四氯化碳诱导性肝纤维化大鼠肝组织白细胞介素4表达的研究

目的通过观察四氯化碳(CCl4)致大鼠肝纤维化过程中的白细胞介素4(IL-4)在肝组织中的表达情况,探讨肝纤维化机制。方法建立(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化动物模型。19只Wistar大鼠分为对照组4只和肝纤维化组15只(肝纤维化组按照CCl4的作用时间又分为2、4、6、8周组)。对各组大鼠肝组织进行苏木精-伊红染色和SP法免疫组织化学染色,观察肝组织病理变化及IL-4的表达情况。结果免疫组织化学染色显示,IL-4在正常肝脏组织几乎没有表达,肝纤维化组注射CCl4诱导后,大鼠肝组织中IL-4的表达强度较对照组明显增强,主要分布在肝组织纤维化增生的汇管区。IL-4表达随CCl4作用时间延长而增强,4、6周后变化尤其明显。结论IL-4可能在肝纤维化过程中发挥着重要作用。

辐射对小鼠骨髓多能造血祖细胞的慢性损伤

目的:通过测定辐射后小鼠骨髓内多能造血祖细胞相关指标,探索电离辐射对多能造血祖细胞(MPPs)的慢性损伤及可能机制。方法:将16只C57BL/6成年小鼠随机分为正常对照组和照射组,每组8只小鼠,照射组小鼠经6 Gy X-射线全身照射。通过流式细胞术检测照射后2个月小鼠骨髓内多能造血祖细胞比例、细胞凋亡及增殖情况。采用Mitotracker Red探针和DCFDA探针结合流式细胞术分别检测各细胞群的线粒体活性及活性氧(ROS)水平,并分析骨髓内多能造血祖细胞的老化状态。结果:辐射能降低小鼠骨髓多能造血祖细胞的比例,6 Gy X-射线全身辐射后,小鼠骨髓内MPP1、MPP3和MPP4比例和数量显著减少(P<0.05)。辐射后骨髓多能造血祖细胞克隆形成能力显著降低(P<0.05),骨髓内MPP1和MPP4细胞群的凋亡细胞比例显著升高(P<0.05)。与对照组比较,骨髓MPP2、MPP3和MPP4细胞群内线粒体活性均显著降低(P<0.05)。辐射能升高骨髓多能造血祖细胞ROS水平,骨髓中MPP2、MPP3和MPP4细胞群内ROS含量均显著升高(P<0.05)。照射后骨髓内MPP1、MPP3和MPP4细胞群的老化细胞比例较对照组显著升高(P<0.05)。结论:电离辐射可导致小鼠多能造血祖细胞慢性损伤,其损伤与细胞氧化应激、细胞凋亡和细胞老化密切相关。

白细胞介素13刺激成纤维细胞胶原基因转录和胶原蛋白的合成

目的:以成纤维细胞株3T3为实验对象,观察白细胞介素13对成纤维细胞株3T3胶原合成作用,探讨白细胞介素13对纤维化形成的作用机制。方法:实验于2005-03/2006-10在江西医学科学研究所江西省医学生物高技术重点实验室进行。实验材料:成纤维细胞株3T3细胞为江西省医学科学研究所江西省医学生物高技术重点实验室保存。白细胞介素13购自Peprotech公司。实验方法:①3T3细胞培养:3T3细胞常规培养在含体积分数为0.15胎牛血清、100U/mL青、链霉素的DMEM培养液中,置于37℃、含体积分数为0.05的CO2孵箱中培养,并分为实验组和对照组,两组细胞均用无血清DMEM培养12～16h,实验组加入100μg/L白细胞介素13,作用24,48,72h后进行以下实验。②应用Van Gieson胶原纤维特殊染色观察白细胞介素13作用下,3T3细胞体外合成胶原纤维情况。细胞培养上清液采用羟脯氨酸实验检测细胞分泌的总胶原蛋白含量。采用RT-PCR检测3T3细胞Ⅰ型胶原α1基因(COL1A1)mRNA的表达。采用Western blotting检测白细胞介素13作用后成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白的表达。结果:①Van Gieson胶原纤维特殊染色观察白细胞介素13对成纤维细胞体外合成胶原纤维的影响:有胶原纤维地方被Van Gieson液染成红色,细胞核则为灰黑色。显微镜下可见成纤维细胞呈放射状、编织状或旋涡状排列,细胞体呈梭形或不规则三角形,胞质向外伸出大小不等的突起,核为椭圆形,位于胞浆的中央,在白细胞介素13孵育的3T3细胞中可观察到较多的胶原纤维。②羟脯氨酸实验检测白细胞介素13对成纤维细胞分泌总胶原含量影响:白细胞介素13刺激3T3细胞分泌的总胶原含量24h后即明显增高,持续至72h(t=6.751,P<0.01),明显高于对照组(t=3.019,P<0.05)。③RT-PCR检测白细胞介素13作用下3T3细胞Ⅰ型胶原α1mRNA水平:在511bp(β-actin)和378bp处(COL1A1)均可见一明显条带。④Western blotting检测白细胞介素13作用下Ⅰ型胶原蛋白表达情况:白细胞介素13作用3T3细胞0,24,48,72h后,Ⅰ型胶原蛋白表达逐渐增强,与actin蛋白相比,差异显著(P<0.05)。结论:白细胞介素13可促进3T3细胞胶原基因的转录和胶原蛋白的合成,可能在纤维化疾病发病机制中发挥重要作用。

