细胞实验室污染原因及有效预防控制措施的分析

目的针对细胞实验室出现严重污染情况,进行污染原因调查分析,并探索预防污染措施。方法干预前后3次采集无菌培养室不同方位的空气,培养箱各个层面的气体,净化工作台面棉拭子,净化工作台四个顶角及台面中央同时采集了5个空气点,可疑细胞培养基等进行置入血平板培养基和PDA培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基,即Potato Dextrose Agar)后观察是否有微生物生长。结果干预前3次取样24h、48h培养,经VITEK2-Compact全自动微生物分析仪鉴定均为鲍曼不动杆菌和白念珠菌。干预后采用同样的方法取样培养,未见培养基上克隆生长。结论干预措施能够有效的消除细胞实验室出现的严重污染。

人野生型p53基因增强5-FU对大肠癌化疗敏感性的分子生物学机制

为了探讨人野生型p53(wt-p53)基因增强大肠癌细胞化疗敏感性的分子生物学机制,将携带wt-p53基因的质粒分别转染两种p53基因突变的人大肠癌细胞系HT-29及SW620,分析细胞中p53及细胞周期蛋白D1(cyclinD1)蛋白的表达水平;将化疗药物5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)以不同浓度、不同时间分别作用于HT-29及SW620细胞,另外将已转染wt-p53基因的大肠癌细胞用5-FU进行诱导,Western印迹分析上述干预条件下细胞中p53蛋白及细胞周期蛋白D1表达水平的变化;流式细胞术检测wt-p53基因联合5-FU组及对照组中细胞凋亡的改变情况.结果表明,wt-p53基因能增加癌细胞中细胞周期蛋白D1的表达,与wt-p53基因呈剂量依赖性关系;5-FU则降低其蛋白表达,与5-FU呈时间和剂量依赖性关系,而5-FU所致的细胞周期蛋白D1表达水平的降低在细胞预先转染了wt-p53基因时会被抑制;wt-p53基因与5-FU联合使用能提高大肠癌细胞凋亡率.结果提示,wt-p53基因可提高大肠癌细胞中细胞周期蛋白D1的表达水平,并抑制5-FU所致的细胞周期蛋白D1降解,从而提高大肠癌细胞对化疗药物5-FU的敏感性.

液基细胞学和高危人乳头瘤状病毒DNA检测对宫颈病变筛查的价值

目的探讨液基细胞学(TCT)和高危人乳头瘤状病毒DNA(HR-HPV DNA)检测对宫颈病变筛查的价值。方法对南昌大学第二附属医院妇科门诊1682例宫颈炎患者进行TCT检查,并对其中TCT检查结果异常的患者行HR-HPV DNA检测。结果1682例患者TCT检查结果异常者158例,占9.39%,其中不典型鳞状细胞和腺细胞病变(ASC-US)63例(3.75%),低度鳞状上皮内病变(LSIL)44例(2.61%),高度鳞状上皮内病变(HSIL)45例(2.67%),鳞状上皮细胞癌(SCC)6例(0.36%)。158例TCT检查异常者HR-HPV DNA检测阳性85例,阳性率53.78%;HR-HPV DNA阳性率分布为:ASC-US23.81%(15/63)、LSIL65.90%(29/44)、HSIL77.77%(35/45)、SCC100.00%(6/6),阳性率随宫颈病变级别升高而升高。结论TCT和HR-HPV DNA检查是筛查宫颈癌前病变的有效方法,二者结合有利于提高宫颈癌及癌前病变的检出率。

利用胶原构建皮肤组织工程支架的研究

目的利用胶原海绵膜构建皮肤组织工程支架.方法从大鼠鼠尾肌腱中提取胶原.胶原和6-硫酸软骨素冷冻干燥,重度脱水及戊二醛交联后制得胶原海绵膜.将其行扫描电镜观察;并埋藏在Balb/c小鼠皮下,术后定期取出观察组织学变化.将成纤维细胞种植于该支架上.结果构建的支架孔径均匀,孔径在50～100 μm;具有良好的组织相容性,并逐渐降解.成纤维细胞于其上生长良好.结论该支架适合成纤维细胞生长,可作为组织工程皮肤的支架.

