面临的重要问题。目的:探索新型免疫状态定量监测方法在小鼠皮肤移植模型中是否有抗原特异性。方法:建立C57→BALB/c皮肤移植排斥模型,分别输注C57/BALB/c混合脾细胞悬液及第三者对照DBA/BALB/c混合脾细胞,在细胞输注后检测2种混合细胞悬液比例变化及供体细胞杀伤率,同时设置BALB/c→BALB/c同系皮肤移植对照组,免疫低下裸鼠对照组及免疫抑制剂对照组与之对比。结果与结论:C57/BALB/c悬液-移植排斥模型组和C57/BALB/c悬液-移植排斥模型免疫抑制剂组小鼠对供体C57脾细胞有强烈的特异性杀伤作用,其中C57/BALB/c悬液-移植排斥模型免疫抑制剂组特异性杀伤作用稍弱,而输注第三者对照DBA/BALB/c混合脾细胞的小鼠细胞注射2～4h内没有明显特异杀伤作用,但免疫低下的裸鼠始终未表现出特异性杀伤。说明实验建立的抗原特异性免疫状态检测方法能够快速地检测出皮肤移植受体的免疫状态。

新西兰雌-雄兔皮肤移植模型体内细胞毒性实验

背景:建立一种有效的评估模式来监测移植后受者免疫状态是当前的难点。目的:建立兔体内细胞毒性实验方法,验证体内细胞毒性实验能否检测出受体的免疫排斥状况。方法:建立新西兰白兔雌-雄兔皮肤移植模型,另设未作移植的雌、雄兔为对照组。取雌兔及雄兔脾脏制备脾细胞单细胞悬液,分别用不同浓度活细胞染料羟基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯染色后制备1:1混合细胞悬液。雄兔输注混合细胞后分别于1,2,4,8h抽取外周血,流式细胞仪检测外周血两种荧光细胞的比例变化,计算供体特异性细胞杀伤率。结果与结论:雌-雄兔皮肤移植排斥模型在皮肤移植2周后可建立,混合细胞悬液输注后在模型组和对照组外周血中的比例变化不同,雄兔输注混合细胞后1,2,4,8h的杀伤率模型组高于对照组,差异有显著性意义(P<0.01)。提示体内细胞毒性实验可用于免疫状态监测,可以直观地反映皮肤移植模型的体内特异性免疫环境及移植物所受的免疫攻击强度。

去细胞化全肝生物支架循环灌注培养条件下体外细胞再植

背景:通过去细胞化技术制备全肝生物支架成为缓解供体短缺的新技术,优化肝脏组织的去细胞化流程成为新的课题。目的:通过去细胞化技术建立完整保留肝脏三维结构和脉管系统的全肝生物支架,利用自主设计的循环灌注培养装置实现生物支架体外细胞再植。方法:通过门静脉路径循环灌注去垢剂TritonX-100,十二烷基硫酸钠,并用磷酸盐缓冲液洗脱残留去垢剂。通过动态循环灌注培养装置进行支架与HepG2细胞的共培养,观察植入细胞在全肝生物支架内的功能表达。结果与结论:经去垢剂灌注后,支架呈现保持肝脏三维结构的透明结构,苏木精-伊红染色以及扫描电镜结果显示细胞成分被完全移除,Masson’sTrichrome染色可见大量胶原纤维,免疫组化结果证实纤维连接蛋白和层粘连蛋白保存完整。循环灌注培养下细胞白蛋白表达量及尿素合成量较平板培养明显提高。说明去细胞化肝脏生物支架可作为体外肝脏组织重建的基础材料,动态循环灌注方法可实现支架中细胞再植。

注射用核糖核酸Ⅱ改善晚期胰腺癌化疗患者整体获益可能性的真实世界研究

目的:评价注射用核糖核酸Ⅱ联合化疗在真实世界中治疗晚期胰腺癌的疗效和安全性。方法:基于LinkDoc数据库纳入2012年至2018年就诊于河南省肿瘤医院等10家研究中心且确诊为局部进展期和晚期胰腺癌的患者923例,试验组采用化疗联合注射用核糖核酸Ⅱ治疗,对照组采用单纯化疗治疗。采用倾向性评分匹配的方法均衡两组的基线信息,比较两组间的总生存期(overall survival,OS)、无进展生存期(progression-free survival,PFS)及不良事件和化疗相关不良反应的发生率。结果:试验组和对照组的中位OS分别为7.5个月和6.7个月,中位PFS分别为3.7个月和3.3个月,差异均无统计学意义(P>0.05)。试验组不良事件发生率略低于对照组(88.7%vs 92.1%),试验组化疗相关不良反应发生率略高于对照组(64.1%vs 57.1%),差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:注射用核糖核酸Ⅱ联合化疗治疗晚期胰腺癌具有生存获益趋势,无肝转移患者是潜在的优势人群,该结论尚需前瞻性研究进一步确证。

