小鼠子宫内膜基质细胞分离培养、鉴定及体外蜕膜化的诱导

背景:国内已建立许多有关人的子宫内膜基质细胞分离培养及蜕膜化的诱导方法,但人的子宫标本存在取材困难等问题。目的:建立小鼠子宫内膜基质细胞的分离培养及体外蜕膜化的诱导方法,为进一步研究子宫内膜蜕膜化的机制提供一种简单、有效的模型。方法:通过胰酶与胶原酶Ⅱ消化及差时贴壁等方法,分离和纯化小鼠妊娠第4天的子宫内膜基质细胞;用细胞免疫化学方法鉴定基质细胞;通过孕酮和雌二醇联合处理诱导子宫内膜基质细胞的蜕膜化,然后用苏木精染核、实时定量PCR和免疫印迹方法检测蜕膜化标志分子的变化。结果与结论:①分离培养的子宫内膜基质细胞的存活率为(90.1±2.3)%。②细胞免疫化学方法染色显示,分离纯化的子宫基质细胞Vimentin染色呈阳性,而Cytokeratin染色呈阴性,细胞纯度可达(92.3±2.4)%。③孕酮和雌二醇处理48,72h后,苏木精染色显示细胞呈现多核化,蜕膜化标志分子dPRP、周期蛋白D3、孕酮受体mRNA随着培养时间延长均明显增加(P<0.05)。结果可见采用酶消化和差时贴壁方法,可获得高纯度的子宫内膜基质细胞;子宫内膜基质细胞在体外通过孕酮和雌二醇联合诱导可产生蜕膜化。