某三甲医院目标人群胃癌筛查意愿影响因素研究

目的分析江西省南昌市某三甲医院目标人群早期胃癌筛查意愿的影响因素,为开展早期胃癌防治健康宣教工作提供指导作用。方法2021年11月至2022年1月于南昌市某三甲医院健康管理中心纳入符合《中国早期胃癌筛查流程专家共识意见》中的146名早期胃癌筛查目标人群进行筛查意愿调查,分析筛查意愿水平及其影响因素。结果纳入调查的146名人员中,完成早期胃癌筛查90人,未完成筛查56人。筛查信念各维度总得分情况为:行为态度(16.63±2.55)分、主观规范(8.32±1.38)分、知觉行为控制(11.92±1.94)分:各维度条目均分由高到低为:主观规范(4.16±0.77)分、行为态度(4.16±0.70)分、知觉行为控制(3.97±0.83)分。单因素分析结果显示,文化程度(χ^(2)=13.977,P=0.005)、幽门螺杆菌感染史(χ^(2)=9.999,P=0.002)、胃癌家族史(χ^(2)=10.905,P=0.001)、胃部相关疾病史(χ^(2)=23.393,P<0.001)、行为态度(Z=4.460,P<0.001)、主观规范(Z=5.138,P<0.001)、知觉行为控制(Z=4.191,P<0.001)均与目标人群早期胃癌筛查行为有关联。多因素Logistic回归分析结果显示,胃部相关疾病史(OR=0.021,95%CI 0.004~0.114,P<0.001)、胃癌家族史(OR=0.019,95%CI 0.001~0.282,P=0.004)、主观规范(OR=1.701,95%CI 1.077~2.686,P=0.023)、知觉行为控制(OR=1.573,95%CI 1.048~2.361,P=0.029)是目标人群早期胃癌筛查行为的影响因素。结论目标人群的早期胃癌筛查行为受到胃部相关疾病史、主观规范和知觉行为控制的影响,可针对性地加强早期胃癌防治知识宣教工作,不断提高目标人群胃癌防治知识水平和自主筛查意识,从而提高目标人群早期胃癌筛查率,降低胃癌发病率。

消化内镜下局部注射肾上腺素治疗胃溃疡出血的疗效观察

目的观察消化内镜下局部注射肾上腺素治疗胃溃疡出血的的临床疗效。方法选取胃溃疡出血患者80例,随机分为对照组与观察组,各40例,在胃镜下进行电凝止血,观察组同时在溃疡出血点局部行肾上腺素注射,观察止血效果。结果两组即时止血率均为100.00%,观察组24 h止血率为90.00%高于对照组72.50%(P<0.05),14 d再出血率为2.50%低于对照组20.00%(P<0.05),观察组无外科治疗,对照组外科治疗率为5.00%,外科治疗率比较差异无统计学意义;观察组14 d输血量、住院时间明显少于(短于)对照组(P<0.05)。结论胃溃疡出血患者在消化内镜下行局部注射肾上腺素治疗能起到快速止血效果,降低再出血发生率,疗效肯定,操作简单,值得临床推广。

放大内镜对早期消化系肿瘤及其癌前病变的诊断价值

随着内镜技术的发展和在临床诊断中的作用日益收到重视,放大内镜在临床中也逐渐受到青睐,并越来越多运用于临床.目前新型的放大内镜可清晰显示消化道黏膜腺管开口和微细血管等细微结构的变化,发现和诊断普通内镜难以发现的一些早期病变,特别是早期恶性肿瘤及其癌前病变.近年来在放大内镜检查中更配于染色对比及窄带成像等技术,使放大内镜的的运用得到进一步拓展.本文就放大内镜对早期消化系肿瘤及其癌前病变的诊断价值作一综述.

