大鼠2型糖尿病动物模型的建立

目的研究链尿佐菌素(STZ)加高糖高脂饮食诱导大鼠2型糖尿病模型的建立。方法将30只SD雄性大鼠随机分为实验组和对照组,实验组(n=20只)饲喂高糖高脂饲料,对照组(n=10只)饲喂基础饲料。实验组又分为2小组:大鼠喂养3周后,采血检测空腹血糖及血清胰岛素(高糖高脂组);按25 mg/(kg.BW)剂量一次性腹腔内注射STZ,3 d后,行糖耐量实验证实异常,继续喂以高糖高脂饲料,在第2、4周再2次采血检测糖尿病鼠空腹血糖及血清胰岛素(糖尿病组)。对照组腹腔内注射相应剂量的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液,采血方法同实验组,比较各组大鼠糖耐量、空腹血糖及血清胰岛素的变化。结果与对照组比较,高糖高脂组血清胰岛素明显上升(P<0.01),但血糖无变化(P>0.05),糖尿病组血糖及血清胰岛素均显著高于对照组(均P<0.01)。结论高糖高脂喂养能致大鼠明显的高胰岛素血症,辅以小剂量一次性注射STZ而造成的糖耐量异常,可成功建立大鼠2型糖尿病动物模型。

从人和动物血浆及红细胞膜脂肪酸谱探讨脂质代谢实验模型动物选取

目的比较大鼠、家兔和人血浆及红细胞膜脂肪酸谱的异同,为脂质代谢模型动物的选取提供可靠依据。方法采用氯仿-甲醇快速提取大鼠、家兔和人血浆及细胞膜中的脂肪,并用碱法甲基化,经薄层层析纯化的甲基酯用100 mm×0.25 mm气相色谱毛细管柱测定脂肪酸组成。结果血浆中总MUFA、9c18:1、9c12c18:2 n-6和α-18:3 n-3等脂肪酸含量较高;而红细胞膜中总PUFA、AA、22:4n-6、DPA和DHA等脂肪酸含量较高;人和大鼠16:0、18:0、18:1、α-18:3n-3、AA、EPA、DHA、MUFA、n-3PUFA和n-6/n-3值均较为接近,但和家兔存在显著差异。结论与家兔相比,大鼠和人血浆及红细胞膜脂肪酸谱较接近,因此,在选取脂质代谢实验动物时,应优先考虑大鼠为模型动物,以得到与人体实际更接近的结果。

浅谈对实验动物全价颗粒饲料生产的认识

全面总结了实验动物全价颗粒饲料生产的经验体会,比较详细介绍了小型干进干出型饲料颗粒机的技术操作与维修保养要点,并分析了影响实验动物全价颗粒饲料质量的因素。

如何运用小型饲料颗粒机生产优质的实验动物全价颗粒料

本文介绍了用于加工实验动物全价颗粒料的小型饲料颗粒机的性能选择、技术操作与维修保养要点,并分析了影响实验动物全价颗粒料质量加工的因素。

卡介苗免疫对大鼠抗结核发病和T淋巴细胞亚群的影响

目的探讨卡介苗(BCG)对大鼠结核感染及CD4+CD8+双阳(DP)T细胞的影响。方法60只结核菌素纯化蛋白衍生物(PPD)皮试阴性SD大鼠随机分成:①BCG免疫组;②BCG免疫后结核分枝杆菌(Mtb)攻击(BCG-TB)组;③Mtb攻击后不化疗(TB)组。BCG组、BCG-TB组于观察开始接种BCG。BCG-TB组、TB组于3个月末接受Mtb攻击。比较全部大鼠接种Mtb后的死亡率;实验开始和其后3、4、5、6、8个月末检测外周血中T细胞亚群。结果BCG组、BCG-TB组无死亡;TB组感染后5个月内死亡率45%(9/20)。TB组死亡率高于BCG组和BCG-TB组,P<0.01。实验开始时3个组组间对应参数比较差异均无统计学意义(P>0.05);3个月末BCG组、BCG-TB组之间各对应参数比较差异均无统计学意义(P>0.05);BCG组和BCG-TB组第3个月末与接种前比较,CD8+、DP升高,且显著高于TB组(Mtb干预之前),P<0.01或P<0.05。BCG组DP细胞于接种BCG后第6个月后开始回落,但仍显著高于接种前;BCG-TB组于Mtb攻击1个月后CD8+、DP继续升高,观察的第8个月CD8+、DP回落,但仍显著高于BCG接种前;TB组Mtb攻击后1个月末CD8+、DP有升高但低于BCG组和BCG-TB组,同时伴有CD3+、CD4+降低,差异均有统计学意义,P<0.05或P<0.01,此后维持在相近水平。Mtb攻击2个月末BCG-TB组DP高于BCG组和TB组,P<0.05或P<0.01。Mtb攻击5个月后,3个组间DP差异无统计学意义(P>0.05)。结论BCG预防接种可保护Mtb感染宿主免于发病和死亡,增强抗结核保护性细胞免疫力表现之一为DP细胞升高,DP细胞是抗结核保护性免疫相关T细胞。DP细胞的形成与CD4+SP细胞上CD8+抗原表达有关。