成纤维细胞胶原合成及细胞内STAT6蛋白磷酸化与白细胞介素13的促进作用

目的:观察重组白细胞介素13对成纤维细胞3T3的胶原合成作用,及其在3T3细胞胞内的信号转导途径,探讨白细胞介素13促纤维化的作用机制。方法:实验于2005-03/2006-03在江西医学科学研究所江西省医学生物高技术重点实验室进行。将3T3细胞分为实验组和对照组,在进行实验前,两组细胞均用无血清DMEM培养12～16h,实验组加重组白细胞介素13(100 μg/L),作用24,48,72h后,应用胶原纤维特殊染色观察白细胞介素13作用下3T3细胞体外合成胶原纤维情况;上清液用羟脯氨酸试验检测细胞分泌的总胶原含量;用逆转录-聚合酶链反应检测3T3细胞白细胞介素13受体的表达;用免疫印迹技术检测白细胞介素13作用0,1,2,4h后STAT6蛋白磷酸化情况,组间比较采用t检验。结果:①实验组细胞胶原纤维合成增加及上清液分泌总胶原含量高于对照组(P<0.05)。②逆转录-聚合酶链反应检测到3T3细胞表达白细胞介素13受体α1。③免疫印迹技术检测到白细胞介素13作用1,2,4h均有磷酸化STAT6蛋白表达,且白细胞介素13作用2h磷酸化STAT6蛋白表达最强,4h衰减。结论:白细胞介素13受体α1在3T3细胞上表达,重组白细胞介素13促进3T3细胞胶原合成和STAT6蛋白磷酸化,可能在纤维化发病机制中发挥重要作用。

白细胞介素13对瘢痕成纤维细胞增生及转录因子c-fos表达的影响

目的研究白细胞介素13(interleukin 13,IL-13)对瘢痕成纤维细胞增生和转录因子c-fos表达的影响。方法 MTT比色法检测IL-13不同质量浓度(50、100、150、200μg.L-1)下CRL-1762细胞的增殖水平,对照组不加IL-13;RT-PCR检测100μg.L-1 IL-13在不同培养时间(15、30、60min)CRL-1762细胞表达c-fos mRNA的水平,对照组不加任何试剂;Western Blotting检测100μg.L-1 IL-13在不同培养时间(30、60、120min)对CRL-1762细胞表达c-fos蛋白质的水平,对照组不加任何试剂。结果 IL-13组CRL-1762细胞吸光度较对照组明显增强,且细胞增殖率与IL-13浓度有关;IL-13诱导CRL-1762细胞30min后,c-fos mRNA的表达较其余各组均明显增强(P<0.05);IL-13诱导CRL-1762细胞60min后,c-fos蛋白质的表达较其余各组均有显著升高(P<0.05)。结论IL-13对CRL-1762细胞的生长有明显的促进作用,并在一定范围内呈浓度依赖性;IL-13能够诱导CRL-1762细胞c-fos mRNA和蛋白质的表达瞬时增强。

