RNA干扰抑制DLL4基因表达对人血管内皮细胞增殖的影响

背景:Delta-like4(DLL4)是近年新发现的血管生长调控因子,研究表明抑制DLL4可导致过度无效的血管生成。目的:研究RNA干扰抑制DLL4基因表达对人血管内皮细胞增殖的影响。设计、时间及地点:随机分组,对比观察,于2007-07/2008-09在南昌大学医学院和江西省医学生物高技术重点实验室完成。材料:人微血管内皮细胞由上海细胞生物和生物化学研究所提供。方法:设计和化学合成靶向DLL4基因的siRNA序列,lepofectamineTM2000介导DLL4siRNA转染人微血管内皮细胞。提取细胞总RNA,进行反转录-聚合酶链反应扩增,琼脂糖电泳检测DLL4mRNA。提取细胞总蛋白,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳。采用四甲基偶氮唑盐法检测DLL4siRNA对人微血管内皮细胞增殖的影响,实验分4组:①85nmol/LDLL4siRNA-duplex组。②85nmol/LDLL4siRNA-scrambled阴性对照组。③lepofectamine组。④未经处理组。主要观察指标:RNA干扰后,人微血管内皮细胞DLL4的转录和蛋白表达及人微血管内皮细胞的增殖。结果:反转录-聚合酶链反应和Westernblot实验结果显示,人微血管内皮细胞转录DLL4和表达DLL4蛋白;85nmol/LDLL4siRNA完全抑制人微血管内皮细胞DLL4转录和DLL4蛋白的表达。DLL4siRNA抑制人微血管内皮细胞DLL4表达的有效浓度为85nmol/L。四甲基偶氮唑盐实验结果显示,85nmol/L DLL4 siRNA-duplex组的细胞增殖率为190.00%,未经处理组的细胞增殖率为110.00%。结论:人微血管内皮细胞表达DLL4,DLL4siRNA抑制人微血管内皮细胞表达DLL4并促进人微血管内皮细胞增殖,DLL4对人微血管内皮细胞增殖具有抑制作用。

IL-13和乙醇对人肺成纤维细胞增殖的影响

目的研究乙醇和(或)IL-13对人肺成纤维细胞(HFL-1)的促增殖作用。方法培养HFL-1,通过MTT法检测乙醇和(或)IL-13对HFL-1增殖的影响,并对结果进行分析。结果①25、50、100、200 mmol.L-1乙醇对HFL-1的增殖无影响(P>0.05)。②10、20、50μg.L-1的IL-13对乙醇有促增殖作用,且有浓度依赖性(P<0.05)。③不同浓度的乙醇(25、50、100、200 mmol.L-1)和10μg.L-1IL-13共同刺激HFL-1后增殖效果与10μg.L-1IL-13单独刺激的效果差异无统计学意义(P>0.05);除50 mmol.L-1外,其余浓度的乙醇(25、100和200 mmol.L-1)和20μg.L-1IL-13共同刺激HFL-1后增殖效果高于20μg.L-1IL-13单独刺激的效果(P<0.05);不同浓度的乙醇(25、50、100和200 mmol.L-1)和50μg.L-1IL-13共同刺激HFL-1后增殖效果明显高于50μg.L-1IL-13单独刺激的效果(P<0.05),且具有浓度依赖性。结论单独低浓度乙醇(25、50、100和200 mmol.L-1)不会影响HFL-1的增殖,但与一定浓度IL-13共同作用下将对HFL-1的增殖有显著影响。

IL-13和乙醇促进人肺成纤维细胞胶原的表达

目的:研究乙醇和/或白细胞介素13(IL-13)对人肺成纤维细胞(HFL-1)Ⅰ、Ⅲ型胶原α1链基因(COL1A1、COL3A1)以及Ⅰ型胶原蛋白(CoⅠ)表达的影响,探讨肺纤维化的机制。方法:培养HFL-1,通过实时定量荧光RT-PCR检测乙醇和/或IL-13对HFL-1细胞IL-13受体(IL-13Rα1、IL-13Rα2、IL-4Rα)mRNA、COL1A1 mRNA和COL3A1 mRNA表达的影响,ELISA的方法检测乙醇和/或IL-13对HFL-1分泌CoⅠ的影响。结果:单独低浓度乙醇(25、50、100、200mmol/L)作用HFL-1后,与对照组相比IL-13Rα1 mRNA与IL-4Rα mRNA水平比对照组显著增高(P<0.05),而IL-13Rα2 mRNA水平比对照组显著降低(P<0.05)。单独低浓度乙醇(25、50、100、200 mmol/L)对HFL-1的COL1A1 mR-NA和COL3A1 mRNA表达无影响(P>0.05)。IL-13(10、20、50μg/L)可以促进HFL-1的COL1A1 mRNA和COL3A1 mR-NA的表达(P<0.05),且存在浓度依赖性。乙醇(200 mmol/L)与IL-13(10、20、50μg/L)共同作用刺激HFL-1促进COL1A1 mRNA和COL3A1 mRNA的表达比IL-13(10、20、50μg/L)单独作用强(P<0.05)。IL-13组(10、20、50μg/L)和乙醇(200 mmol/L)与IL-13(10、20、50μg/L)共同刺激组HFL-1均有CoⅠ的分泌,但共同刺激组HFL-1分泌CoⅠ量显著增加(P<0.05)。结论:单独低浓度乙醇(25、50、100、200mmol/L)不影响HFL-1细胞的COL1A1和COL3A1表达,但可以影响HFL-1细胞IL-4Rα、IL-13Rα1和IL-13Rα2的表达,而乙醇与IL-13共同刺激与单独IL-13刺激相比对HFL-1的COL1A1和COL3A1以及CoⅠ的表达有显著的促进作用。