不同时期卡介苗免疫治疗对结核病大鼠疗效和CD4^+CD8^+双阳(DP)T细胞的影响

目的探讨不同时期给予卡介苗(BCG)免疫治疗对结核病化疗效果和T细胞严群的影响。方法80只PPD皮试阴性SD大鼠随机分成(1)化疗开始同步加BCG治疗组;(2)化疗1月后加BCG治疗组;(3)单纯化疗对照组;(4)模型效果判断组。各组于实验开始接受结核杆菌(Mtb)攻毒;第1个月末处死模型效果判断组全部大鼠作病理学和结核杆菌细菌学检查,其他各组于第1个月末接受抗结核化疗,其中第1组化疗开始加用BCG治疗,第2组化疗1个月后加用BCG治疗。观察各组大鼠死亡率;检测各组大鼠于Mtb攻毒前和Mtb攻毒后1、2、3、5个月末的外周血中CD3+、CD4+、CD8+、DPT细胞含量,第2、5个月末加查淋巴细胞绝对计数。结果(1)Mtb感染后1个月内1、3、4组各死亡2只大鼠,第2组死亡1只大鼠。化疗开始后4个月治疗期死亡率:化疗一开始即同步加BCG治疗组22.2%(4/18)高于化疗1月后加BCG治疗组(0/19),P<0.05;化疗对照组为5.6%(1/18),(2)结核病鼠表现为CD4/CD8比值(可伴CD4+细胞)降低、CD8+(可伴DP)细胞升高,P<0.05或P<0.01;这种改变可在化疗后1~2个月内恢复到接近正常水平。(3)化疗开始同步加用BCG组治疗1个月时表现为T淋巴细胞(CD3+)、CD4+T细胞百分率显著降低,而淋巴细胞绝对计数和CD8+、DPT细胞百分率升高,P<0.05或P<0.01;治疗2个月后CD3+、CD4+T细胞恢复到正常范围而仍保持CD8+、DPT细胞较高水平。(4)化疗1个月后再加用BCG组在加用BCG后表现为CD3+、CD4+细胞百分率不降低而CD8+、DP细胞升高。结论淋巴细胞总数显著升高而T细胞占总淋巴细胞百分率显著降低是化疗开始同步加BCG治疗组第一个月死亡率升高的一个重要免疫学特征。DP细胞是抗结核保护性免疫相关细胞。BCG作结核病的免疫治疗应在化疗1个月后开始。

白英水提物对胃癌SGC-7901细胞凋亡与基因bcl-xl/bid表达的影响

目的:观察白英水提物对胃癌SGC-7901细胞凋亡及基因bcl-xl、bid表达的影响。方法:常规法制备白英水提物,实验分正常对照组、白英处理组。白英处理组加入白英水提物终浓度分别为12.5mg/mL、25mg/mL和50mg/mL。流式细胞仪检测细胞凋亡,半定量RT-PCR和免疫化学分析细胞中bcl-xl、bid基因表达。结果:与正常对照组比较,白英处理组SGC-7901细胞增殖有显著性下降,细胞凋亡显著性增多(P<0.05);基因bcl-xl mRNA和Bcl-xl蛋白表达降低、bidmR-NA和Bid蛋白表达升高(P<0.05),并随白英浓度增加而加强。结论:白英水提物能诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡和抑制增殖,且有一定的量效关系,其作用机制可能与调控bcl-xl、bid基因表达有关。

