《医学微生物学》网络课程的探索与实践

以互动交流和拓展学习为重点,我们开设了《医学微生物学》网络课程。实践证明《医学微生物学》网络课程丰富了教学内容,为学生提供了良好的自主学习平台,加强了学生们的自主学习及创新能力,为提高教学质量提供了全新的模式。

不同来源H9N2亚型禽流感病毒血凝素蛋白生物学分析

目的 对不同来源的H9N2亚型禽流感病毒血凝素蛋白进行生物信息学比较分析,以找出重要的生物信息学数据。方法 从Genebank的基因数据库中获取18株H9N2亚型禽流感病毒H9血凝素蛋白的核苷酸和氨基酸序列,运用Clustal X,Bioedit等国际通用软件进行氨基酸和核苷酸的序列比对,计算核苷酸及氨基酸的同源性。在线软件Antheprot分析二级结构。结果 H9型血凝素蛋白编码框架长约1683bp,编码含560个氨基酸的多肽。18株H9N2亚型禽流感病毒血凝素基因同源率为90.6%~99.8%,血凝素蛋白的氨基酸同源率为93.0%~99.4%,多肽序列中有84个变异位点,变异率为15.03%。血凝素蛋白A1和A2裂解序列为位于aa333-aa341的PSRSSR↓GLF序列;其中1株出现A334T变异,另一株则出现R335G变异。H9血凝素蛋白富含潜在α螺旋（25%~27%）,β折叠（29%~32%）,β转角（25%~27%）及无规则卷曲（17%~19%）等结构;H9型血凝素蛋白受体结合位点是由R100、W161、T163、N191、198（A/V/T）、L202、Y203位氨基酸残基折叠构成。结论 H9N2亚型禽流感病毒血凝素蛋白重要功能结构域的序列和空间结构相对保守稳定。

HBV基因组C基因分子生物学的研究进展

乙型肝炎病毒(HBV)C基因包含前C区基因和C区基因,分别编码乙型肝炎e抗原(HBeAg)和乙型肝炎核心抗原(HBcAg)。HBeAg参与免疫调节,并且是乙型肝炎传染性的标志之一。HBcAg是核衣壳的组成蛋白,在病毒颗粒的组装、成熟、诱导免疫反应以及致肝病、肝癌的分子机制中起着重要的作用。文章就HBV基因组C基因分子生物学的研究进展作一综述。

2006-2008年南昌地区淋球菌耐药检测结果分析

目的分析2006-2008年南昌地区淋球菌对抗生素的耐药性及产β-内酰胺酶(PPNG)淋球菌耐药现状。方法采用琼脂稀释法测定133株淋球菌对5种抗生素的最低抑菌浓度(MIC);用改良碘定量法监测PPNG菌株。结果淋球菌对青霉素、四环素、环丙沙星、大观霉素和头孢三嗪的耐药率分别为72.2%、74.4%、49.6%、2.3%和3.8%,检出16株(12.0%)PPNG菌株,同时对青霉素、四环素、环丙沙星耐药的菌株占35.3%。结论头孢三嗪和大观霉素可作为治疗淋病的首选药物。

江西省医学、师范和民办高校学生AIDS知识态度行为的调查分析

目的了解并比较江西省医学类、师范类和民办类高校学生艾滋病防控知识的现况,评价健康教育讲座的干预效果。方法随机抽取江西省医学类、师范类和民办类共15所高校学生,由医学专业教师进行专题讲座。研究对象在教育前后用无记名的方法独立填写事先统一设计的相同问卷,统计分析有关数据,并比较三类高校学生对于AIDS知识态度行为(KAP)的差异。结果三类高校学生在教育后对艾滋病基本知识点,隐性传播途径,非传播途径知晓率均有了显著提高(P<0.001),且教育后学生对HIV感染者或艾滋病患者的态度有了明显的好转(P<0.05),学生们更愿意给予艾滋病人或感染者帮助。结论大学教师率先利用学会与学校相结合的形式在学生中开展艾滋病知识的健康教育是十分必要。