肠系膜上动静脉瘘致上消化道出血、顽固性腹腔积液1例

患者男,51岁,因＂腹胀、腹围增大3月余,反复呕血、黑便2月余＂入院。患者近3个月无明显诱因出现腹胀、腹围增大,于当地医院检查发现腹腔积液,对症治疗,症状无改善;近2个月反复呕血、黑便,后于上级医院拟诊为＂肝硬化伴食管静脉曲张破裂出血、慢性肾功能不全＂,行腹腔积液浓缩回输等治疗,症状仍无缓解。患者无肝炎、血吸虫感染、嗜酒和家族遗传病史,无腹部手术史。

防跌倒预警在消化道出血患者中的应用

目的探讨防跌倒预警在预防消化道出血患者跌倒中的作用。方法将998例消化道出血患者按入院时间分为2组。2009年1-12月消化道出血住院的500例患者为对照组,采取传统的方法进行护理;2010年1-12月入院的498例患者为观察组,在对照组护理的基础上,实施防跌倒预警(悬挂醒目的防跌倒牌于床头、强化护士服务意识、加强健康宣教等)。对2组消化道出血住院患者发生跌倒事件进行比较。结果观察组患者发生跌倒事件为3例(0.6%),未发生投诉事件;对照组发生跌倒事件11例(2.2%),发生投诉事件2例(0.4%)。观察组发生跌倒事件及患者投诉事件均较对照组明显减少(均P<0.05)。结论将防跌倒预警用于消化道出血住院患者跌倒的预防,可有效地避免患者跌倒事件的发生,提高护理质量。

上皮型钙黏蛋白基因甲基化与消化系肿瘤

上皮型钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)基因位于染色体16q22.1,它编码的E-cad蛋白是一种钙依赖性黏附分子,分布于各类上皮细胞,在维持细胞的极性和完整性方面起重要作用。近年来大量研究表明,E-cad基因启动子区5'CpG岛的高甲基化可导致基因功能丧失,并与多种肿瘤尤其是消化系肿瘤的增殖、侵袭或转移密切相关。

STAT和常见消化系统恶性肿瘤的关系

STAT即信号传导及转录激活因子（signal transducers and activators of transcription），1992年在研究干扰素时被发现是一类定位于染色体的蛋白质。一般具有750～850个氨基酸，定位于不同的染色体，含有SH2和SH3结构域，可与特定的含磷酸化酪氨酸的肽段结合。

肝癌无创早期诊断的研究进展

肝癌是一种严重威胁人类生命健康的常见肿瘤,由于肝癌早期起病隐匿,缺乏特异症状,且常规检查难以筛查出早期肝癌,临床上肝癌的诊断多处于晚期。晚期肝癌可选择的治疗手段少、预后差、复发率高,导致肝癌病死率高,因此早期诊断尤为重要。目前广泛应用于临床的肝癌无创筛查缺少足够的灵敏度及特异度,迫切需要寻找更可靠的诊断方法。本文就肝癌无创早期诊断的研究进展进行综述,为提高肝癌早期诊断率提供参考。

