适于柚×橙杂交后代遗传分析的ISSR引物的筛选与应用

以沙田柚、强德勒柚、红江橙为材料,利用优化的柑橘ISSR体系,对100个ISSR引物进行了筛选.结果表明：28个引物能够扩增出2~12条稳定、清晰的条带,多态性条带为1~9条,多态率为25%~90%,其中P807,P808,P809,P810,P811,P812,P814,P815,P820,P821,P822,P826,P827,P830,P834,P835,P840,P845等18个引物在沙田柚和红江橙之间有差异,P812,P814,P815,P827,P834,P840等6个引物在沙田柚和强德勒柚之间有差异.用2个差异引物P827和P834可从36株沙田柚×强德勒柚杂交后代中鉴定出31株为真杂种,用P810,P811,P812,P835等4个引物可以把52株沙田柚×红江橙杂种后代全部鉴定出来,并且获得了一个适用于沙田柚和红江橙杂交后代鉴定分析的完全显性标记P810.

甘蓝抗黑腐病离体鉴定方法的研究

以活体喷雾法作对照,研究了不同离体接种方法、不同接种浓度以及不同苗龄对甘蓝抗病性鉴定的影响.结果表明:采用环叶打孔离体叶片滴接法在甘蓝4～6片真叶期时,将浓度为1.0×108 cfu/mL的细菌悬浮液接种在直径1.5cm甘蓝叶片上,放到铺有湿滤纸的培养皿中密封后在28℃培养箱中培养5d后进行鉴定,其鉴定结果与活体喷雾法鉴定结果一致,可用于抗源筛选、品种(系)抗性鉴定及在抗病突变体筛选等方面.

番茄抗旱基因工程研究进展

番茄抗旱性是由许多微效基因座和数百个影响干旱形态和生理反应的基因控制的,阐明番茄抗旱的分子机制、开发分子标记辅助选择将有助于加速培育具有抗旱性的番茄新品种。本文概述了番茄抗旱分子机制的研究进展、番茄在干旱条件下的形态特征变化和抗旱育种,重点阐述了番茄抗旱性基因工程改良方面的研究进展,为进一步应用现代生物技术进行植物抗旱性基因工程改良和分子标记辅助选择育种提供方法和思路。

梁平柚葡萄糖基转移酶基因的克隆及原核表达

基于GenBank公布的葡萄糖基转移酶(LGT)基因的核苷酸序列,设计并合成特异性引物,以梁平柚成年树幼叶总RNA为模板,通过RT-PCR方法扩增葡萄糖基转移酶基因,将该基因片段克隆到原核表达载体pET-28a(+)上,构建了该基因的融合表达载体pET28a-CmLGT,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中.经1.0mmol/LIPTG诱导表达获得大小约为62Kd的目的融合蛋白.

番茄WRKY41基因的克隆、表达分析与转基因植株的获得

基于前期基因芯片结果,RT-PCR获得栽培品种番茄M82和近缘野生种潘那利的一个WRKY基因的全长cDNA序列,分别命名为SlWRKY41和SpWRKY41.序列分析表明,番茄WRKY41基因长为1011bp,编码336个氨基酸.该氨基酸序列含有5'-N端WRKYGQK核心结构域和CX_7CX_(23)HX_1C锌指结构,具有WRKY家族的典型结构特征.同源分析表明,该氨基酸序列与多种植物的WRKY类蛋白具有较高的同源性,并且在普通栽培番茄品种M82和野生种潘那利中,只有5个氨基酸位点的差异.进化树分析表明,WRKY41在番茄中属于第Ⅲ类WRKY蛋白,这类蛋白为植物所特有.表达分析结果表明,WRKY41在普通栽培番茄品种M82和野生种潘那利中,不仅在不同组织器官中的表达存在差异,而且在逆境(干旱和氧化逆境)和一些调节因子(SA、GA、乙烯)的处理下也有不同的表达模式.其在野生种潘那利中能够迅速响应相关调节因子(SA、GA、乙烯),推测WRKY41在番茄抗逆响应过程中具有很重要的作用,Sp WRKY41可能是一个较好的改良普通栽培种抗逆性的候选基因.通过构建超量表达载体,成功地将SpWRKY41转化到番茄M82中,以期深入研究该基因的功能和提高番茄的抗逆性.