卡介苗免疫治疗应用基础与临床研究进展

自从Robert Koch使用Mtb培养滤液疫苗（旧结核菌素）治疗人类结核病出现＂郭霍现象＂（Koch phenomenon）、许多患者临床表现恶化、少数患者死亡之后,结核病疫苗治疗研究受到重创,直到化疗药物的出现人们仍然未找到有效的免疫治疗方法。化疗药物的治疗效果和结核病控制策略的成功曾经使人们欣喜若狂,但20世纪80年代后结核病低流行率的西方国家结核病重新抬头和上升,

多种营养素对染铅大鼠海马NOS和NO影响

目的探讨多种营养素联合拮抗铅对海马一氧化氮合成酶(NOS)活性和一氧化氮(NO)的作用,并寻找最佳具有拮抗作用的营养素组合。方法采用正交设计以染铅大鼠海马NOS和NO为检测指标,对酪氨酸、甘氨酸、蛋氨酸、牛磺酸、维生素C、维生素B1和锌等7种已知对铅毒性有拮抗作用和改善学习记忆功能的营养素进行筛选、配伍。结果给予营养素各组的血铅明显低于不给营养素的对照组(P<0.01),给予营养素各组的海马NOS活性和NO含量明显高于不给营养素的对照组(P<0.01)。正交实验设计结果为蛋氨酸、锌和维生素B1降低血铅作用明显,给与不给的血铅值极差差异有统计学意义;锌增强大鼠海马NO含量作用明显,其极差差异有统计学意义(P<0.01);维生素B1不具有增强大鼠海马NOS活性和增加大鼠海马NO含量作用,给予维生素的各组均值小于不给予各组,其极差差异有统计学意义(P<0.05)。结论多种营养素联合可改善铅对海马NOS和NO的作用,蛋氨酸、锌可降低血铅,提高海马中NOS活性,增加海马中NO含量的较好组合。

两种不同组织嗜性的小鼠肝炎病毒组合抗原检测抗体的间接ELISA方法

目的研究不同组织嗜性的小鼠肝炎病毒（MHV）组合抗原检测抗体的间接ELISA技术。方法比较两种不同组织嗜性抗原和组合抗原为基础的检测MHV抗体水平。将呼吸型MHV-1、肠型MHV-JX和混合抗原包被酶标板后，检测不同MHV毒株感染抗体。结果两种抗原都能检测出相应的MHV抗体，但交互检测效果差；组合抗原能同时检测两种MHV抗体，组合抗原可以提高MHV感染的检出率。临床样品中呼吸型感染率40％-58％，呼吸型感染率22％-70％，两型的共感染率为为17％-30％。结论组合抗原可以用于MHV感染的诊断试剂。

化疗对结核病大鼠T细胞亚群变化的影响

目的探讨CD4+CD8+双阳(DP)T细胞与结核病相关性。方法60只PPD皮试阴性SD大鼠随机分成(1)结核病化疗组、(2)感染对照组、(3)健康对照组。化疗组和感染组大鼠均于观察开始接受结核菌标准株H37Rv(TB)攻击,攻毒1个月后化疗组接受抗TB化疗;三组动物均于感染结核分枝杆菌前和感染后1、2、3、5个月末检测外周血中CD3+、CD4+、CD8+、DPT细胞含量。结果5个月全程观察中,感染后1个月内化疗组、感染对照组各死亡2例(10%);2～5个月内化疗组死亡率5.6%(1/18),不化疗组同期死亡率38.9%(7/18),P<0.05;健康对照组动物无死亡。开始观察时3组之间各对应参数对比差异无显著性,P>0.05;对照组观察期内各参数的改变差异亦无显著性,P>0.05;感染1个月后,化疗组、感染对照CD4+单阳(SP)细胞数、CD4+/CD8+T细胞比率降低,而CD8+、DPT细胞数升高,P<0.05或P<0.01。不化疗的感染对照组在感染后1个月时与其后2～5个月各参数差异无显著性,P>0.05。化疗组化疗1个月后各参数恢复到结核感染前相近水平,与对照组各对应参数差异已无显著性,P>0.05。TB感染后,CD4+单阳、CD4+/CD8+比率降低,而DP、CD8+T细胞升高呈负相关。结论CD4+CD8+双阳(DP)T细胞是抗结核保护性免疫相关细胞。