C-sis对缺氧导致心肌细胞凋亡的抑制作用

目的探讨C-sis对缺氧诱导心肌细胞凋亡的作用。方法制备原代小鼠心肌细胞;将心肌细胞分为空白组、缺氧组、缺氧及空载质粒转染组和缺氧及pcDNA3.1/C-sis转染组;将空载质粒及pcDNA3.1/C-sis分别转染缺氧及空载质粒转染组和缺氧及pcDNA3.1/C-sis转染组心肌细胞;对缺氧组、缺氧及空载质粒转染组和缺氧及pcDNA3.1/C-sis转染组心肌细胞进行缺氧处理;倒置显微镜观察各组心肌细胞的搏动频率、异常搏动次数;全自动生化分析仪测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)含量,采用MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白、C-sis蛋白表达水平。结果与空白组相比,缺氧组心肌细胞搏动频率明显变慢[(99±5)次·min^(-1)比(159±21)次·min^(-1),P<0.01],异常搏动次数明显增多[(16.9±1.4)次·min^(-1)比(2.4±0.7)次·min^(-1),P<0.01],细胞培养液中LDH含量明显升高[(88.27±13.14)U·L^(-1)比(23.54±5.81)U·L^(-1),P<0.01],细胞存活率降低[(57.54±4.84)%比(100.00±0.00)%,P<0.01],凋亡率升高[(39.26±4.05)%比(1.77±0.87)%,P<0.01],Caspase3和Bax蛋白表达明显升高[Caspase3:(2.27±0.94)比(0.22±0.11),P<0.01;Bax:(1.79±0.77)比(0.87±0.27),P<0.05],Bcl-2蛋白表达明显下降[(0.12±0.06)比(0.84±0.24),P<0.01]。而pcDNA3.1/C-sis质粒转染后C-sis表达明显升高,并抑制上述缺氧所致心肌细胞发生的一系列变化(P<0.01或P<0.05)。结论C-sis能够抑制缺氧所致的心肌细胞凋亡。

使用奥曲肽治疗的急性胰腺炎患者低血糖发生风险及护理干预对策研究

目的探究急性胰腺炎患者使用奥曲肽治疗过程中发生低血糖的风险因素,并提出针对性护理干预对策。方法回顾性分析该院2020年6月至2021年6月接收的120例急性胰腺炎患者为研究对象,所有患者均接受奥曲肽治疗。依据是否发生低血糖,将入组的120例急性胰腺炎患者分为两组,发生低血糖患者纳入观察组,其余患者纳入对照组。比较两组患者给药方式、急性胰腺炎严重程度、有糖尿病史患者比例及白细胞介素(IL)-8、肿瘤坏死因子(TNF)-α、超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平等资料;采用多因素Logistic回归分析急性胰腺炎患者发生低血糖的危险因素;对确定的连续变量风险因素绘制受试者工作特征(ROC)曲线,评估对采用奥曲肽治疗的急性胰腺炎患者发生低血糖的诊断效能;提出对风险因素的针对性护理干预对策。结果120例急性胰腺炎患者共发生低血糖病例22例,36例次。两组患者不同给药方式、急性胰腺炎严重程度、病理类型、有糖尿病史患者比例比较,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,给药方式为静脉滴注0.6 mg/12 h、有糖尿病史、治疗前血清IL-8及TNF-α水平升高是采用奥曲肽治疗的急性胰腺炎患者发生低血糖的危险因素(P<0.05)。IL-8诊断采用奥曲肽治疗的急性胰腺炎患者发生低血糖的ROC曲线下面积为0.676,截断值为11.05 ng/L,灵敏度为54.55%,特异度为75.51%;TNF-α诊断采用奥曲肽治疗的急性胰腺炎患者发生低血糖的ROC曲线下面积为0.737,截断值为81.00 ng/L,灵敏度为81.82%,特异度为65.31%。结论采用奥曲肽治疗的急性胰腺炎患者发生低血糖的风险因素与患者炎症反应本身、给药方式及糖尿病史有关,以上因素应进行针对性护理,降低低血糖发生概率。

