增强型绿色荧光蛋白标记技术示踪组织工程化骨形成

目的:观察以脂质体介导法转染的增强型绿色荧光蛋白质粒作为骨组织工程种子细胞示踪剂的可行性。方法:实验于2005-07/2006-11在南昌大学第二附属医院分子医学实验室完成。选取12个月龄中国青山羊2只作为骨髓基质干细胞供体。另取BACB/un裸鼠9只作为骨髓基质干细胞-珊瑚复合物受体。①将已转化pEGFP-N2大肠杆菌109菌种,进行质粒提取并经AvaⅡ酶切鉴定。②脂质体lipofectamine2000介导转染羊骨髓基质干细胞。分别于转染24h、6个月后计算荧光的转染效率。标记与未标记细胞经成骨诱导分化后,检测碱性磷酸酶活性和四环素钙结节染色,以未标记的同期细胞作对照。③将标记细胞接种于珊瑚支架,形成骨髓基质干细胞-珊瑚复合物,分别于体外培养4,7,14d后进行电镜扫描观察。④将体外培养7d的骨髓基质干细胞-珊瑚复合物移植于裸鼠皮下,8周后取出,荧光显微镜下进行示踪观察,苏木精-伊红染色观察组织结构。以未标记的骨髓基质干细胞-珊瑚复合物、单纯珊瑚作对照。结果:共纳入中国青山羊2只,BACB/un裸鼠9只,作为受体的9只裸鼠进入结果分析。①质粒经酶切后电泳,可见3条带,分别为445bp,1938bp,2354bp,确定所提质粒为pEGFP-N2。②转染24h后绿色荧光表达率35%;经G418筛选,转染6个月后绿色荧光表达率75%;与对照组相比,标记细胞碱性磷酸酶活性差异无统计学意义(P>0.05),均具有钙结节形成能力。③标记细胞与材料贴附生长良好,并分泌胶原纤维及钙盐结晶样基质。④组织学示新生骨样组织围绕材料孔隙生成;新生组织细胞内有绿色荧光表达,同时对照组未观察到绿色荧光。结论:脂质体介导法转染的pEGFP-N2标记骨髓基质干细胞,可用于裸鼠体内示踪,是一种理想的组织工程化骨组织的示踪方法。

骨组织工程研究的方法论检讨及其思路创新

目前骨组织工程的研究十分注重分析和实验的方法,走的主要是还原论的道路。系统科学的进展表明,生物体功能的行使远非简单的子系统叠加,单纯的还原论方法遇到了挑战。系统论更适合于骨组织工程研究的方法论指导。讨论整体论与还原论相结合的骨组织工程研究的创新思路,探讨建立体内灌注诱导成骨微环境系统这一创新性的近同构模型。

含表皮干细胞组织工程皮肤的构建研究

目的用表皮干细胞和成纤维细胞作为种子细胞研制一种增殖能力强的具有表皮、真皮的组织工程化人工复合皮肤。方法从幼儿包皮中分离表皮干细胞，用胶原Ⅳ纯化、富集表皮干细胞，接种在3T3细胞滋养层上，将体外传代培养的表皮干细胞和真皮成纤维细胞分别接种在经冷冻干燥及戊二醛交联的Ⅰ型胶原基质网架的两侧，在液面下培养3周后，改为气-液界面培养，构建含表皮干细胞的复合皮肤，并进行组织学、免疫组织化学及电镜观察。结果表皮干细胞呈克隆状生长，G0/G1期细胞和a6^briCD71^dim细胞百分率明显高于对照组，差异有统计学意义（P〈0．05），实验组K19免疫细胞化学染色呈阳性，对照组呈阴性。光镜下观察可见体外培养的含表皮干细胞的人工复合皮肤，具有表皮和真皮，表皮层由基底至浅层可见3—5层细胞，角蛋白免疫组化染色阳性。结论表皮干细胞种植于胶原海绵膜上，可生成全层组织工程皮肤，具备了同正常皮肤类似的结构，表明其具有在体外分化成表皮的能力。

改良外切法鼻翼缩小术的临床应用

目的探讨改良外切法鼻翼缩小术矫正鼻翼肥大的效果。方法选取2017年1月到2019年1月于南昌大学第二附属医院整形外科就诊的16例鼻翼肥大患者,男1例,女15例,年龄21~39岁。均采用改良外切法鼻翼缩小术,术中将鼻翼小叶外缘切口延长到鼻前庭面,并切除部分鼻翼小叶前庭组织,对鼻翼断端朝鼻孔方向旋转内移,使得鼻翼附着点向内、向上移位,重新定位鼻翼附着点,矫正鼻翼肥大和鼻基底过宽。采集患者术前、术后1个月、6个月正位、侧位、鼻基底位照片,测量内眦间距离(ICD)、鼻翼间距离(IW)及鼻基底间距离(BW),计算术前、术后1个月、6个月时IW、BW与ICD的比值,及术后1个月、6个月时IW和BW的缩窄率。采用温哥华瘢痕VSS量表进行瘢痕评估。符合正态分布的变量使用配对t检验进行组间比较,不符合正态分布的变量使用Wilcoxon秩和检验进行分析,P<0.05为差异具有统计学意义。结果本组16例,均随访6~12个月,平均8个月。16例患者IW/ICD术前为1.160±0.080,术后1个月为1.049±0.047,较术前缩小0.110±0.049,6个月为1.038±0.047,较术前缩小0.120±0.049,术后与术前比较差异均具有统计学意义(P<0.05),IW缩窄率术后1个月为9.3%,术后6个月为10.2%。BW/ICD术前为1.035±0.047,术后1个月为0.960±0.039,较术前缩小0.072±0.019,术后6个月为0.950±0.034,较术前缩小0.079±0.020,术后与术前比较差异均具有统计学意义(P<0.05),BW缩窄率术后1个月为7.0%,术后6个月为7.6%。温哥华瘢痕VSS量表评分,术后1个月为3(2.25,3)分,术后3个月为1(0.25,1)分,术后6个月为1(0,1)1分,术后3个月与术后1个月时比较,差异具有统计学意义(Z=-3.472,P=0.001),术后6个月与术后3个月时比较,差异无统计学意义(Z=-1.414,P=0.157)。所有患者术后均无切口感染、鼻翼不对称、术后鼻腔通气阻塞等明显并发症,术后鼻翼肥大和鼻基底过宽得到明显改善,术后瘢痕不明显。患者对术后效果满意。结论改良外切法鼻翼缩小术可有效治疗鼻翼肥大,无明显术后并发症,是矫正鼻翼肥大的一种良好术式。