RNAi RelB DC对CD4^+CD25^+双阳性T细胞诱导效应的实验研究

目的:探讨核转录因子NF-κB/RelB基因沉默的树突状细胞(RNAiRelB dendritic cell,RNAiRelBDC)诱导异基因CD4+CD25+双阳性T细胞生成的生物效应。方法:实验分为Control-DC组、LPS-DC组、RNAiRelBDC组和LPS-RNAiRelBDC组,各组DC均与同种异基因T淋巴细胞混合反应后,采用流式细胞术(FCM)分析各组CD4+CD25+双阳性T细胞生成比例。结果:Control-DC组DC较LPS-DC组DC诱导CD4+CD25+双阳性T细胞的增高幅度更显著,两者差异具有统计学意义(P<0.01)。RNAiRelBDC组和LPS-RNAiRelBDC组DC诱导CD4+CD25+双阳性T细胞生成比例与LPS-DC组相比均存在显著差异(P<0.01),RNAiRelBDC组DC诱导CD4+CD25+双阳性T细胞生成能力较Control-DC组强,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:RelB基因被沉默后DC具有较强的诱导CD4+CD25+双阳性T细胞生成的能力,表现出未成熟DC的特点,这种RNAiRelBDC有望成为一种新型的致耐受DC用于免疫耐受的诱导研究。

新冠疫情下开放科研实验室管理的专家共识

2019新型冠状病毒的暴发给实验管理带来了新的挑战,鉴于目前形势下疫情的风险,建议各实验室务必提高工作中的风险意识,增强防护,加强管理,特提出以下建议:一、加强科研实验室开放管理1.加强入室人员的培训,除传统的实验室生物安全培训外,增加新型冠状病毒的传播和防控知识培训,并进行考核,未通过者不得进入实验室开展实验。

转化生长因子-β(TGF-β)影响豚鼠巩膜成纤维细胞增殖和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的研究

目的本研究探讨转化生长因子-β(transforming growth factor,TGF-β)体外刺激豚鼠巩膜成纤维细胞,观察豚鼠巩膜成纤维细胞增殖和α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达。方法原代培养豚鼠巩膜成纤维细胞并鉴定,MTT法检测豚鼠巩膜成纤维细胞的增殖,培养液分别加入20 ng·m L-1TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3,分别于12 h、24 h、48 h、72 h,Real-time PCR检测α-SMA mRNA,Western-blotting和免疫荧光化学法检测其蛋白表达。结果与对照组相比,TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3促进豚鼠巩膜成纤维细胞增殖,呈剂量依赖性(P<0.05),其中TGF-β1促进豚鼠巩膜成纤维细胞增殖作用最强(P<0.05);TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3均增加α-SMA的表达(均为P<0.001),TGF-β3促进α-SMA表达作用最强(P<0.001)。结论 TGF-β通过调控细胞外基质合成参与调控巩膜组织重塑。

9种柴胡属植物的核糖体ITS序列及其在药材鉴定中的应用

目的研究9种柴胡属药用植物rDNAITS序列的差异和规律,寻找可准确鉴定柴胡类药材的分子性状。方法PCR扩增ITS序列,测序,DNAssistversion2.2软件进行序列比对,并计算同源性。结果柴胡属植物ITS序列与外类群ITS序列比对同源性均小于75%,序列间两两比对同源性均大于88%,同种植物则大于99%。结论ITS序列作为柴胡类药材鉴定依据具有一定实用性和可靠性。

益母草类中药原植物的核核糖体内转录间隔区序列分析

目的分析益母草属4种植物nrDNAITS序列,探讨其在益母草药材DNA分子鉴别中的作用。方法对4种益母草属植物分别进行ITS序列的PCR扩增和测序,并运用CLUSTRALX和MEGA软件进行分析。结果测得4种植物的ITS序列,包括ITS1、5.8S和ITS2全长序列以及18S、26S部分序列;益母草及其易混淆的3种植物ITS1、ITS2序列的差异性分别为7.2%～18.8%和14.2%～27%。根据ITS序列特征所构建的系统树与传统分类有所不同。结论ITS序列特征可作为益母草种间鉴别的有效分子标记。