沉默CCND1对肝细胞癌细胞5-氟尿嘧啶耐药性的影响及机制

目的探讨沉默细胞周期蛋白D1基因(CCND1)对肝细胞癌(HCC)细胞(SMMC-7721、HepG2细胞)5-氟尿嘧啶(5-Fu)耐药性的影响及机制。方法常规培养SMMC-7721、HepG2细胞,并随机分别分为HepG2+NC-siRNA组、HepG2+CCND1-siRNA组和SMMC-7721+NC-siRNA组、SMMC-7721+CCND1-siRNA组,分别用靶向CCND1的siRNA(CCND1-siRNA)、阴性对照siRNA(NC-siRNA)转染细胞。转染48 h后取各组细胞分别置于含10μg/mL 5-Fu的培养基中培养48 h。用荧光定量PCR法检测CCND1 mRNA表达,用CCK-8实验检测细胞活力,用流式细胞术检测细胞凋亡率,用Western blotting法检测CCND1、DNA修复相关蛋白[磷酸化组蛋白(γ-H2AX)、同源重组修复蛋白(RAD51)]表达。结果转染后,HepG2+CCND1-siRNA组、SMMC-7721+CCND1-siRNA组CCND1 mRNA、蛋白表达均低于其对照组(HepG2+NC-siRNA组、SMMC-7721+NC-siRNA组),比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。5-Fu暴露下72 h,HepG2+CCND1-siRNA组、SMMC-7721+CCND1-siRNA组细胞活力(OD值)低于其对照组,凋亡率高于其对照组,γ-H2AX蛋白表达高于其对照组,RAD51蛋白表达低于其对照组,比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论沉默CCND1可提高HCC对5-Fu的耐药性,该作用可能与调控DNA修复相关蛋白表达有关。

COL4A1促进肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭和上皮-间质转化

目的探讨Ⅳ型胶原蛋白1(COL4A1)对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮-间质转化(EMT)的作用,及其上游调控机制。方法将COL4A1过表达载体、人着色性干皮病基因(XPD)过表达载体、miR-29a-3p模拟物、miR-29a-3p抑制物、Si-COL4A1、Si-XPD按实验目的转染各组细胞,以空载质粒、NC-模拟物、NC-抑制物、NC-SiRNA作为相应的对照组;qRT-PCR检测COL4A1和XPD mRNA水平;蛋白质印迹法检测COL4A1、XPD和EMT相关蛋白质水平;MTT检测细胞活力;Transwell实验检测各组细胞的迁移、侵袭能力;萤光素酶报告基因实验验证miR-29a-3p和COL4A1的靶向关系。结果肝癌组织中COL4A1 mRNA[(3.25±1.10)vs(0.88±0.45),P<0.01]和蛋白质[(2.58±0.50)vs(1.00±0.14),P<0.01]水平均高于癌旁组织。SMMC-7721、HepG2(P<0.01)和Hep3B(P<0.05)细胞株的COL4A1 mRNA和蛋白质水平均高于L02细胞。与Hep3B+空载质粒相比,过表达COL4A1促进了Hep3B细胞增殖[(0.48±0.06)vs(0.76±0.09),P<0.01]、迁移[(109.00±9.17)个vs(199.33±15.04)个,P<0.01]、侵袭[(84.67±8.02)个vs(133.00±11.53)个,P<0.01]和EMT(P<0.05)。与HepG2+NC-SiRNA相比,沉默COL4A1抑制了HepG2细胞增殖[(0.62±0.09)vs(0.42±0.03),P<0.01]、迁移[(173.00±12.00)个vs(75.00±7.94)个,P<0.01]、侵袭[(105.33±7.51)个vs(47.00±5.57)个,P<0.01]和EMT(P<0.05)。过表达XPD后,HepG2细胞的COL4A1 mRNA[(1.00±0.09)vs(0.55±0.06),P<0.01]和蛋白质[(1.00±0.09)vs(0.33±0.04),P<0.01]水平较HepG2+空载质粒组下降,沉默XPD在Hep3B细胞中出现了相反的结果[与Hep3B+NC-SiRNA相比:mRNA,(1.00±0.08)vs(2.52±0.25);蛋白质,(1.00±0.09)vs(2.56±0.36),P<0.01]。转染miR-29a-3p模拟物后,HepG2细胞中COL4A1 mRNA[(1.00±0.13)vs(0.47±0.07),P<0.01]和蛋白质[(1.00±0.15)vs(0.36±0.09),P<0.01]水平较NC-模拟物+HepG2下降;而miR-29a-3p抑制物在Hep3B细胞中出现了相反的结果[与NC-抑制剂+Hep3B相比:mRNA,(1.00±0.13)vs(3.30±0.41),P<0.01;蛋白质,(1.00±0.14)vs(2.91±0.30),P<0.01]。miR-29a-3p模拟物逆转了沉默XPD介导的Hep3B细胞COL4A1上调(P<0.01)。结论COL4A1促进肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭和EMT,并受XPD-miR-29a-3p轴的负性调控。