三种人脐静脉内皮细胞分离方法的比较

目的建立人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分离和培养的方法。方法分别采取“灌注消化法”、“机械刮取法”和“灌注搓揉法”来分离HUVECs。通过苔盼蓝排斥法检测细胞活力并计数,进行免疫荧光法鉴定,比较这3种方法在获取的细胞数目、细胞活力和纯度方面的差异。常规进行细胞的原代培养和传代培养。取第3代培养细胞绘制细胞生长曲线,根据细胞生长特点,形态及表型特征对培养细胞进行鉴定。结果“灌注搓揉法”所分离的细胞无论从细胞数目、细胞活力和纯度方面均优于传统的“灌注消化法”和“机械刮取法”。培养的细胞从形态、生长特点和表型鉴定证实为血管内皮细胞(ECs)。结论“灌注搓揉法”是一种获取血管ECs成功率高,可靠的方法。

超高效液相色谱-串联质谱法测定人血浆利伐沙班浓度

目的建立测定人血浆中利伐沙班浓度的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法。方法以乙腈沉淀蛋白处理血浆样品,d4-利伐沙班为内标。色谱柱为Thermo Hypersil Gold C18(2.1 mm×100 mm,1.9μm)。流动相为乙腈-水(含0.1%甲酸和5 mmol·L-1醋酸铵),梯度洗脱。质谱条件为电喷雾离子源,正离子模式检测,扫描方式为多反应离子监测。用于定量分析的离子反应分别为m/z 436.1→m/z 145.1(利伐沙班)和m/z 440.2→m/z 145.0(d4-利伐沙班)。结果利伐沙班在1～500 ng·mL^(-1)范围内线性良好,定量下限为1 ng·mL^(-1),日内日间精密度均<8%,绝对回收率90.09%～95.23%,基质效应93.50%～100.09%。血浆样品室温(20℃)放置4 h,处理后(4℃)放置24 h,冻存(-80℃) 50 d以及反复冻融3次稳定性良好,样品浓度均无显著变化。结论该分析方法灵敏、准确,样品处理简便、快速,能为该药的药物相互作用评价和个体化用药实践提供方法学参考。

鸡蛋和牛奶粗提抗原与类风湿性关节炎的相关性分析研究

目的通过建立类风湿性关节炎CIA模型,探讨食物抗原与类风湿性关节炎的相关性,为临床预防和治疗类风湿性关节炎提供理论依据。方法对Wistar大鼠尾根、足部和脊柱两侧注射牛Ⅱ型胶原免疫诱导建立CIA模型,通过组织病理学和免疫学对模型进行评价,检测TNF-α、IL-17和IL-1细胞因子的表达水平;通过酶联免疫吸附法（ELISA）和免疫印迹法（Western blot）分析鸡蛋和牛奶粗提抗原与CIA模型的相关性。结果 45 d后成功建立CIA模型,ELISA检测发现鸡蛋和牛奶粗提抗原与CIA模型组免疫反应较高,Western blot检测到鸡蛋和牛奶与CIA模型组免疫反应存在特异性蛋白,蛋白相对分子质量分别在45 000-60 000和80 000-90 000之间。结论食物抗原与类风湿性关节炎存在一定的相关性,鸡蛋和牛奶中的特异蛋白的种类及作用需进一步研究。

联合检测粪便MGMT基因甲基化和隐血在结直肠癌诊断中的价值

目的探讨粪便O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因(MGMT)甲基化和粪便隐血试验(FOBT)联合检测在结直肠癌(CRC)诊断中的价值。方法用甲基化特异性PCR(MSP)及FOBT对56例CRC患者和34例体检健康者进行粪便MGMT基因启动子甲基化联合检测,分析MGMT基因启动子甲基化和FOBT与CRC临床病理特征的关系。结果 CRC患者粪便MGMT基因启动子甲基化率为33.9%,体检健康者为2.9%;联合FOBT检测诊断CRC敏感性为55.4%,明显高于单独MGMT基因甲基化的33.9%(χ2=14.674,P<0.01)和单独FOBT的33.4%(χ2=14.322,P<0.01)。MGMT基因甲基化与CRC患者的肿瘤部位、肿瘤大小、分化程度、Dukes分期均无相关性(P>0.05)。结论联合检测粪便MGMT基因启动子甲基化及隐血可提高CRC的诊断效率,有望成为CRC的非侵入性筛查方法。

SDF-1/CXCR7生物学轴与肿瘤的研究进展

历来认为趋化因子受体4（chemokine receptor 4,CXCR4）是趋化因子SDF-1的唯一受体,SDF-1/CXCR4生物学轴在肿瘤的发生发展过程中起重要作用,最近研究发现SDF-1存在另一个受体CXCR7,并且SPF-1/CXCR7生物学轴同样对肿瘤的发生发展起着重要的作用.本文就SPF-1/CXCR7生物学轴在肿瘤中的增殖、侵袭、转移以及肿瘤治疗等方面的研究作一综述.