缺血预处理减少大鼠肝缺血再灌注损伤期间白三烯C4生成

白三烯（leukotrienes,LTs）是经5-脂氧化酶（5-lipoxygenase,5-LO）途径产生的一类重要前炎症花生四烯酸类物质.它包括半胱氨酰白三烯（cysteinyl leukotrienes,Cys-LTs）（LTC4、LTD4和LTE4）以及LTB4.Cys-LTs母体复合物LTC4由肝微粒体白三烯C4合酶（leukotriene C4 synthase,LTC4S）、谷胱甘肽S转移酶（microsomal glutathione S-transferase,mGST） mGST2和mGST3催化LTA4和还原型谷胱甘肽（reduced glutathione,GSH）结合而成[1].

深圳市春秋季气传花粉调查研究

目的调查深圳市春秋季主要气传花粉的分布特点及飘散规律,为花粉过敏性疾病的预防及城市绿化品种的选择提供资料。方法应用Burkard采样器于2007年1月1日至2007年12月31日对深圳市气传花粉浓度进行检测,并应用SAS9.13统计学软件对花粉浓度与气象变量进行多重线性逐步回归相关性分析。结果 1)2007年深圳市春季花粉季节始于2月19日,止于4月21日;秋季花粉季节自9月15日开始,至12月9日结束。2)春季花期以木本花粉为主,主要为松科,其构成比为23.1%;秋季花粉主要是草本科花粉,以禾本科为主,其所占比例为33.9%。3)春季花粉浓度要明显高于秋季,春秋季平均花粉浓度分别为16.06粒·m-3·d-1和5.82粒·m-3·d-1。4)春季花期日花粉浓度最高出现在3月5日,浓度为141.25粒·m-3·d-1;秋季花期日花粉浓度在11月20日达最高,数值为37.71粒·m-3·d-1。5)春季花期间,日花粉浓度大于15.00粒·m-3的天数为15d;秋季花期时,日花粉浓度大于15.00粒·m-3的天数为5d。6)相对湿度和气压是造成全年花粉浓度变化的主要影响力,其中相对湿度与花粉浓度呈负相关,气压与花粉浓度呈正相关;相对湿度、日照时数和降雨量是影响春季花期花粉浓度的主要气象因子,花粉浓度与相对湿度和降雨量呈负相关,与日照时数呈正相关;气压及极大风速则是使秋季花期花粉浓度波动的最主要的气象因子,花粉浓度与他们均呈正相关。结论深圳市春季花粉季节气传花粉浓度明显高于秋季气传花粉浓度,春季花期时较高浓度花粉持续时间也长于秋季。

粉尘螨变应原对树突状细胞作用的研究

目的研究粉尘螨(Der.f)变应原对树突状细胞的作用。方法分别检测经Der.f变应原作用后,DC2.4(树突状细胞株)细胞白介素-12(IL-12)和IL-10的分泌,TLR2受体的基因表达和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)p44/42的磷酸化水平。结果Der.f促进DC2.4IL-10的分泌(由空白组的不分泌到Der.f作用组的27.7pg/mL,P<0.01),抑制IL-12的分泌(由空白组的22.8pg/mL到Der.f作用组的15.9pg/mL,P<0.05),并可促进p44/42MAPK蛋白的磷酸化和TLR2的基因表达,U0126可逆转其细胞因子的分泌模式,并降低p44/42MAPK磷酸化水平。结论Der.f变应原可影响树突状细胞的细胞因子分泌,受体表达及信号通路磷酸化水平。

HIF-1α与乳腺癌

肿瘤的快速生长导致肿瘤内部缺血缺氧,而缺氧诱导因子-1(HIF-1)作为细胞对缺氧环境适应的重要调节因子,在肿瘤的代谢、生存、血管生成等方面有着重要影响。文章通过探讨HIF-1α在肿瘤代谢中的作用,分析HIF-1α在乳腺癌代谢中可能的作用机制,为乳腺癌的治疗及预后提供治疗策略。