肝硬化晚期伴腹水患者及家属焦虑抑郁状况对患者自护能力的影响研究

目的:研究肝硬化晚期伴腹水患者及家属焦虑抑郁状况对患者自护能力的影响。方法:选取2020年4月—2021年1月南昌大学第二附属医院收治的83例肝硬化晚期伴腹水患者及其家属作为研究对象,收集并整理所有研究对象的资料,对所有患者及家属进行心理干预,分别在干预前后测定患者及家属的汉密顿焦虑量表(HAMA)、汉密尔顿抑郁量表(HAMD)评分,同时测定患者的自护能力量表(ESCA)评分,对比不同性别、职业、年龄、文化程度、病程、肝硬化分级、HAMA、HAMD患者的ESCA评分。将有差异的项目纳入logistic回归方程,分析影响患者自护能力的因素,利用Pearson相关性分析计算相关性,分析患者及家属的HAMA、HAMD评分与患者ESCA评分的相关性。结果:干预后患者及家属的HAMA、HAMD评分均低于干预前,差异有统计学意义(t=16.655、17.054、17.940、21.528,P<0.05)。干预后患者的自我护理知识、自我护理概念、自我护理责任感、自我护理技能、总分评分高出干预前,差异有统计学意义(t=15.719、26.605、18.149、24.084、45.921,P<0.05)。不同年龄、文化程度、病程、肝硬化分级、HAMA、HAMD患者的ESCA评分相比,差异有统计学意义(t=10.991、29.450、9.033、9.397、8.431、9.946,P<0.05)。经logistic方程计算,上述因素均是患者自护能力的影响因素。Pearson相关性分析显示,患者及家属的HAMA、HAMD评分与患者ESCA评分呈现负相关性,差异有统计学意义(r=-0.231,-0.107,P<0.05)。结论:肝硬化晚期伴腹水患者及家属的焦虑抑郁状况对患者自护能力的影响极大,随着患者及家属焦虑抑郁程度的不断降低,患者自护能力水平随之升高,这一问题应受到临床重点关注,尽早制定相关措施,稳定患者及家属的情绪,为提升患者自护能力提供保障。

人参皂苷Rg3对人胰腺癌细胞Pim-3及Bad凋亡蛋白表达的影响

背景与目的:人参皂苷Rg3是一种抗肿瘤中药单体,有研究表明人参皂苷Rg3对肝癌、肺癌、结肠癌、胰腺癌等肿瘤细胞的浸润具有明显抑制作用。本实验目的是研究人参皂苷Rg3对人胰腺癌细胞株PANC-1中原癌基因Pim-3及磷酸化Bad蛋白pBad(Ser112)、Bad(Ser136)表达的影响。方法:用浓度为0、10、20、40和80μmol/L的人参皂苷Rg3处理PANC-1细胞24h后,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测人参皂苷Rg3对PANC-1细胞增殖的抑制作用;用倒置显微镜和流式细胞术观察人参皂苷Rg3对PANC-1细胞凋亡的诱导作用;用Western blot法检测经不同浓度人参皂苷Rg3处理后的PANC-1细胞中pim-3、Bad、pBad(Ser112)和pBad(Ser136)的表达;定向克隆Pim-3的发夹状寡核苷酸(shor thairpin RNA,shRNA)到真核表达载体形成重组质粒pSilencer 3.1-HINeo-Pim-3 shRNA,将重组质粒通过脂质体介导转染PANC-1细胞,采用Annexin V/PI流式细胞分析法检测转染后PANC-1细胞的凋亡,用Western blot法检测转染后PANC-1细胞的pim-3及pBad(Ser112)的表达。结果:10、20、40和80μmo1/L的人参皂苷Rg3对PANC-1细胞增殖的抑制率分别为20.2%、33.4%、52.8%、65.3%;经10～80μmol/L的人参皂苷Rg3处理后PANC-1细胞呈现明显的凋亡形态学改变,80μmol/L人参皂苷Rg3处理PANC-1细胞24h后,与正常对照组细胞凋亡率(3.3±2.1)%比较,处理组细胞凋亡率(12.2±1.3)%增加(P<0.05);人参皂苷Rg3处理PANC-1细胞24h后,Bad总蛋白表达没有明显变化。pim-3和pBad(Ser112)的表达均随人参皂苷Rg3浓度的增加而逐渐减弱。PANC-1细胞中pBad(Ser136)不表达;Pim-3 shRNA转染PANC-1细胞后,与正常对照组比较,转染组早期凋亡率和总凋亡率均增加[(11.5±3.7)%vs.(5.8±2.2)%,P<0.01;(20.8±2.6)%vs.(13.0±4.1)%,P<0.05],转染组pim-3及pBad(Ser112)表达均低于正常对照组。结论:人参皂苷Rg3可下调胰腺癌细胞PANC-1中Pim-3以及磷酸化Bad蛋白的表达,从而抑制PANC-1细胞增殖,诱导细胞凋亡。