HIV-1gp120通过影响NR2B、PSD-95表达损伤神经元

目的研究HIV-1病毒的表面包膜糖蛋白gp120对大鼠皮质神经元的毒性机制。方法实验用SD胎鼠来源的原代培养的皮层神经元,用免疫细胞化学染色和Western blot法检测gp120对含2B亚基的NMDA受体(NR2B)和突触后致密蛋白95(PSD-95)表达的影响,用MTT法检测gp120对神经元的毒性。结果 gp120对神经元有剂量依赖性的毒性作用,其毒性能被NR2B特异拮抗剂美金刚阻断。gp120能明显增加大鼠皮层神经元总NR2B的表达,而降低PSD-95的表达量。结论 gp120可通过使神经元NR2B表达增加及PSD-95的表达减少来损伤神经元,NR2B特异受体拮抗剂能阻止gp120诱导的神经元损伤。

NMDA受体及其与心血管疾病关系的研究进展

心血管疾病是人类健康的主要威胁,同时也是全世界范围内导致死亡的主要原因之一。N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartic acid receptor,NMDAR)是一种重要的离子型谷氨酸受体,其组成亚单位的生理学和药理学功能都很复杂。NMDAR对钙离子高度渗透,控制许多与钙相关的生理过程。NMDAR参与高血压、心律失常、心肌梗死等心血管疾病的发生与发展过程。

内皮素-1在烫伤大鼠脑血管损伤中的表达

目的探讨内皮素-1(ET-1)在烫(烧)伤大鼠脑血管损伤的表达及其作用。方法应用组织学方法观察8只烫伤大鼠脑基底动脉组织结构的变化;应用RT-PCR测定48只烫伤大鼠脑基底动脉ET-1 mRNA的表达;应用Western blotting分析48只烫伤大鼠脑基底动脉ET-1的表达;应用放射免疫分析检测48只烫伤大鼠脑基底动脉ET-1水平的变化。结果烫伤大鼠脑基底动脉呈现病理学组织结构变化;烫伤后3h大鼠脑基底动脉ET-1 mRNA表达较正常对照组开始升高,6h达高峰;烫伤后6h大鼠脑基底动脉ET-1表达较正常对照组增强,12h达高峰;烫伤后各组大鼠脑基底动脉ET-1水平较正常对照组明显升高,6h达高峰。结论烫(烧)伤可诱发大鼠脑血管ET-1表达增加,增加表达的ET-1可能与烫(烧)伤大鼠脑血管损伤的病理发生有关。

小鼠卵巢一氧化氮、内皮素在动情周期不同阶段内毒素应激中的变化

目的观察小鼠在动情周期不同阶段腹腔注射(ip)内毒素(LPS)时卵巢一氧化氮(NO)和内皮素(ET)含量的变化及与血浆E2和P含量变化的关系。方法用阴道涂片法确定小鼠动情周期,分别用RIA法和分光光度法检于动情周期不同阶段ip LPS时卵巢NO、ET的变化及与E2和P变化的关系。结果卵巢NO含量分别于动情期(此时E2含量较高)、动情后期(此时P含量较高)及动情间期(此时E2和P含量均低)受LPS处理后均升高,但于动情间期的升高程度更加明显;卵巢ET含量分别于动情期和动情间期受LPS处理后升高,但于动情后期受LPS处理无明显变化。结论内毒素诱导的NO、ET的升高与动情周期有关,E2或/和P能通过部分或完全拮抗内毒素诱导的NO或/和ET的升高,从而对内毒素导致的机体损伤产生保护性作用。

慢病毒-绿色荧光蛋白载体转染人眼睑成纤维细胞的研究

目的将慢病毒-绿色荧光蛋白载体感染人眼睑成纤维细胞,为诱导性多潜能干细胞研究奠定基础。方法采用0.25%dispeasⅡ酶冷消化联合组织块贴壁法培养人眼睑成纤维细胞,免疫组化SP法鉴定细胞种类,将慢病毒-绿色荧光蛋白载体以不同的感染复数(MOI值)感染细胞,并于感染48 h后流式细胞仪检测感染效率。结果该实验方法能获得大量的成纤维细胞,并且纯度高,当MOI值为40时,其感染效率为95.37%。结论慢病毒-绿色荧光蛋白载体能够高效稳定感染人眼睑成纤维细胞表达绿色荧光蛋白,是诱导性多潜能干细胞技术研究的理想种子细胞。