环境温度变化致大鼠小肠黏膜机械屏障损伤的研究

目的通过观察在环境温度发生骤然变化时大鼠小肠黏膜的病理损伤,探讨小肠黏膜机械屏障受环境温度影响的变化规律。方法将168只大鼠按随机数字表法均分为正常温度组(20℃、22只)、温度骤变组[骤降温至4℃组(22只)、骤降温至-12℃组(22只)、骤升温至37℃组(22只)],各组均观察7个时间点,即1、4、8、12、24、48和168h,每个时间点6只大鼠。常规HE染色观察十二指肠、空肠及回肠的组织病理学变化。结果温度骤变组大鼠肠黏膜组织均出现不同程度的损伤,出现绒毛水肿,毛细血管扩张充血、出血,炎细胞浸润等病理变化。在骤升温至37℃组损伤最严重,各组出现损伤最严重的时间不同。结论环境温度骤升或骤降都可引起小肠黏膜机械屏障损伤;环境温度骤升使大鼠肠黏膜的机械屏障损伤更严重。

mTORC1信号通路在小鼠化疗胃黏膜损伤中的作用

目的探讨mTORC1信号通路在使用化疗药物白消安(BU)+环磷酰胺(CY)后小鼠胃黏膜损伤中的作用。方法将60只C57BL/6雄性小鼠随机分为4组,即正常对照组,BU+CY组,Rapamycin组和BU+CY+Rapamycin组,每组15只。各组分别于造模后2、6和14d处死小鼠后取胃体进行常规HE染色观察病理变化,采用免疫组织化学方法检测小鼠胃黏膜的BrdU阳性细胞和PS6阳性蛋白的表达,用Tunnel方法检测细胞凋亡,用图像分析仪进行体视学测量和图像分析。结果 BU+CY组小鼠胃黏膜损伤明显,并有大量炎症细胞浸润;BU+CY+Rapamycin组小鼠上述损伤明显减轻。与正常对照组比较,BU+CY组胃黏膜BrdU阳性细胞数密度显著降低(P<0.01),BU+CY+Rapamycin组则基本恢复至正常值;BU+CY组胃黏膜凋亡细胞显著增加(P<0.01),BU+CY+Rapamycin组则明显恢复;BU+CY组PS6免疫阳性蛋白的积分光密度明显增高(P<0.05),提示mTORC1通路被激活,BU+CY+Rapamycin组则显著减少,mTORC1通路受到强烈抑制;Rapamycin组可出现BrdU阳性细胞数密度降低、凋亡细胞增加。结论化疗药物BU+CY可激活mTORC1信号通路、抑制胃黏膜上皮干细胞增殖和促进胃黏膜上皮细胞凋亡引起胃黏膜损伤,且这种损伤可被Rapamycin逆转。

过敏性哮喘中的树突状细胞和TOLL样受体信号转导

TLRs是哺乳动物中最具特点的能传递信号的模式识别受体(PRRs),能识别病原相关分子模式(PAMPs)。TLRs是一个序列高度保守而古老的天然免疫受体家族,广泛存在于植物、昆虫、哺乳动物和人类,它不仅依赖胚系基因编码的保守序列识别病原微生物和激活天然免疫,而且调节获得性免疫和诱导免疫耐受,与哮喘密切相关。过敏性哮喘是一种多基因参与的具有遗传易感性的慢性气道炎症性疾病,树突状细胞(DC)在这一过程中发挥着关键作用,它成为PAMPs的优先目标。衔接在DC上的TLRs导致T细胞应答的极化,TLR2和TLR4分别使辅助性T细胞1(Th1)和辅助性T细胞2(Th2)发生应答。

白细胞介素13对HEL细胞分化和转录因子c-fos表达的影响

目的研究白细胞介素13(IL-13)对红白血病细胞系 HEL 细胞分化作用及对 HEL 细胞转录因子 c-fos 表达的影响。方法用 RT-PCR 方法检测 HEL 细胞 IL-13受体α1、GPⅡb、vWF 和 c-fos基因 mRNA 表达,用 Western blot 和流式细胞术分别检测 IL-13受体α1、c-fos、GPⅡb和 vWF 蛋白水平的表达。结果 HEL 细胞表达 IL-13受体α1,用 IL-13(100 ng/ml)作用于 HEL 细胞,GPⅡb和 vWF 基因 mRNA 表达上调,实验组和对照组 GPⅡb/β-actin 吸光度比值分别为2.912,1.303,实验组为对照组的2.23倍(P<0.05);实验组和对照组 vWF/β-actin 吸光度比值分别为0.506,0.217,实验组为对照组的2.33倍(P<0.05)。流式细胞术分析结果显示,实验组 GPⅡb和 vWF 蛋白表达明显高于对照组。IL-13作用于 HEL 细胞30 min,c-fos 基因 mRNA 表达水平达高峰,IL-13作用 HEL 细胞60 min,c-fos 蛋白表达达高峰,30 min 组、60 min 组 c-fos/β-actin 吸光度比值高于其它各组(P<0.05)。结论IL-13可促进 HEL 细胞分化,并上调 c-fos 表达。