蔬菜抗旱性鉴定研究进展

干旱是长期无雨或少雨导致土壤或空气干燥的现象,给蔬菜生产造成极大的经济损失。筛选蔬菜抗旱材料,选育抗旱品种是解决这一问题的有效途径。本文综述了国内外蔬菜抗旱性鉴定的方法与指标、抗旱性的综合评价方法,分析了目前蔬菜抗旱性鉴定存在的问题,探讨了未来研究的方向。

魔芋种质资源形态标记遗传多样性分析

对96份魔芋种质进行形态学标记,以评价魔芋种质的遗传多样性水平。结果表明:供试魔芋种质的形态学性状均存在显著的遗传变异,种质间各性状平均变异系数为48.1%,其中芽形状的变异系数最大,为130.6%;裂片颜色的变异系数最小,为25.6%。对魔芋表型性状进行聚类分析,以Pearson相关系数15作为聚类阈值,将96份魔芋品种分为11类。

基于SRK和SCR序列的甘蓝自交不亲和系单倍型分析

采用RT-PCR和其他分子生物学方法,以甘蓝自交不亲和系E1和F1柱头cDNA为模板扩增SRKE1和SRKF1基因,以花药cDNA为模板扩增SCRE1和SCRF1基因.经序列比对首次证明E1和F1材料分别为S28和S7单倍型.经三维结构分析,预测SCRE1上C5-C6和C7-C8之间氨基酸序列决定SCRE1的单倍型特异性,SRKE1上TNNSFYSRLKVS序列决定了SRKE1的单倍型特异性,并对两者相对作用的关键氨基酸位点进行了分析.

番茄JMJ524基因调控SlGLD1的DNA甲基化分析

旨在分析番茄JMJ524基因如何通过影响Sl GLD1的DNA甲基化程度来调控其表达,从而导致番茄的赤霉素不敏感的矮化。利用生物信息学和BSP(Bisulfite sequencing PCR)分析JMJ524抑制系和野生型的Sl GLD1的DNA甲基化程度。结果显示,分离出Sl GLD1的启动子序列,发现其启动子区域含有3个GA响应的顺式作用元件;Sl GLD1的启动子区域和编码区的DNA是高度甲基化的,而且在不同组织部位和突变体中的甲基化模式是不一样的;在基因的编码区发现了两个GC岛,推测Sl GLD1的甲基化可能发生在基因的编码区;针对这两个GC岛进行的BSP分析结果表明:Sl GLD1的这两个区段的DNA Cp G是高度甲基化的,而且在JMJ524抑制系中,DNA的整体甲基化,特别是Cp G甲基化程度显著低于野生型对照M82。JMJ524抑制表达导致了Sl GLD1的基因甲基化程度降低,从而激活这个基因的表达,可能是导致番茄植株矮化的一个因素。

魔芋多酚氧化酶基因保守区的克隆及序列分析

根据植物多酚氧化酶基因保守区域设计简并引物,采用同源克隆的方法,从花魔芋幼叶中首次克隆得到魔芋PPO基因的部分gDNA和cDNA片段.该gDNA和cDNA片段长度均为762bp,编码254个氨基酸残基.生物信息学分析表明具有酪氨酸酶家族的特征,具有保守的CuA和CuB结合区.系统进化树表明:花魔芋PPO蛋白与禾本科植物(大麦、小麦、玉米)最先聚为一类,亲缘关系最近.

魔芋种质资源及育种研究进展

综述了国内外魔芋种质资源的研究现状,以及利用自然选择、诱变育种和生物技术育种等开展魔芋种质创新与新品种选育取得的进展,并对今后魔芋新品种选育及良种保存提出了建议。

试管菊芋块茎诱导及萌发研究

以试管苗为材料,比较不同外源激素浓度配比和不同蔗糖浓度对菊芋试管芋诱导的影响;探讨不同培养基质对试管芋萌发的影响,研究结果表明:菊芋试管芋诱导最佳培养基为MS+BA0.5mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖60g/L,试管芋形成率达86%;诱导得到的试管芋包衣处理后在菜园土与腐殖质基质中萌发率达到92%.

重庆有机农产品市场化研究

随着人们食品安全意识的不断增强,有机农产品消费市场日益扩大,有机农业显示出巨大的发展潜力和广阔的发展前景。作者通过调查研究重庆有机农产品市场现状和存在的问题,提出了重庆市有机农业发展策略,并从拓宽销售渠道、完善市场分析机制、改善物流体系、培养市场4个方面制定改进措施,同时,结合资本利用效率,提出具体实施步骤。

重庆嘉陵风情步行街设计风格研究

本文从重庆嘉陵风情步行街(以下称嘉陵风情步行街)的风格与重庆北碚新城的整体风格一致;嘉陵风情步行街符合重庆北碚的个性、并尊重和再现重庆北碚的人文历史;嘉陵风情步行街的设施及功能全面、着眼重庆北碚的未来发展;嘉陵风情步行街有专门的部门管理等四个方面论述了对重庆市北碚区嘉陵风情步行街设计之所见。