不同基因型的丙型肝炎病毒E2蛋白生物信息学分析

目的对不同基因型的丙型肝炎病毒（HCV）E2蛋白进行生物信息学比较分析。方法从GeneBank中获取不同基因型HCV的E2蛋白核苷酸与氨基酸序列,运用DNA Star,Clustal X,BioEdit等国际通用软件进行氨基酸和核苷酸的序列比对,计算核苷酸和氨基酸同源性,应用AntheProt5.0软件分析HCV E2蛋白二级结构。结果不同基因型E2蛋白氨基酸数在HCV蛋白中所占比例为10.93%-11.65%。不同基因型间E2蛋白基因核苷酸同源性为61.1%-74.8%,氨基酸同源性为64.0%-82.2%;不同基因型E2蛋白氨基酸序列比对显示3个高变异区域,分别为aa1-aa28（突变率为71.4%）、aa74-aa101（突变率为71.4%）和aa189-aa205（突变率为88.2%）;不同基因型E2蛋白均富含潜在α螺旋（11%-21%）、β折叠（29%-43%）和卷曲结构（43%-51%）。结论不同基因型的HCV E2蛋白存在较大异质性。

不同浓度Nocodazole对Hela细胞G_2/M期同步化的调节作用

目的观察不同浓度有丝分裂阻滞剂Nocodazole对Hela细胞株G_2/M期同步化的调节作用及其对纺锤体结构的影响。方法分别以3.0、1.0、0.3μmol/L Nocodazole处理Hela细胞(Nocodazole 3.0、1.0、0.3μmol/L处理组)18 h。于Nocodazole撤除后0(处理18 h)、3、6、9 h时间点收集细胞,流式细胞仪检测G_2/M期细胞百分比;间接免疫荧光染色激光共聚焦显微镜观察细胞有丝分裂器纺锤体α-微管蛋白(α-tubulin)排列。以不添加Nocodazole处理的Hela细胞作为对照组。结果Nocodazole处理18 h,Nocodazole 3.0、1.0、0.3μmol/L处理组Hela细胞G_2/M期细胞百分比分别为55.95%、51.09%和47.81%,均显著高于对照组的9.54%(P<0.05)。在Nocodazole撤除后3、6、9 h时间点,Nocodazole 3.0μmol/L和1.0μmol/L处理组G_2/M期细胞百分比无明显变化;而Nocodazole 0.3μmol/L处理组G_2/M期细胞百分比下降明显(30.43%、12.91%、10.23%),撤除后6 h时间点的G_2/M期细胞百分比与对照组比较差异已无统计学意义(P>0.05)。α-tubulin荧光染色激光共聚焦显微镜观察显示,Nocodazole撤除后Nocodazole 0.3μmol/L处理组G_2/M期细胞微管迅速再聚合形成两极纺锤体且纺锤丝结构清晰。结论Nocodazole对Hela细胞G_2/M期同步化具有调节作用;药物撤离后,0.3μmol/L Nocodazole处理组细胞周期恢复迅速且对纺锤体结构影响最小。

社区获得性肺炎病原菌构成及耐药分析

目的研究社区获得性肺炎(CAP)的常见病原菌分布及其耐药性。方法对220例CAP患者同时通过痰培养和血清学检测进行病原菌检测,并用琼脂稀释法检测其最低抑菌浓度(MIC)。结果肺炎链球菌(12.3%)是最常见的病原菌,其后依次为嗜肺军团菌(9.1%)、流感嗜血杆菌(8.6%)、肺炎克雷伯菌(6.8%)和金黄色葡萄球菌(4.1%)。其中肺炎链球菌呈高度多重耐药,对克林霉素、阿奇霉素、四环素等药物的耐药率高达75%以上;流感嗜血杆菌对复方新诺明、氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、头孢呋辛等耐药率较高;肺炎克雷伯菌对左氧氟沙星、莫西沙星、环丙沙星、阿莫西林/克拉维酸、亚胺培南及哌拉西林/他唑巴坦等的敏感性较高。结论肺炎链球菌仍为CAP的重要病原体,多重耐药肺炎链球菌耐药形势严峻。喹诺酮类药物在肺炎链球菌所致CAP治疗中占有重要位置。