静脉-静脉体外膜肺氧合对无氧呼吸犬的供氧效果

目的探讨静脉(V)-V体外膜肺氧合(ECMO)对犬在无氧呼吸条件下的供氧效果。方法8只健康家犬,麻醉后建立股V-颈VECMO途径,停止犬的自主呼吸,以简易呼吸器维持呼吸,建立V-VECMO转流后,以氮气(N2)代替氧气(O2)造成无氧呼吸状态。实验中观察(1)V-VECMO通路所能达到的最大转流率(体外循环血量/心输出量);(2)转流率一定时相对应的动脉血氧饱和度(SaO2);(3)以转流率为自变量X,SaO2为应变量Y,以Spearman秩相关算出其相关系数rs,并采用rs界值表检验,P<0.05有统计学意义。结果(1)体外循环转流率与SaO2高度正相关(rs=0.951,P<0.01)。(2)转流率最大值的平均值为44.6%(95%可信限区间为43.3～45.9%)。(3)维持SaO2为90.0%时转流率预测值为22.5%,肛温36.2℃时实测值为21.5%。结论股V(插入下腔V)-颈内V途径ECMO对无氧呼吸犬提供氧支持有较大安全空间。

维生素E的营养功能与在实验鼠全价配合颗粒饲料中的添加使用

维生素E(VE)是动物必需的脂溶性维生素,在动物体内具有重要的生理学功能,对动物很多生物学性能的发挥有较大影响。本文较为详细地概述了VE的各种营养功能,简述了影响VE稳定性的因素,并根据自身实践提出了在实验鼠全价配合颗粒饲料中的合理添加剂量。

大鼠胰岛细胞分离纯化的实验研究

目的探寻提高大鼠胰岛细胞分离纯化技术的方法。方法通过用胶原酶灌注及不连续密度梯度离心法分离纯化胰岛细胞,用DTZ染色计算胰岛细胞的纯度;通过体外葡萄糖刺激胰岛素分泌试验和糖尿病大鼠移植判定胰岛细胞功能。结果纯化后每只胰腺获得(768±135)个胰岛细胞,纯度为(81.5±11.6)%;纯化后细胞形态完好,活度大于92%。体外葡萄糖刺激胰岛素分泌实验,低糖情况下胰岛素分泌量为(23.16±4.13)mU/L,高糖情况下为(36.82±4.34)mU/L,两者有显著性差异(P<0.05)。胰岛移植后,实验组48 h后血糖值降至正常。结论用胰管内胶原酶灌注及不连续密度梯度法纯化可获得较高纯度、功能均良好的胰岛细胞。

卡介苗免疫大鼠的抗结核发病和CD4^+CD8^+双阳T细胞

目的:探讨卡介苗(BCG)对大鼠结核感染及CD4+CD8+双阳(DP)T细胞的影响。方法:60只PPD皮试阴性SD大鼠随机分成(1)卡介苗免疫(BCG)组(、2)BCG免疫后结核分枝杆菌(Mtb)攻击(BCG-TB)组、(3)Mtb攻击后不化疗(TB)组。BCG组、BCG-TB组于观察开始接种BCG。BCG-TB组、TB组于3个月末接受Mtb攻击。比较全部大鼠接种Mtb后的死亡率;实验开始和其后3、4、5、6、8个月末检测外周血中T细胞亚群。结果:BCG组、BCG-TB组无死亡;TB组感染后5个月内死亡率45%(9/20)。TB组死亡率高于BCG组和BCG-TB组,P<0.01。实验开始时3个组组间对应参数比较差异均无显著性(P>0.05);3个月末BCG组、BCG-TB组之间各对应参数比较差异均无显著性(P>0.05);BCG组和BCG-TB组第3个月末与接种前比较,CD8+、DP升高,且显著高于TB组(Mtb干预之前),P<0.01或P<0.05。BCG组DP细胞于接种BCG后第6个月后开始回落,但仍显著高于接种前;BCG-TB组于Mtb攻击1个月后CD8+、DP继续升高,观察的第8个月CD8+、DP回落,但仍显著高于BCG接种前;TB组Mtb攻击后1个月末CD8+、DP有升高但低于BCG组和BCG-TB组,同时伴有CD3+、CD4+降低,差异均有显著性,P<0.05或P<0.01,此后维持在相近水平。Mtb攻击2个月末BCG-TB组DP高于BCG组和TB组,P<0.05或P<0.01。Mtb攻击5个月后3个组间DP差异无显著性(P>0.05)。结论:BCG预防接种可保护Mtb感染宿主免于发病和死亡,增强抗结核保护性细胞免疫力表现之一为DP细胞升高,DP细胞是抗结核保护性免疫相关T细胞。DP细胞的形成与CD4+SP细胞上CD8+抗原表达有关。

