熊果酸通过调节miR-148a-3p/孕烷X受体轴抑制肝细胞肝癌细胞增殖、迁移与侵袭

目的探讨熊果酸(ursolic acid,UA)对肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞增殖、迁移与侵袭的作用及其机制。方法采用0~80μmol/L UA处理HCC细胞系(BEL-7404、Huh7、SMMC-7721和HepG2)和正常肝细胞系(HL-7702和HHL-5),用CCK-8法筛选UA的剂量范围。用0~40μmol/L UA处理HepG2细胞48 h后,CCK-8法检测细胞活性;Transwell小室法检测细胞迁移与侵袭;RT-qPCR检测miR-148a-3p表达水平;免疫荧光染色法检测孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)表达水平。将miR-148a-3p inhibitor、sh-PXR或pcDNA-PXR转入HepG2细胞,再给予UA处理48 h后,检测细胞活性、迁移和侵袭情况。生物信息学和双荧光素酶活性法分析miR-148a-3p和PXR之间的关系。结果在0~40μmol/L剂量范围内,UA对正常肝细胞系无毒但能抑制HCC细胞系活性。UA能剂量依赖性抑制HepG2细胞的细胞活性、迁移与侵袭,且伴随着升高miR-148a-3p的表达水平和降低PXR的表达水平。miR-148a-3p inhibitor转染能部分逆转UA对HepG2细胞的细胞活性、迁移与侵袭的抑制作用。沉默PXR具有UA类似的效果,而过表达PXR能消除UA的作用。PXR是miR-148a-3p的靶基因。结论UA能通过调节miR-148a-3p/PXR轴抑制HCC细胞的增殖、迁移和侵袭。

钩藤碱调控微小RNA-181a抑制甲基苯丙胺大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞成瘾的研究

目的 探讨钩藤碱对甲基苯丙胺成瘾大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞模型中微小RNA-181a(miR-181a)表达的影响。方法 将细胞分为9组:正常组、模型组、对照组、实验组、antagomiR negative control组((1)组)、miR-181a antagomiR组((2)组)、antagomiR negative control+甲基苯丙胺组((3)组)、miR-181a antagomiR+甲基苯丙胺组((4)组)和miR-181a antagomiR+钩藤碱+甲基苯丙胺组((5)组)。用实时荧光聚合酶链反应检测miR-181a的表达水平,用Western blot法检测A型γ-氨基丁酸受体α1亚基(GABRA1)蛋白的表达水平。结果 正常组、模型组、对照组、实验组、(1)组、(2)组、(3)组、(4)组和(5)组的miR-181a相对表达量分别为1.00±0.00,2.39±0.26,1.02±0.12,1.07±0.15,1.00±0.00,0.32±0.04,2.30±0.25,1.68±0.20和1.45±0.17;正常组、模型组、对照组、实验组、(1)组、(3)组、(4)组和(5)组的GABRA1蛋白相对表达量分别为1.00±0.00,0.54±0.06,0.98±0.12,0.91±0.12,1.00±0.00,0.53±0.06,0.88±0.09和0.92±0.11。与正常组相比,模型组的miR-181a表达升高、GABRA1蛋白表达降低,差异均有统计学意义(均P<0.01);与模型组相比,实验组的miR-181a表达降低、GABRA1蛋白表达升高,差异均有统计学意义(均P<0.01);与(3)组相比,(4)组的miR-181a表达降低、GABRA1蛋白表达升高,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论 钩藤碱可能通过调控miR-181a/GABRA1轴抑制甲基苯丙胺PC12细胞成瘾。