呼吸内科常见菌及鲍曼不动杆菌质粒上耐药基因的研究

目的分析155株呼吸内科分离菌的种类、分布、耐药性及鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,AB)质粒上的耐药基因。方法用Microscan-autoscan-φ型自动微生物分析仪鉴定到种并测定其对常用抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC50),按美国临床实验室标准化研究所(CLSI/NCCLS)2003年版标准判断结果,利用WHONET5.2软件进行统计和分析,并用聚合酶链式反应(PCR)分析AB质粒上的耐药基因。结果呼吸内科分离菌中革兰阴性菌占85.81%,常见的菌种是肺炎克雷伯菌(17.29%),AB(15.79%),洛菲不动杆菌(13.53%),铜绿假单胞菌(11.28%),大肠埃希菌(9.77%)和短黄杆菌(9.02%),非发酵菌的分离率明显上升,占分离菌总数的45.81%,91.61%的标本来自痰液。革兰阴性菌菌耐药率高,有一株AB对除亚胺培南以外的14种常用抗生素均高度耐药且其质粒上携带可接合传递并稳定传代的3种耐药基因。结论细菌的多重耐药日趋严重,开展细菌耐药性监测,对指导临床合理使用抗生素,降低医院感染率和病死率有重要意义。质粒上带一或多种可接合传递并稳定传代的blaTEM-1、blaPER-1和blaOXA-23基因是呼吸内科AB多重耐药的分子学机制之一。

2948株2009年临床分离致病菌的耐药性分析

目的分析2948株2009年临床分离致病菌的种类及其耐药性。方法用VITEK分析仪进行细菌鉴定及药敏分析。结果与2004年比,2009年临床分离菌的总数倍增,革兰阴性菌占75%,上升7%。常见菌的种类一致,但鲍曼不动杆菌(AB)的分离率为15%,增高了8%。痰及尿中的分离率高于2004年,为44%和26%。呼吸内科(11%)和ICU(9%)仍为主要来源。常见菌,特别是MRSA,HLAR屎肠球菌及AB的耐药率显著升高。万古霉素和亚胺培南分别为治疗革兰阳性和革兰阴性菌感染的首选药,但非发酵菌属耐亚胺培南率升高。结论细菌的耐药性日趋严重,应加强药敏监测,促进抗生素的合理应用,以降低发病率和病死率。

非小细胞肺癌脑转移的发生及预后多因素分析

目的探讨并分析各种临床、病理因素对非小细胞肺癌(NSCLC)脑转移的发生及其预后的影响。方法回顾性分析464例NSCLC患者(非脑转移399例,脑转移65例)的临床资料。生存期定义为患者确诊的时间至死亡或随访结束的时间。应用Kaplan-Meier方法计算患者确诊为肺癌脑转移后的1、2、3年生存率和中位生存期并描绘生存曲线,采用Logistic回归分析肺癌脑转移发生的高危因素,采用Cox模型对肺癌脑转移患者的预后进行多因素分析,并进行Log-rank时序检验。结果 Logistic回归显示,TNM分期、治疗前CEA水平、有无其他远处转移和是否放疗为NSCLC脑转移发生的主要影响因素。Cox回归多因素分析表明,是否手术和颅内转移数是NSCLC脑转移患者的独立预后因素。结论 TNM分期较晚、治疗前CEA水平较高、存在其他远处转移和未经放疗的NSCLC患者发生脑转移的概率较高,单发脑转移的患者和经手术治疗的患者生存期较长。

