白藜芦醇纳米粒对原发性免疫性血小板减少性紫癜大鼠Treg/Th17免疫平衡的改善作用及其机制

目的探讨白藜芦醇纳米粒(resveratrol nanosuspensions,Res-NPs)对原发性免疫性血小板减少性紫癜(primary immune thrombocytopenia,ITP)大鼠调节性T细胞(regulatory T,Treg)/Th17免疫平衡的改善作用以及其对Notch1信号的调节作用。方法提取芯片数据集GSE46922和GSE23754,分析Notch1在ITP的表达。采用腹腔注射含整合素的牛血清白蛋白溶液构建ITP模型。实验大鼠随机分为正常组(Normal)、模型组(ITP)、ITP+Notch1过表达组(ITP+pc)、ITP+Res-NPs组(ITP+Res-NPs)以及ITP+Res-NPs+Notch1过表达组(ITP+Res-NPs+pc)。然后用Western blot检测脾组织中Notch1和Notch配体(Jagged1)的表达,HE染色检测病理变化,细胞计数检测各组大鼠外周血中的血小板的数目,ELISA检测血清中TNF-α、IL-6、IL-17A、TGF-β1的含量,流式细胞术检测脾单细胞悬液中Treg和Th17的百分比。结果数据集统计分析结果显示Notch1在ITP中的表达升高,Western blot结果显示Notch1过表达质粒能有效上调Notch1的表达、并能调节Jagged1的表达。白藜芦醇纳米粒能显著改善ITP模型大鼠的血小板数目,抑制血清中TNF-α、IL-6、IL-17A的释放,改善脾组织中Treg和Th17细胞的平衡,降低脾组织中Notch1和Jagged1的表达。上调Notch1则加重ITP模型鼠的上述指标恶化,联合处理组则显示上调Notch1可以部分阻断白藜芦醇纳米粒对ITP大鼠的改善效应。结论白藜芦醇纳米粒能明显升高ITP大鼠血清中血小板计数,缓解动物脾和脊髓的组织病理损伤,改善其Treg/Th17免疫平衡,这与调控Notch1信号有关。

中药组分丹参素对OATP1B1摄取瑞舒伐他汀的影响

目的:在HepG2细胞中研究中药组分丹参素对SLCO1B1 mRNA及OATP1B1表达的影响,及体外对OATP1B1摄取瑞舒伐他汀的影响。方法:用RT-PCR法检测SLCO1B1 mRNA的表达,Western blot法检测OATP1B1的表达;建立LCMS分析方法检测HepG2细胞中瑞舒伐他汀的含量。以利福平(OATP1B1诱导剂)为探针开展平行对照实验,将系列浓度丹参素(20、40、80、120μmol·L^(-1))、利福平(5、10、25、50、100μmol·L^(-1))分别作用于HepG2细胞48 h,研究丹参素对SLCO1B1mRNA及OATP1B1表达的影响。通过摄取实验分别研究丹参素浓度(10、20、40、80、120μmol·L^(-1))及诱导时间(0、12、24、36、48 h)对HepG2细胞中瑞舒伐他汀摄取转运的影响。结果:不同质量浓度丹参素处理HepG2细胞48 h后,明显上调SLCO1B1 mRNA和OATP1B1表达水平,并随浓度增加而增强。在不同时间处理丹参素诱导下,12、24 h时瑞舒伐他汀摄取量分别减少22.02%和12.20%,而36、48 h时瑞舒伐他汀摄取量分别增加1.83%和85.39%。进一步考察发现,在48 h后用10、20μmol·L^(-1)丹参素处理可使瑞舒伐他汀摄取量分别减少6.89%、22.10%,而40、80、120μmol·L^(-1)丹参素则分别使其增加了1.23%、79.93%、87.64%。结论:丹参素能够诱导HepG2细胞中SLCO1B1 mRNA及OATP1B1的表达,并影响OATP1B1转运功能。丹参素低浓度短时间处理抑制HepG2细胞中OATP1B1对瑞舒伐他汀的摄取转运能力,高浓度长时间处理则诱导HepG2细胞中OATP1B1对瑞舒伐他汀的摄取转运能力。