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piRNA——一新型的小分子RNA
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作者 郭宏兴 刘亮明 张吉翔 《生命的化学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期200-202,共3页
小分子RNA已成为全球生物学研究关注的热点之一。最近,在哺乳动物的生殖细胞中发现了一种新型的小分子RNA:piRNA,比以往发现的小分子RNA稍长些,大小在30个核苷酸左右,piRNA必须与哺乳动物的Piwi蛋白结合才能发挥作用。目前对piRNA的研... 小分子RNA已成为全球生物学研究关注的热点之一。最近,在哺乳动物的生殖细胞中发现了一种新型的小分子RNA:piRNA,比以往发现的小分子RNA稍长些,大小在30个核苷酸左右,piRNA必须与哺乳动物的Piwi蛋白结合才能发挥作用。目前对piRNA的研究还处于初始阶段,但鉴于piRNA主要分布在包括人类等数种动物体睾丸的精原细胞内,科学家们推测这类小分子RNA可能与动物体内精子的发育和维持的功能相关。 展开更多
关键词 PIRNA 小分子RNA 基因沉默 生殖细胞
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自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤对肝星状细胞增殖活化的影响 被引量:11
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作者 刘曼 何月 张吉翔 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期809-812,817,共5页
目的观察自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)增殖活化的影响,并探讨其作用机制。方法体外培养大鼠肝星状细胞株HSC-T6,设立空白对照组和3-MA低剂量组(2.5 mmol/L)、中剂量组(5 mmol/L)、高剂量组(10 mmol/L)。RT-PC... 目的观察自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)增殖活化的影响,并探讨其作用机制。方法体外培养大鼠肝星状细胞株HSC-T6,设立空白对照组和3-MA低剂量组(2.5 mmol/L)、中剂量组(5 mmol/L)、高剂量组(10 mmol/L)。RT-PCR分析不同浓度3-MA对HSC活化标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)以及Ⅰ型胶原蛋白基因表达的影响,Western blot法检测不同浓度3-MA对HSC中自噬水平标志蛋白LC3Ⅱ、α-SMA以及Ⅰ型胶原蛋白表达水平的影响;MTT法检测3-MA对HSC增殖的影响,流式细胞术分析3-MA对HSC细胞周期的影响。结果低、中、高剂量3-MA作用于HSC后,HSC-T6细胞自噬水平随3-MA浓度升高逐渐下降,α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白mRNA相对表达量均明显低于对照组(P<0.05),LC3Ⅱ、α-SMA以及Ⅰ型胶原蛋白相对表达量均明显低于对照组(P<0.05)。与对照组相比,低、中、高剂量时3-MA对HSC增殖的影响均显著下降(P<0.05),G2期比例与对照组比较均明显增加(P<0.05)。结论 3-MA可下调大鼠HSC-T6细胞LC3Ⅱ的表达,抑制α-SMA及Ⅰ型胶原蛋白mRNA及蛋白的表达,使HSC-T6细胞周期停滞于G2期,抑制HSC增殖活化。 展开更多
关键词 肝纤维化 自噬 3-甲基腺嘌呤 肝星状细胞 细胞增殖
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鼠尾静脉流体力学转染技术对绿色荧光蛋白表达质粒器官靶向分布的影响 被引量:6
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作者 刘亮明 罗杰 +5 位作者 张吉翔 郭宏兴 邓欢 徐江晶 尹东 熊高飞 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2007年第23期4558-4561,共4页