周期蛋白A、D_1和增殖细胞核抗原在肺癌中的表达及临床意义

目的观察细胞周期蛋白A、D1(Cyclin A、D1)和增殖细胞核抗原(PCNA)在肺癌中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化和RT-PCR方法观察94例肺癌组织和10例假瘤炎性肺组织(对照组)中Cyclin A、D1和PC-NA的表达。结果在94例肺癌中,Cyclin A蛋白表达阳性率为84.0%;Cyclin D1蛋白表达阳性率为63.8%;PCNA蛋白表达阳性率为68.1%;肺癌的分期与Cyclin A和PCNA蛋白的表达相关(P<0.05)。在小细胞癌、鳞癌中Cyclin A、D1的mRNA表达较对照组均有非常显著的提高(P<0.01);在腺癌中Cyclin A、D1的mRNA表达较对照组也有明显增强(P<0.05)。结论肺癌中Cyclin A和PCNA蛋白表达有显著升高,Cyclin A和PCNA蛋白的过表达与肺癌的分期相关。

兔脾淋组织液增强猪瘟细胞苗免疫抗体效价的试验

采用1％健康兔脾淋组织液稀释猪瘟细胞苗分别免疫10日龄经猪瘟乳前免疫的仔猪和经60。65日龄采用细胞苗二免的120日龄中猪，与生理盐水稀释组对照，免疫后15d采血检测抗体（IHA法）。二次试验结果表明：用兔脾淋组织液稀释猪瘟细胞苗免疫猪比用生理盐水稀释猪瘟细胞苗免疫猪可产生更高的保护性抗体效价，两者的差异均极显著（P〈0．01）。

雌激素对大鼠腺垂体中瘦素长型受体表达的影响

目的:研究雌激素对卵巢摘除后大鼠腺垂体中瘦素长型受体的调节作用。方法:建立卵巢摘除大鼠模型,用半定量RT-PCR和免疫印迹技术,检测腺垂体中瘦素长型受体mRNA和蛋白表达的变化。结果:注射17β-雌激素组和假手术组中瘦素长型受体mRNA和蛋白表达显著高于注射花生油组。结论:雌激素可调节腺垂体中瘦素长型受体的表达,提示雌激素对腺垂体的调节,可能与瘦素相关。

气相色谱-质谱结合主成分分析方法用于鼻咽癌病人血清中代谢产物的定性定量分析

建立了气相色谱-质谱(GC-MS)同时测定鼻咽癌患者和健康人血清样本中多种代谢物的方法。采用肟化-硅烷化的两步衍生方法,利用DB-5MS毛细管柱程序升温法分离血清中的多种成分。利用NIST标准质谱库和标准品对尿液中的代谢物进行定性定量分析,共鉴定出氨基酸、糖类、脂肪酸、有机酸和酯类等28种内源性代谢物质;进而使用主成分分析(PCA)模式识别方法分析健康人和病人血清中代谢产物差异。结果表明,该方法简便快捷,易于操作,且灵敏度高,能够同时检测血清中的多种组分,且在主成分分析下有明显的分类,因此可为鼻咽癌的早期诊断和发病机制研究提供新的策略。