Ⅰ型磷酸酶抑制亚基-1对人宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用

PPI1(Inhibitor-1of protein phosphatase 1)是Ⅰ型磷酸酶的抑制亚基之一,其活化依赖于35位苏氨酸蛋白激酶(PKA)的磷酸化而发挥抑制作用。本研究目的在于探讨PPI1持续活化型突变体的表达对人宫颈癌细胞株增殖的影响及其可能的作用机制。利用PPI1野生型和活化型突变体表达质粒分别转染HeLa细胞,首先通过H3TdR掺入实验、迁移实验观察PPI1基因对HeLa细胞增殖能力的影响,研究结果表明:在活化型突变体表达的HeLa细胞株中,细胞3H掺入量和迁移能力明显受抑。其次通过流式细胞术、Giemsa染色法分析PPI1对HeLa细胞的细胞周期的影响;FACS分析表明HeLa细胞G2/M期比例明显升高;经脱氧胸苷同步化后,该组细胞进入有丝分裂期明显滞后。最后利用Western blot分析PPI1对MAPK信号转导通路的影响,Western blot分析显示该组细胞的ERK磷酸化水平明显下降。研究表明PPI1活化型突变体的表达可抑制人宫颈癌细胞株的增殖,这与其诱导HeLa细胞G2/M期停滞、有丝分裂的进入延缓有关,其中涉及到MAPK信号转导通路的活化受抑制。

星形胶质细胞划痕或缺血损伤后亚低温保护作用的研究

目的探讨亚低温对大鼠星形胶质细胞不同类型损伤的保护作用。方法体外原代培养SD大鼠星形胶质细胞,分别以划痕和厌氧培养代表机械损伤和缺血缺氧损伤类型。实验分为对照组(C组)、单纯缺氧组(H组)、缺氧+白细胞组(H+W组)、划痕组(S组)和划痕+白细胞组(S+W组)。将各组细胞置入37、34、32℃CO2孵箱中培养24h,应用速率法和LIVE/DEAD染色分别检测和观察各组细胞在不同温度下的乳酸脱氢酶(LDH)释放率和细胞形态学变化。结果与37℃相比,H组乳酸脱氢酶(LDH)释放率从(33.02±3.58)%分别下降为34℃时的(11.48±1.53)%和32℃时的(3.79±0.45)%(P<0.05);H+W组LDH释放率从(51.14±2.17)%分别下降为34℃时的(19.53±4.37)%和32℃时的(16.68±1.47)%(P<0.05),而S组与S+WBC组LDH释放率在34℃和32℃时与37℃相比均无显著差异(P>0.05)。结论亚低温可明显减轻缺血缺氧对星形胶质细胞的损伤,但对单纯划痕损伤的保护作用不显著。

成分输血前预防性用药对输血不良反应发生的影响

目的探讨成分输血前预防性用药对输血不良反应发生的影响。方法回顾性分析我院2014年4月至2016年4月期间498例成分输血患者的临床资料,根据患者输血前给予的处理措施不同分为两组各249例。观察组患者在输血前进行预防性用药,对照组患者在输血前给予生理盐水。观察两组患者输血后的不良反应发生情况。结果观察组患者中,出现体温升高3例,出现过敏反应4例,不良反应发生率为2.81%;对照组患者中,出现体温升高2例,出现过敏反应5例,出现支气管痉挛、休克1例,不良反应发生率为3.21%。两组的不良反应发生率差异无统计学意义(P>0.05)。结论成分输血前预防性用药对输血不良反应的发生无明显预防作用,不推荐常规进行输血前预防性药物输注,科学合理地输血可在很大程度上减少输血不良反应的发生。