低温诱导对白魔芋产生多叶的研究

将4℃下贮藏6个月、12个月和正常贮藏的白魔芋同时种植,观察生长特性并测定生长期各阶段的吲哚乙酸(IAA)、玉米素(ZR)浓度.结果表明:4℃下贮藏的白魔芋各阶段IAA/ZR之比均高于对照组,ZR水平低于对照组,利于多叶发生;其具有出苗早、植株生长粗壮、生育期延长、多叶发生率高、产量高等特点.因此,适当的低温贮藏可以延长魔芋的生长期,诱导产生多叶,增大光合作用面积.

甘蓝抗软腐病离体鉴定方法探究

通过分析不同因素对甘蓝软腐病离体接种后发病效率的影响,建立了一套甘蓝软腐病抗性的快速鉴定方法。结果发现,用浓度为6.4×10~8 cfu/mL的软腐病液体培养基悬浮液,采用针刺法接种苗龄为5～7叶期植株的离体叶片,接种后空气湿度为90%以上是最有利于软腐病发病的方法。利用该方法鉴定27份栽培甘蓝,发现高抗材料3份,抗病材料8份,耐病材料8份,感病材料8份。

外源氯对花魔芋苗期生长发育及Cl^-分配的影响

【目的】为了研究源氯对花魔芋苗期生长发育及Cl^-分配的影响。【方法】以花魔芋为实验材料,通过盆栽试验,研究了不同浓度的外源氯处理下花魔芋苗期病死率、光合速率、叶绿素含量、根系活力、壮苗指数等指标的变化,并探讨了外源施氯对苗期花魔芋生长发育及CI-分配的影响。【结果】随外源氯浓度的增加,花魔芋病死率呈先降后升的趋势,在16 mmol/L时最低且极显著低于对照,且各处的病死率均低于对照;花魔芋光合速率、生长速率、干物质积累速率、根系活力以及壮苗指数均随外源氯浓度的增加而呈先增后减的趋势,分别在32、4、4、8和8 mmol/L时最高,分别在64、32、32、256和128 mmol/L时显著或极显著低于对照;随外源氯浓度的增加,花魔芋叶绿素含量不断下降,在32 mmol/L时显著低于对照,在128 mmol/L时极显著低于对照;花魔芋各器官干物质分配量在外源氯浓度≤16 mmol/L时叶>茎>根,而在≥32 mmol/L时叶>根>茎;花魔芋植株和各器官氯离子含量均随外源氯浓度的增加而增加,各处理均显著或极显著高于对照,各器官氯离子含量均为根>叶>茎,各器官氯离子分配率均为叶>根>茎,高氯下分配到叶中的氯明显增加,分配到茎中的氯明显减少,而根则相对较为稳定。【结论】因此,适当施氯对花魔芋苗期生长发育无显著不良影响,甚至还有促进作用,而高氯对花魔芋具有毒害作用,显著抑制其生长发育。

缙云山5种乡土楠木资源叶片精油挥发性成分GC-MS鉴定与组成差异分析

【目的】对缙云山5种野生乡土楠木植物资源叶片精油进行提取和成分鉴定,分析5种楠木植物精油挥发性成分组成差异研究和亲缘关系,为野生乡土楠木类资源的开发应用与分类提供基础数据。【方法】按照代表性原则于7月初在叶片年光合效率最高时采样,采用水蒸气蒸馏法进行叶片精油提取,气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)分离,计算机自动检索辅助人工解析,对缙云山5种乡土楠木资源叶片精油组分进行鉴定与差异分析,用SPSS 19.0软件对挥发性组分进行主成分分析和聚类分析。【结果】缙云山5种乡土野生楠木植物资源叶片精油提取率分别为0.313 5%、0.003 6%、0.096 4%、0.075 3%和0.070 7%,白楠出油率最高,雅安琼楠次之,峨眉楠最低,白楠是峨眉楠的87倍。通过GC-MS鉴定,从5种乡土野生楠木植物资源叶片精油中共鉴定出挥发性组分187种,其中白楠78种,主要为喇叭烯(2.911 0μg·g^(-1))、δ-卡迪烯(2.043 5μg·g^(-1))和α-杜松醇(1.634 9μg·g^(-1));峨眉楠62种,主要为正十六烷酸(0.230 4μg·g^(-1))、亚油酸(0.076 3μg·g^(-1))和植醇(0.058 6μg·g^(-1));雅安琼楠79种,主要为α-蒎烯(1.687 1μg·g^(-1))、δ-卡迪烯(1.316 0μg·g^(-1))和乙酸龙脑酯(1.249 2μg·g^(-1));贵州琼楠79种,主要为α-蒎烯(1.607 5μg·g^(-1))、δ-卡迪烯(1.448 7μg·g^(-1))和古巴烯(1.393 9μg·g^(-1));利川润楠54种,主要为13-烯十四醛(6.495 7μg·g^(-1))、十四醛(2.375 4μg·g^(-1))和癸醛(0.934 7μg·g^(-1))。从成分种类上看,缙云山5种乡土野生楠木植物资源叶片精油挥发性组分以烯烃和醇类为主,此外还有酯类、烷烃类、醛类、萘类、酮类、有机酸类、苯类和其他多种化合物类型;但共有性成分少,仅有7种。通过主成分分析和聚类分析,5种乡土野生楠木植物资源可明显分为3类,雅安琼楠和贵州琼楠植物叶片挥发性成分组成相似,聚为一类;峨眉楠和利川润楠聚为一类;而白楠挥发性组分明显不同于其他几种,单独聚为一类。【结论】缙云山5种乡土楠木植物资源叶片精油挥发性组分均以烯烃和醇类为主,但成分含量差异较大,叶片精油化学分类研究结果与传统形态学的亲缘关系具有一定差异。

