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友菌素核苷转移酶amiE基因的克隆、表达和功能鉴定
1
作者
胡涛
张光涛
+6 位作者
朱义广
李苏梅
张海波
张改云
杨晓红
鞠建华
张长生
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第2期214-220,共7页
【目的】克隆和表达二糖核苷类抗生素友菌素生物合成基因簇中的核苷转移酶基因amiE,并研究AmiE的体外催化功能。【方法】采用PCR技术将编码257个氨基酸的葡萄糖-1-磷酸核苷转移酶基因amiE克隆到表达载体pET28a上,构建质粒pCSG4001,转化...
【目的】克隆和表达二糖核苷类抗生素友菌素生物合成基因簇中的核苷转移酶基因amiE,并研究AmiE的体外催化功能。【方法】采用PCR技术将编码257个氨基酸的葡萄糖-1-磷酸核苷转移酶基因amiE克隆到表达载体pET28a上,构建质粒pCSG4001,转化入大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中诱导表达;利用亲和层析分离纯化蛋白AmiE,以葡萄糖-1-磷酸和胸腺嘧啶三磷酸(TTP)或尿嘧啶三磷酸(UTP)为底物,利用高效液相检测AmiE的体外酶活;以甘露糖-1-磷酸、半乳糖胺-1-磷酸和半乳糖-1-磷酸和TTP作为底物,进一步研究AmiE对底物的选择性。【结果】N-末端融合组氨酸标签的AmiE蛋白在大肠杆菌中获得了可溶性表达,通过亲和层析纯化出的AmiE能够以TTP(或UTP)和葡萄糖-1-磷酸作为底物,催化形成胸腺嘧啶二磷酸葡萄糖(TDP-glucose)或者尿嘧啶二磷酸葡萄糖(UDP-glucose),但对其他三种底物,无明显催化活性。【结论】大肠杆菌中表达纯化的核苷转移酶AmiE能够体外催化形成TDP-葡萄糖(或UDP-葡萄糖),确证了AmiE作为核苷转移酶的催化功能,同时表明AmiE对底物具有一定的选择性。
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关键词
二糖核苷类抗生素
友菌素
核苷转移酶
脱氧糖
生物合成
原文传递
题名
友菌素核苷转移酶amiE基因的克隆、表达和功能鉴定
1
作者
胡涛
张光涛
朱义广
李苏梅
张海波
张改云
杨晓红
鞠建华
张长生
机构
南方山地园艺学教育部重点实验室、西南大学园艺园林学院
海洋生物资源可持续利用
重点
实验室
、中国科
学院
海洋微生物研究中心、广东省海洋药物
重点
实验室
出处
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第2期214-220,共7页
基金
国家自然科学基金(30870060,31125001)
国家重点基础研究发展计划(973项目)(2010CB833805)
+2 种基金
中国科学院知识创新工程重要方向项目(KZCX2-YW-G-065,KZCX2-YW-JC202,KSCX2-EW-G-12)
中国科学院百人计划项目(08SL111002)
中国博士后基金(20090460837)~~
文摘
【目的】克隆和表达二糖核苷类抗生素友菌素生物合成基因簇中的核苷转移酶基因amiE,并研究AmiE的体外催化功能。【方法】采用PCR技术将编码257个氨基酸的葡萄糖-1-磷酸核苷转移酶基因amiE克隆到表达载体pET28a上,构建质粒pCSG4001,转化入大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中诱导表达;利用亲和层析分离纯化蛋白AmiE,以葡萄糖-1-磷酸和胸腺嘧啶三磷酸(TTP)或尿嘧啶三磷酸(UTP)为底物,利用高效液相检测AmiE的体外酶活;以甘露糖-1-磷酸、半乳糖胺-1-磷酸和半乳糖-1-磷酸和TTP作为底物,进一步研究AmiE对底物的选择性。【结果】N-末端融合组氨酸标签的AmiE蛋白在大肠杆菌中获得了可溶性表达,通过亲和层析纯化出的AmiE能够以TTP(或UTP)和葡萄糖-1-磷酸作为底物,催化形成胸腺嘧啶二磷酸葡萄糖(TDP-glucose)或者尿嘧啶二磷酸葡萄糖(UDP-glucose),但对其他三种底物,无明显催化活性。【结论】大肠杆菌中表达纯化的核苷转移酶AmiE能够体外催化形成TDP-葡萄糖(或UDP-葡萄糖),确证了AmiE作为核苷转移酶的催化功能,同时表明AmiE对底物具有一定的选择性。
关键词
二糖核苷类抗生素
友菌素
核苷转移酶
脱氧糖
生物合成
Keywords
disaccharide nucleoside antibiotics, amicetin, nucleotidylyhransferase, deoxysugar, biosynthesis
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
友菌素核苷转移酶amiE基因的克隆、表达和功能鉴定
胡涛
张光涛
朱义广
李苏梅
张海波
张改云
杨晓红
鞠建华
张长生
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012
0
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引证文献
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