内毒素性急性肝损伤实验动物模型的建立

目的:探讨脂多糖(LPS)对D-半乳糖胺(D-GalN)致敏大鼠在亚致死剂量下的肝损伤作用.方法:48只大鼠随机分为三大组,即6h、24h和48h取材组,每组各16只动物;每个大组再分为两个小组,即处理组和对照组,各8只大鼠.所有处理组大鼠均以LPS(50μg/kg)+D-GalN(300mg/kg),用1mL无菌生理盐水溶解后腹腔内注射,对照组大鼠仅腹腔内注射1mL生理盐水.在相应时间点,采血查谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和胆红素(BIL);肝组织常规固定,HE染色后光镜检查;肝组织细胞凋亡的TUNEL分析采用多聚甲醛固定;肝组织炎性细胞因子TNF-α、IL-1b和细胞凋亡诱导基因bax的表达通过RT-PCR的方法检测.结果:所有处理组大鼠ALT、AST和TBIL在6h内即显著升高,24h达到峰值,48h仍维持于高水平;肝脏大体形态显示:肝脏明显肿胀、失去正常红润光泽而略显苍白、表面见散在的点状及片状出血点、质地偏韧;HE染色可见药物处理6h,肝组织即呈现充血,碎片状坏死和大量炎性细胞浸润.24h肝细胞开始空泡变性、肿胀,并见大片坏死及中性粒细胞浸润.48h则多数肝细胞空泡状变性,肝组织小叶结构紊乱,点状坏死,炎症细胞浸润较前减少.TUNEL分析显示,对照组未见凋亡的肝细胞,6h处理组仅见少量凋亡细胞,凋亡指数(AI)为4.3±1.2%,24h和48h处理组肝组织内则见较多的凋亡细胞,AI分别为20.6±3.3%、21.2±5.7%,但两者P>0.05;24h处理组凋亡细胞百分数为15.83%,对照组凋亡细胞占0.39%,两组间存在显著差异(P<0.001);处理组各时间点TNF-α、IL-1b的表达均较对照组显著升高,其高峰值出现于6h.对照组未见bax的表达,而LPS的应用后6,24,48h的相对表达率为0.193±0.062、0.191±0.043、0.209±0.031.结论:亚致死剂量LPS可造成D-GalN致敏大鼠的急性肝损伤;细胞凋亡是该急性损伤的重要病理形态学改变,而凋亡的发生可能与LPS诱导bax的表达有关;本模型是较理想的内毒素性急性肝损伤的实验动物模型.