板蓝根和鱼腥草抗流感病毒研究

目的研究板蓝根和鱼腥草对甲型流感病毒的预防、治疗作用。方法通过测定半数病毒感染量,研究板蓝根和鱼腥草对甲型流感病毒的直接作用、预防作用和流感病毒感染后的治疗作用。结果板蓝根组半数组织培养感染量在直接作用、预防和治疗作用组分别比病毒对照组低2.3 log、3.0 log、2.0 log,差异有显著性(P<0.05);鱼腥草组半数组织培养感染量在直接作用、预防和治疗作用组分别比病毒对照组低1.7 log、2.9 log、1.4 log,差异有显著性(P<0.05)。结论板蓝根和鱼腥草对流感病毒有直接抑制作用,对流感感染有预防、治疗作用。

免疫治疗鼠获得性免疫缺陷综合征相关性淋巴瘤

目的本研究通过T细胞输注方法阻断程序凋亡因子-1(programmed death-1,PD-1)抑制性信号在CD8+T细胞上的表达,来治疗鼠获得性免疫缺陷综合征(MAIDS)相关性B细胞淋巴瘤。方法为了选择性阻断PD-1抑制性信号通路在CD8 T细胞中的表达,采用B6.PD-1-/-小鼠作为CD8 T细胞的供体,与来自野生型B6小鼠的CD8 T细胞做比较。定期测量肿瘤直径大小,来检测PD-1-/-和野生型的CD8 T细胞抗肿瘤功能。结果我们的研究结果发现未接受CD8 T细胞输注的Rag-1-/-受体小鼠,肿瘤持续增大。接受B6.PD-1-/-CD8 T细胞输注的受体小鼠肿瘤缩小/消失的时间和速度均比接受野生型B6 CD8 T细胞输注的受体小鼠显著性缩短和加快。结论阻断CD8 T细胞中的PD-1抑制性信号通路能够增强保护性CD8 T细胞抗肿瘤的功能,可达到控制和治疗逆转录病毒感染导致MAIDS相关肿瘤的发生和发展。

医院检出阴沟肠杆菌耐药性及耐药基因

目的了解临床分离阴沟肠杆菌耐药性与耐药基因情况,为临床合理选用抗菌药物提供理论依据。方法收集赣南医学院第一附属医院临床分离的阴沟肠杆菌40株,琼脂稀释法与纸片扩散法检测常用抗菌药物的敏感性,采用PCR方法对12种耐药基因进行检测。将该院检出的40株阴沟肠杆菌作为研究样本,采用琼脂稀释法与纸片扩散法行药敏试验,而后采用序列分析法与PCR(聚合酶反应)对12种耐药相关基因进行分析。结果经分析后的药物敏感结果显示,40株阴沟肠杆菌标本对头孢吡肟耐药率以15.0%为最低,而对美罗培南与亚胺培南敏感率均为100%,其他抗菌耐药率范围为42.0%~92.5%;耐药基因共8类,分别为sull、Int I 1、aac(3,’)-I、Amp C、CTX-M-9、CTX-M-3、SHV-2a、TEM-1,sull+Int I1为大部分菌株所携带;耐药谱分为9型(A-I),其中以A、D占比较高,且基因分型与其分型存在一定的相关性。结论阴沟肠杆菌有高度与多重耐药性特征,其耐药机制较为复杂且为多种耐药机制共同作用。

双复制子质粒消除耐药质粒的研究

目的观察双复制子质粒对耐药质粒的消除作用。方法构建双复制子质粒pKT230-oriV,并通过转化或接合转移途径转入带有pRK290质粒的细菌中,观察双复制子质粒对耐药质粒的消除作用。结果转入双复制子质粒菌培养5代后,细菌中的pRK290耐药质粒被消除。结论双复制子利用接合转移途径是消除耐药质粒的一个途径。