脐带间充质干细胞生物学特性的研究

目的探讨脐带(UC)间充质干细胞(MSC)生物学的特性。方法行剖宫产术时采集胎儿UC,采用1g·L-1Ⅱ型胶原酶消化、分离UC-MSC。将第3代UC-MSC随机分为3组:正常对照组、诱导向脂肪细胞分化组和诱导向软骨细胞分化组,分别在光学显微镜下观察UC-MSC形态,流式细胞仪检测UC-MSC表面标志,体外诱导UC-MSC分化为软骨及脂肪细胞。结果第3代UC-MSC经流式细胞仪测定证明,其高表达CD29、CD105、CD166和CD90,不表达CD34、CD45。正常对照组的UC-MSC细胞呈长梭形,排列有明显方向性;诱导向脂肪细胞分化组的UC-MSC细胞呈圆形或近似圆形;诱导向软骨细胞分化组的UC-MSC细胞呈梭形,也有呈圆形或近似圆形。油红O染色证明UC-MSC经诱导分化成脂肪细胞,阿新兰染色UC-MSC经诱导分化成软骨细胞。结论UC-MSC具有多能性,其可作为一种新的MSC来源,并可用于临床干细胞移植。

RNA干扰MeCP2对肺癌细胞A549增殖的影响

目的研究甲基化结合蛋白MeCP2对肺癌细胞A549增殖的影响。方法针对GeneBank中MeCP2基因的不同靶点,设计并合成两条DNA干扰序列,克隆到真核表达载体pSilencer-2.1-U6,构建能够转录形成MeCP2-shRNA的重组质粒pSilencer-MeCP2,经PCR、测序鉴定正确后,稳定转染A549细胞,在mRNA和蛋白水平观察两重组质粒对MeCP2的干扰作用,MTT法检测对细胞增殖能力的影响。结果成功构建两个针对MeCP2不同靶序列的shRNA真核表达质粒,两质粒在mRNA和蛋白水平可以使MeCP2表达明显下调,稳定转染两质粒的A549细胞增殖能力明显减弱。结论甲基化结合蛋白MeCP2参与了肺癌细胞的恶性增殖。

S100A4基因在子宫内膜异位症中的表达及意义

目的探讨S100A4基因在子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)及正常人在位内膜细胞中的表达及意义。方法通过细胞培养、细胞鉴定及定量逆转录聚合酶链反应(QRT-PCR)方法检测30例EMs在位内膜细胞(EMs组)及30例正常子宫在位内膜细胞(对照组)S100A4基因的表达情况。结果 Quantity One等定量软件分析结果发现EMs组S100A4蛋白灰度值明显高于对照组(P<0.05);通过QRT-PCR系统软件分析EMs组患者的S100A4mRNA表达量比对照组高约3倍(P<0.001)。结论 EMs在位内膜细胞中S100A4基因表达增加,S100A4基因差异表达与EMs侵袭和转移有关。

脂联素与恶性肿瘤的研究进展

脂联素是新近发现的由脂肪组织特异分泌的一种激素,在人体血浆中含量丰富。其在糖代谢和脂类代谢中起着重要作用,在与肥胖相关的恶性肿瘤的发生和发展过程中也起着重要的作用。现对脂联素与恶性肿瘤的相关性研究进行综述,探讨其作用机制和应用前景。

GST-gAD在大肠杆菌中的优化表达及其生物活性测定

目的探讨可溶性重组脂联素球状结构域融合蛋白(GST-gAD)在大肠杆菌中的优化表达及其抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的生物学活性。方法用含有GST-gAD基因的原核表达载体pGEX-KG-gAD转化E.coli J M109,同理空载质粒pGEX-KG作为内对照同时转化E.coli J M109;将影响融合蛋白表达的4个因素,温度、IPTG浓度、细菌密度OD600和诱导时间进行正交设计,确定其优化表达条件,用亲和层析法纯化GST-gAD;用MTT法检测GST-gAD对MDA-MB-231增殖的影响。结果GST-gAD最佳表达条件为温度32℃,IPTG的浓度1.0mmol/L,诱导前细菌密度OD6001.0,诱导表达时间1.5h。GST-gAD浓度高于0.5μmol/L时对MDA-MB-231细胞的生长具有明显的抑制作用。结论通过正交设计确定了可溶性GST-gAD融合蛋白在大肠杆菌中表达的优化条件并且当重组融合蛋白在大于0.5μmol/L时对MDA-MB-231细胞的生长具有明显的抑制作用。