肝肉瘤样癌临床分析

肝肉瘤样癌义称肉瘤样肝细胞癌，是肝细胞癌的一种罕见的细胞学变异，文献均为个案报道。我院曾收治l例现结合2001年以来国内报道的24例报告分析如下。 患者男性，46岁。以右上腹痛1年，发现肝位5个月入院。体检：腹平软，全腹无压通、反跳痛，肝睥肋下未及。实验室检查：甲胎蛋（AFP）3．07μg／L，HBsAg、HBeAb、HBcAb均为阳性。外院CT提示右肝占位。我院B超提示肝密集光点，分布欠均匀。

先天性无胆囊症两例报告

先天性无胆囊临床极为罕见，我院自1999—2009年以来经手术证实为先天性无胆囊症2例。现报告如下。例1男，63岁。因体检发现肝脏肿瘤，查CT提示为肝右叶肿物，胆囊息肉或肿物，收住人院治疗。

供体特异性体内免疫状态定量检测方法的研究

目的建立具有供体抗原特异性的体内免疫状态定量检测方法，探讨该方法的流式检测技术参数、荧光染色条件、输注细胞数及确定最佳测试时间点。方法取C57及BALB／C小鼠脾脏制备脾细胞单细胞悬液，分别用不同浓度羧基荧光素乙酰乙酸（CFSE）染色后制备1：1混合细胞悬液，按混合细胞输注C57-BALB／C小鼠皮肤移植排斥模型，不同时间点（分别为输注后1、2、4、10h、1、2、3、6d），流式细胞仪检测外周血两种荧光细胞的比例变化，同时设未移植BALB／C小鼠为对照组，探索CFSE荧光染色条件、输注细胞数及确定最佳测试时间点，按公式计算供体特异性细胞杀伤率：％specificlysis=1-donor cells／recipient cells×100％。结果CFSE染色时需要较大浓度差才能完全把两群脾细胞完全分离开，在浓度相差20倍时流式直方图才显示为两个完全独立的峰；即CFSE低浓度用0．3μmol／L，高浓度用6、mol／L。C57-BALB／C皮肤移植排斥模型在皮肤移植后两周即可建立，混合细胞悬液输注后，模型组与对照组输注混合细胞后1、2、4、10h、1、2d特异性杀伤率差异有统计学意义（t=39．5、41．1、26．2、27．4、15，8、5．5，P均〈0．01）。模型组输注后lh和2h杀伤率分别高达（87．4±4．5）％、（92．2±3．9）％。结论供体特异性体内免疫状态定量检测方法流式检测设定在淋巴细胞门，两种细胞CFSE的染色浓度差控制在20倍左右，输注细胞总数在一定范围内对结果没有影响，输注细胞后2—4h为最佳检测时间点，体内细胞毒性实验是一种简单、准确、稳定的免疫状态体内定量监测方法。

肝原发性鳞状细胞癌临床分析

肝原发性鳞状细胞癌是一种罕见的肝脏异源性恶性肿瘤，文献均为个案报道。我院1994年以来收治2例，现结合2000年以来国内报道的12例分析报告如下。

胰腺实性假乳头状癌1例报告

胰腺实性假乳头状肿瘤（solid pseudopapillary tumor of pancreas，SPT）是一种罕见的生物学行为未定或具有交界性恶性潜能的胰腺肿瘤，而恶性胰腺实性假乳头状肿瘤即胰腺实性假乳头状癌更为少见，截至2011年，国内文献仅见2例报道。现将我院收治的1例报告如下。

巨大肝癌破裂出血转化切除策略初步探讨

目的探讨巨大肝细胞癌(肝癌)破裂出血转化切除策略。方法回顾性分析2018年11月南方医科大学附属珠江医院收治的1例巨大肝癌破裂出血患者临床资料。患者男,56岁,因右上腹隐痛2周入院。既往有乙型病毒性肝炎病史20余年。体检:上腹膨隆,右上腹触及肿物,下缘达肋下三指。AFP 3433μg/L。CT检查示:肝左内叶内可见大块低密度影。初步诊断:原发性肝癌。患者签署知情同意书,符合医学伦理学规定。观察患者诊疗策略和疗效。结果入院后发生肝癌破裂,急诊行经导管血管栓塞术(TAE)治疗。然后予TACE+分子靶向药物降期转化治疗3个月。TAE术后16周采用三维可视化技术评估发现肿瘤明显缩小,遂行肝癌切除术,将肝左叶肿瘤完整切除,肝右叶肿瘤在术中超声引导下采用Habib射频消融。术后病理诊断为G2期肝细胞癌,未见脉管和神经侵犯。术后改服仑伐替尼,并辅以槐耳颗粒。截止投稿日期,患者存活超23个月。结论巨大肝癌破裂出血患者采用TAE联合分子靶向药物等多种治疗方式,肿瘤转化降期后二期手术切除,仍可改善生存质量。