一个新的番茄黄绿叶突变体表型鉴定与遗传分析

植物黄绿叶突变体不但在植物的光合作用、叶绿素的合成代谢途径、叶绿体的遗传分化与发育等一系列基础研究中具有重要作用,而且还可以作为标记性状应用到育种研究上。本研究以前期化学诱变得到的一个番茄黄绿叶突变体为材料,对其主要表型与光合作用特征特性进行鉴定分析,发现突变体从第1片真叶开始变黄,植株矮小,叶片叶绿素含量和净光合速率相对野生型极显著降低,叶绿体类囊体片层结构畸形。突变体和野生型进行正反交,分析其遗传方式。发现其F2群体正常叶与黄绿叶的分离比为3∶1,表明黄绿叶是由单个基因突变引起的隐性性状。本研究为后期的基因定位研究奠定了基础。

重庆4种野生樟科植物叶片精油GC-MS鉴定及挥发性成分分析

【目的】对重庆缙云山国家级自然保护区樟科4种野生植物资源叶片进行精油提取、挥发性成分鉴定与组成分析,为重庆4种常见樟科植物资源化开发利用提供基础数据。【方法】通过代表性取样法样品采集、采用水蒸气蒸馏法提取叶片精油、利用GC-MS分离叶片精油组分,并结合计算机自动检索辅助人工解析鉴定挥发性成分。【结果】1)大叶新木姜子、粉叶新木姜子、近轮叶木姜子、毛叶木姜子样品精油提取率分别为0.211 6%、0.063 4%、0.258 4%、0.698 2%,毛叶木姜子叶片精油含量最高,粉叶新木姜子最低。2)GC-MS从4种植物叶片精油中共鉴定出挥发性成分160种,其中大叶新木姜子78种,主要含乙酸龙脑酯(9.11%)、β-桉叶醇(7.85%)、(-)-4-松油醇(7.58%);粉叶新木姜子65种,以(-)-4-松油醇(8.75%)、长叶烯(7.72%)、β-石竹烯(6.79%)为主;近轮叶木姜子67种,α-香柑油烯(7.72%)、(1R)-α-蒎烯(6.70%)、α-石竹烯(6.58%)相对含量较高;毛叶木姜子67种,主要包括D-苎烯(8.46%)、β-榄香烯(7.66%)、反式-香叶醇(7.01%)。3)大叶新木姜子叶片精油属乙酸龙脑酯型,粉叶新木姜子叶片精油属长叶烯型,近轮叶木姜子叶片精油属α-香柑油烯型,毛叶木姜子叶片精油属β-榄香烯/反式-香叶醇型,4种植物叶精油挥发性组成与含量差异主要由物种遗传背景决定。4)4种樟科植物叶片精油挥发性成分共包括烃类53种、醇类48种、酮类19种、酯类11种、醛类10种、萘类4种、苯类2种、其他13种,4种植物叶片精油挥发性组成均以烃类、醇类为主,烃类和醇类化合物多数具有较强的香气,是样品叶片精油芳香气味的主要来源。【结论】重庆缙云山国家级自然保护区4种野生樟科植物资源叶片精油挥发性成分种类与组成特征,主要功能性组分相对含量较高,生物活性显著,样品精油主要挥发性组分的产业化应用价值高,为重庆野生精油植物资源化开发提供理论支撑。