造血干细胞老化与mTOR信号通路

衰老是一个生命的自然过程,也是世界性的健康问题,目前并无有效延缓衰老的对策。细胞老化可能在哺乳动物衰老发生、发展方面起关键作用,特别是成人干细胞的老化现象。该综述主要回顾了生理和病理环境条件下造血干细胞老化的证据。近年来,随着研究的深入,对细胞老化的理解及其机制有了新的认识,不仅包括传统的p53/p21途径和p16/Rb途径,而且G-CSF/STAT3/BATF通路和衰老相关分泌表型(senescence-associated secretory phenotype,SASP)也引起学者们的重视。有效清除体外和体内老化细胞已经成为可能。最近有研究表明,mTOR(mammalian target of rapamycin)信号通路激活后参与细胞老化的发生、发展过程。在细胞老化机制深入研究基础上,这为进一步探索预防老化细胞产生或有效消除老化细胞的方法提供了新思路。

不同剂量辐射对小鼠造血干/祖细胞的慢性损伤

[背景]电离辐射(IR)引起的造血系统慢性损伤常被忽略,该损伤的本质原因是造血干/祖细胞(HSPCs)的损害。[目的]探究不同辐射剂量与同一辐射剂量不同辐射方式IR对小鼠骨髓内HSPCs的长期影响,为减少IR导致的造血系统慢性损伤提供科学依据。[方法]将16只8~10周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为4组。各组小鼠接受不同剂量和不同方式的X射线全身辐射,分别为1.5 Gy连续4次(1.5 Gy×4)辐射组(n=5)、3 Gy辐射组(n=4)、6 Gy辐射组(n=4)和未辐射组(n=3)。辐射后2个月,收集各组小鼠骨髓细胞并计数,通过体外克隆形成实验(CAFC)分析骨髓细胞的克隆形成能力,通过流式细胞术分析HSPCs的细胞比例,通过增殖细胞核抗原-67(Ki-67)和7-氨基放线菌素D(7-AAD)双染色分析HSPCs的细胞周期,通过2,7-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFDA)探针分析HSPCs的活性氧(ROS)水平,通过5-十二酰氨基荧光素-二-β-D-吡喃半乳糖苷(C12FDG)探针分析HSPCs的细胞老化情况,通过实时荧光定量PCR检测P16、P19、P21和P27等老化相关基因的表达差异。[结果]不同剂量和不同方式辐射小鼠后2个月,小鼠骨髓细胞数无明显变化(均P>0.05);3 Gy和6 Gy辐射后骨髓细胞的体外克隆形成能力较未辐射组下降(P<0.01);HSPCs对不同辐射剂量和辐射方式的反应不一致。总体来看,与未辐射组相比,辐射后长时程造血干细胞(LT-HSCs)细胞比例无明显变化(P>0.05),造血祖细胞(HPCs)、造血干细胞(HSCs)、短时程造血干细胞(ST-HSCs)和多能造血祖细胞群2(MPP2)细胞比例升高(均P<0.05),LSK、MPP1、MPP3和MPP4细胞比例降低(均P<0.05);除了HPCs和MPP2外,HSPCs的G0期比例减少(均P<0.05);单次6 Gy辐射后HSPCs的ROS明显增加(均P<0.05),3 Gy和1.5 Gy×4辐射后的ROS与未辐射组水平无差异(均P>0.05);HPCs、LSK和HSCs细胞经辐射暴露后老化细胞比例均增加(均P<0.05),且1.5 Gy×4和6 Gy辐射后HSCs内P16、P19、P21和P27等老化相关基因表达量较未辐射组升高(均P<0.05)。[结论]骨髓内HSPCs对不同剂量和不同方式的IR反应不一致。ROS累积和细胞老化可能参与了IR导致的HSPCs损伤过程。