智能分光电子染色内镜联合小探头超声在食管浅表性病变诊治中的应用价值

目的研究智能分光电子染色(FICE)内镜联合小探头超声内镜(EUS)在诊断食管浅表性病变中的临床价值。方法选取2013年1月-2016年6月该院消化内镜中心行普通白光胃镜检查可疑食管黏膜病变患者为研究对象,共292例,将患者按随机数字法分为观察组和对照组,各146例,对照组采用普通白光放大内镜进行检查,观察组在对照组检查基础上应用FICE放大内镜及小探头EUS,观察病变处食管上皮乳头内毛细血管袢(IPCL)的改变及病变深度,并推测病理类型,将两组内镜诊断结果与病理组织学诊断结果进行对比分析。结果 FICE放大内镜可清晰观察食管IPCL形态并分型,FICE内镜对食管炎性病变诊断的符合率为82.69%,轻中度不典型增生符合率为82.22%,重度不典型增生符合率为86.96%,食管癌符合率为100.00%。观察组与对照组准确率分别为91.78%和76.02%;灵敏度分别为85.71%和44.44%,前者明显优于后者。FICE内镜发现5处白光内镜漏诊的平坦型病变。结论 FICE模式与普通白光内镜相比,可增强病变的可识别性,能清楚显示病变轮廓和形态,能有效提高活检的准确性,操作方便。FICE联合小探头EUS在食管浅表性病变诊断治疗方面有一定的临床应用价值。

TLR4通过NF-κB信号途径对宫颈癌细胞增殖的影响

目的:研究Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)小干扰RNA(siRNA)是否通过NF-κB信号途径下调Bcl-2而抑制宫颈癌细胞的增殖。方法:设计并合成针对TLR4基因的3条特异性siRNA)及阴性siRNA,并同时设立空白对照,然后用脂质体LipofectamineTM2000转染细胞。通过半定量RT-PCR和Western印迹法分别检测转染前后He La细胞中TLR4 mRNA和蛋白表达水平,Western印迹法检测p65及Bcl-2蛋白表达水平,MTT法和平板克隆检测细胞增殖率,Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期。结果:3条针对TLR4基因的siRNA均能抑制TLR4的mRNA和蛋白表达,其中TLR4-siRNA-003的沉默效率最高。转染TLR4-siRNA-003 48 h后细胞中TLR4的mRNA和蛋白表达水平分别下调62%和89%,p65及Bcl-2蛋白水平明显下调,同时细胞增殖明显受到抑制,细胞凋亡率显著升高,细胞周期被阻滞于G1期。结论:TLR4特异性siRNA能够有效沉默TLR4基因表达,并通过NF-κB信号通路下调Bcl-2而显著抑制宫颈癌He La细胞的增殖。TLR4可能成为治疗宫颈癌的一个新靶点。

鼠尾静脉流体力学转染技术对绿色荧光蛋白表达质粒器官靶向分布的影响

目的:观察流体力学尾静脉注射对绿色荧光蛋白基因器官靶向性的影响,为今后质粒载体的基因治疗和功能研究寻找潜在的靶器官。方法:实验于2005-12/2006-04在江西省分子医学重点实验室完成。选用健康雄性昆明鼠40只,将32只小鼠按随机数字表法分为流体力学注射和常规注射两大组,每大组再分为转染组和对照组两个小组(n=8),并设正常对照组(n=8)。①流体力学转染组将100μg/只绿色荧光蛋白表达质粒溶液2mL在5s内快速注入尾静脉;对照组仅在5s内注入林格氏液2mL。②常规注射组则将2mL林格氏液或绿色荧光蛋白表达质粒溶液在30s左右注入尾静脉。注射结束后24h采集各组小鼠血清检测转氨酶,并采集肝、脾、心、肾、肺和脑组织进行冰冻切片,部分肝组织采用多聚甲醛固定后切片,荧光显微镜下观察。结果:40只小鼠全部进入结果分析,无脱失。①流体力学注射组和常规注射组小鼠血清转氨酶与正常对照组比较差异均无显著性意义(P>0.05)。②常规尾静脉注射引起少数肾小球细胞表达绿色荧光蛋白,而肝、脾、心、肺及脑等组织未见明显绿色荧光蛋白表达。③流体力学注射引起肝内绿色荧光蛋白高水平表达,肝细胞表达率接近45%,其他组织则无绿色荧光蛋白表达。结论:流体力学方法是肝靶向性的活体基因转染方法,绿色荧光蛋白可作为该方法进行目的基因研究的一个可靠和方便的示踪剂。