儿童感染的乙型肝炎病毒X基因的分子特征分析

目的初步调查儿童感染的乙型肝炎病毒(HBV)X基因的分子特征。方法收集20例儿童慢性乙型肝炎(乙肝)患者的血清标本,抽提血清中的HBV DNA,采用PCR扩增HBV X基因并测序,利用Clustal X、Bioedit软件对PCR产物序列进行X基因的突变分析。结果 20例HBV X基因突变区主要集中在羧基端aa120—150,氨基酸序列突变点分别为I127T、K130M、V131I、P145R、A146G/C、C148R/H和N149G/D;核苷酸序列突变点分别为T1753C、A1762T、G1764A、T1800C、C1807G、C1810G、A1811T、A1814C、T1815C、C1817T、A1819G和C1820A。结论儿童感染的HBV X存在突变,集中在羧基端aa120—150,对儿童乙肝的演变会产生重要影响。

pSC101-pMB1质粒双复制子质粒的构建

目的构建带有pSC101和pMB1复制子的质粒。方法将pSC101、pUC19(pMB1型复制子)分别用Eco-RI限制性内切酶消化后,DNA连接酶连接,转化大肠杆菌DH5a,筛选重组子,提取质粒电泳分析;氯霉素培养条件下提取双复制子质粒及其检测OD260值,并将双复制子质粒转化ploA-大肠杆菌。结果阳性重组子带有1个11.9 kb质粒,该质粒带有氨苄青霉素和四环素耐药基因的质粒,氯霉素培养条件下双复制子质粒的提取物OD260值增加,并能转化ploA-大肠杆菌。结论构建的质粒带有pSC101和pMB1 2类复制子。

CD38基因敲除对小鼠脾脏B细胞炎性因子产生的影响

目的分析CD38基因敲除小鼠脾脏中B细胞的数量及B细胞中炎性因子和去乙酰化酶1(SIRT1)的表达水平,探讨CD38基因敲除对B细胞中炎性因子的影响及其潜在机制。方法采用聚合酶链反应(PCR)检测小鼠尾巴CD38和新霉素(Neo)基因的DNA表达水平;磁珠阴选法分选出野生型(WT)C57BL/6和CD38-/-小鼠脾脏中的B细胞,经流式细胞仪鉴定B细胞分选纯度;实时定量PCR检测CD38和炎性因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)基因的mRNA表达水平;蛋白质印迹法检测CD38及SIRT1的蛋白表达水平。结果鉴定CD38-/-小鼠,并成功分选出WT和CD38-/-小鼠脾脏中的B细胞(纯度>95%)。与WT小鼠相比,CD38-/-小鼠脾脏发育障碍,脾细胞总数及其中的B细胞数量均减少(P<0.01),伴炎性因子TNF-α和IL-1βmRNA表达水平下降(P<0.01),SIRT1蛋白表达水平上升(P<0.05)。结论 CD38基因敲除可引起脾脏B细胞数量减少;并可能通过激活SIRT1通路,抑制脾脏B细胞中炎性因子TNF-α和IL-1β的表达。

丙型肝炎病毒结构蛋白与非结构蛋白的研究进展

丙型肝炎病毒(HCV)结构蛋白包括核心蛋白和2个包膜糖蛋白,即包膜糖蛋白E1和包膜糖蛋白E2;非结构蛋白包括NS1、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B。结构蛋白主要在病毒颗粒侵入与组装中发挥作用。非结构蛋白与感染细胞蛋白相互作用,在病毒的复制以及病毒致病过程起关键作用。

菌药共孵育-平皿法检测虎杖体外抑菌活性

目的探讨菌药共孵育-平皿法在虎杖提取液体外抑菌活性检测中的应用效果。方法采用菌药共孵育-平皿法检测虎杖提取液对金色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、白色念珠菌的体外最小抑菌浓度(MIC)及出现明显抑菌作用所需的共孵育时间。结果虎杖提取液对金色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、白色念珠菌均具有不同程度的抑菌作用,其MIC分别为12.5、25.0、25.0、50.0g·L^(^(-1));出现明显抑菌作用所需的共孵育时间分别为8、8、8、12h。结论虎杖提取液在体外具有明显的抑菌作用;菌药共孵育-平皿法模拟了虎杖体内抗菌环境,具有准确、快速、可靠的优点,可作为常规抗菌药物的体外抑菌实验方法。