鼻咽癌转移及预后分子标志物

鼻咽癌是一种低分化、高转移性恶性肿瘤。鼻咽癌高转移发生机制研究中,寻找可靠的预后标记物尤为重要,可指导临床上进一步治疗,确立合适的复查时间。

Ⅰ型磷酸酶抑制亚基1对大鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤的保护作用

目的探讨Ⅰ型磷酸酶抑制亚基1（PPIl）对大鼠乳鼠心肌细胞（H／R）损伤的保护作用及其机制。方法用PPll野生型和活化型突变体表达质粒分别转染乳鼠心肌细胞，并建立乳鼠心肌细胞H／R模型，测定各组心肌细胞的存活率、丙二醛（MDA）、乳酸脱氢酶（LDH）的含量、caspase-3活性及超氧化物歧化酶（SOD）活力，此外用流式细胞术测定各组心肌细胞凋亡率，Western blot分析PPIl对凋亡相关蛋白表达及P13K／Akt信号通路的影响。结果与正常组比较，模型组LDH、MDA含量、caspase-3活性及细胞凋亡率增高（P〈0．05），细胞存活率和SOD活性降低（P〈0．05）；PPll活化型突变体转染组细胞的LDH、MDA含量、caspase-3活性和细胞凋亡率则降低，细胞存活率和SOD活性升高，与缺氧／复氧组比较各实验指标差异均具有统计学意义（P〈0．05）。Western blot表明该组细胞P53、Bax表达下调，pAkt表达上调。结论PPIl活化型突变体对H／R造成的心肌细胞损伤具有保护作用，其机制与稳定心肌细胞膜、减轻氧自由基损伤及减少细胞凋亡有关。

HIV-1电化学活性-非活性开关分子信标的构建及验证

目的构建人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)电化学活性-非活性开关分子信标(CAs-MB)并验证其结构及功能。方法合成并纯化针对HIV-1 gag基因保守区序列的CAs-MB,用傅里叶变换红外光谱(FT-IR)和循环伏安法(CV)验证其结构,用差分脉冲伏安法(DPV)信号强度评价CAs-MB的识别功能。结果胭脂红酸(CA)单体与CAs-MB FT-IR图的变化证明CA已标记于MB末端,CV图证明CAs-MB电化学活性ON和OFF状态的存在。DPV结果证实其能够在电化学平台上实现对目标序列的特异性识别,且能够区分一个碱基的差异。结论 CAs-MB作为HIV-1 gag基因的特异性识别元件有望用于构建新型HIV-1电化学基因传感器。

凋亡素联合阿霉素与顺铂对肝细胞癌的凋亡作用研究

目的探讨凋亡素联合阿霉素(ADM)、顺铂(DDP)对肝癌的凋亡作用,为肝癌治疗提供实验依据。方法通过腺病毒载体介导凋亡素基因导入Hepa1-6肝癌细胞中,联合应用ADM、DDP在细胞水平上观察凋亡形态,检测凋亡率,评估联合治疗凋亡效果。结果无凋亡素介导下10μmol/L的DDP联合及1.26μmol/L的ADM作用36 h效果最好,该浓度下有凋亡素介导的实验组Hepa1-6的凋亡率要高于对照组。结论带有特异性甲胎蛋白启动子的重组腺病毒载体,介导凋亡素基因导入肝癌细胞后,联合阿霉素、顺铂对能合成甲胎蛋白的肝癌细胞具有特异性靶向性致凋亡作用。

酒精能够减少斑马鱼胚胎的神经前体细胞并抑制其神经元和神经胶质细胞的分化（英文）

目的研究不同浓度的酒精对斑马鱼的神经前体细胞、神经元和神经胶质细胞的影响。方法在斑马鱼卵受精后5 h,在斑马鱼培养液中加1%、2%或2.5%的酒精。采用原位杂交和实时定量PCR的方法检测不同细胞的mRNA水平的变化,以反映酒精对斑马鱼胚胎神经发育的影响。结果不同浓度酒精处理后,斑马鱼胚胎神经前体细胞和神经元显著减少,并且随着酒精浓度的增加其数量减少更加显著。早期的神经胶质细胞标志物的表达随着酒精浓度的增加在尾部减少,而在头部增加。成熟的神经胶质细胞标志物表达随着酒精浓度的增加而显著减少。结论酒精可以导致斑马鱼胚胎神经前体细胞、神经元和胶质细胞数量减少,并抑制神经元和神经胶质细胞的分化。