人剪切修复基因XPD对肝癌细胞生长的抑制作用

目的探讨野生型人剪切修复基因着色性干皮病基因D(xeroderma pigmentosum D,XPD)对肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响,并探讨其机制。方法用脂质体转染法瞬时转染SMMC-7721细胞,转染重组质粒XPD-N2和空载质粒N2,并用未转染的与XPD-N2、N2具有相同遗传背景和代数的SMMC-7721细胞作为空白对照。荧光显微镜观察绿色荧光蛋白报告基因表达情况,流式细胞仪检测细胞周期,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot法检测细胞中XPD、c-myc、cdc25A、cdK2表达量变化,MTT法观察细胞增殖的活力。结果提取出的重组质粒pEGFP-N2-XPD用酶切鉴定,与Genebank上的相符。在荧光显微镜下,可以在SMMC-7721-pEGFP-N2、SMMC-7721-pEGFP-N2-XPD细胞中观察到绿色荧光蛋白的表达,质粒的转染效率为30%左右。流式细胞仪结果显示,pEGFP-N2-XPD重组质粒转染入细胞后,肝癌细胞进入S期发生阻滞,停滞在G1期。RT-PCR、Western blot检测发现SMMC-7721-pEGFP-N2-XPD细胞与SMMC-7721-pEGFP-N2和SMMC-7721两对照组相比,其XPD表达明显增高(P<0.05)。c-myc、cdc25A、cdK2相对表达量明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。与两对照组相比,SMMC-7721-pEGFP-N2-XPD细胞增殖率明显减弱(P<0.05)。结论野生型XPD基因可以在转录和翻译水平抑制SMMC-7721细胞内c-myc、cdc25A、cdK2的表达。而且野生型XPD基因通过抑制cdK2的表达作用于S期DNA损伤检控点,从而抑制SMMC-7721细胞增殖。

自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤对肝星状细胞增殖活化的影响

目的观察自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)增殖活化的影响,并探讨其作用机制。方法体外培养大鼠肝星状细胞株HSC-T6,设立空白对照组和3-MA低剂量组(2.5 mmol/L)、中剂量组(5 mmol/L)、高剂量组(10 mmol/L)。RT-PCR分析不同浓度3-MA对HSC活化标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)以及Ⅰ型胶原蛋白基因表达的影响,Western blot法检测不同浓度3-MA对HSC中自噬水平标志蛋白LC3Ⅱ、α-SMA以及Ⅰ型胶原蛋白表达水平的影响;MTT法检测3-MA对HSC增殖的影响,流式细胞术分析3-MA对HSC细胞周期的影响。结果低、中、高剂量3-MA作用于HSC后,HSC-T6细胞自噬水平随3-MA浓度升高逐渐下降,α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白mRNA相对表达量均明显低于对照组(P<0.05),LC3Ⅱ、α-SMA以及Ⅰ型胶原蛋白相对表达量均明显低于对照组(P<0.05)。与对照组相比,低、中、高剂量时3-MA对HSC增殖的影响均显著下降(P<0.05),G2期比例与对照组比较均明显增加(P<0.05)。结论 3-MA可下调大鼠HSC-T6细胞LC3Ⅱ的表达,抑制α-SMA及Ⅰ型胶原蛋白mRNA及蛋白的表达,使HSC-T6细胞周期停滞于G2期,抑制HSC增殖活化。