目的:观察流体力学尾静脉注射对绿色荧光蛋白基因器官靶向性的影响,为今后质粒载体的基因治疗和功能研究寻找潜在的靶器官。方法:实验于2005-12/2006-04在江西省分子医学重点实验室完成。选用健康雄性昆明鼠40只,将32只小鼠按随机数字... 目的:观察流体力学尾静脉注射对绿色荧光蛋白基因器官靶向性的影响,为今后质粒载体的基因治疗和功能研究寻找潜在的靶器官。方法:实验于2005-12/2006-04在江西省分子医学重点实验室完成。选用健康雄性昆明鼠40只,将32只小鼠按随机数字表法分为流体力学注射和常规注射两大组,每大组再分为转染组和对照组两个小组(n=8),并设正常对照组(n=8)。①流体力学转染组将100μg/只绿色荧光蛋白表达质粒溶液2mL在5s内快速注入尾静脉;对照组仅在5s内注入林格氏液2mL。②常规注射组则将2mL林格氏液或绿色荧光蛋白表达质粒溶液在30s左右注入尾静脉。注射结束后24h采集各组小鼠血清检测转氨酶,并采集肝、脾、心、肾、肺和脑组织进行冰冻切片,部分肝组织采用多聚甲醛固定后切片,荧光显微镜下观察。结果:40只小鼠全部进入结果分析,无脱失。①流体力学注射组和常规注射组小鼠血清转氨酶与正常对照组比较差异均无显著性意义(P>0.05)。②常规尾静脉注射引起少数肾小球细胞表达绿色荧光蛋白,而肝、脾、心、肺及脑等组织未见明显绿色荧光蛋白表达。③流体力学注射引起肝内绿色荧光蛋白高水平表达,肝细胞表达率接近45%,其他组织则无绿色荧光蛋白表达。结论:流体力学方法是肝靶向性的活体基因转染方法,绿色荧光蛋白可作为该方法进行目的基因研究的一个可靠和方便的示踪剂。 展开更多
关键词 发光蛋白质类 质粒 生物力学
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Pim-3异常表达在胃癌中的意义 被引量:12
4
作者 胡志方 黄缘 +1 位作者 钟琼 简捷 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2008年第31期3515-3518,共4页
目的:探讨Pim-3的异常表达在胃癌发展过程中的作用.方法:使用半定量RT-PCR法和免疫组化法检测40例胃癌组织及20例癌旁正常组织标本Pim-3的表达,并比较Pim-3的表达与胃癌临床病理参数的关系.结果:与正常胃黏膜相比,Pim-3mRNA的表达量在... 目的:探讨Pim-3的异常表达在胃癌发展过程中的作用.方法:使用半定量RT-PCR法和免疫组化法检测40例胃癌组织及20例癌旁正常组织标本Pim-3的表达,并比较Pim-3的表达与胃癌临床病理参数的关系.结果:与正常胃黏膜相比,Pim-3mRNA的表达量在胃癌组织中更高(0.287±0.058 vs 0.053±0.055,P<0.001).中分化腺癌中Pim-3蛋白的表达高于低分化腺癌组织中的表达,两者比较差异显著(50%vs20%,P<0.05).Pim-3的表达与淋巴转移、静脉转移密切相关(r=0.385,0.412,P=0.014,0.008).结论:Pim-3可作为胃癌早期的生物标志物,并可预示肿瘤的预后. 展开更多
关键词 PIM-3 胃癌 异常表达 逆转录酶链式反应 免疫组化法
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Nimesulide联合奥沙利铂对人肝癌细胞增殖与凋亡的影响 被引量:6
5
作者 刘利珍 简捷 +2 位作者 吴建兵 黄龙璋 史芳 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2008年第36期4041-4045,共5页
目的:探讨选择性环氧合酶-2(cyclooxy-genase-2,COX-2)抑制剂Nimesulide联合奥沙利铂(Oxaliplatin,L-OHP)对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖与凋亡的影响,为肝癌的药物治疗提供依据.方法:预实验筛选Nimesulide有效终浓度与不同浓度L-OHP(0.5... 目的:探讨选择性环氧合酶-2(cyclooxy-genase-2,COX-2)抑制剂Nimesulide联合奥沙利铂(Oxaliplatin,L-OHP)对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖与凋亡的影响,为肝癌的药物治疗提供依据.方法:预实验筛选Nimesulide有效终浓度与不同浓度L-OHP(0.5、1.0、2.0、5.0mg/L)联合处理肝癌细胞48h;另外选取L-OHP有效终浓度与Nimesulide筛选的浓度单独或联合处理肝癌细胞24h、48h、72h;采用倒置显微镜观察细胞形态学改变,四氮唑盐比色法(MTT法)观察细胞增殖活力的改变,流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果:不同浓度Nimesulide及L-OHP对SMMC-7721表现出一定程度的生长抑制作用,并呈剂量依赖性.Nimesulide(50mmol/L)或L-OHP(1mg/L)单用时可显著抑制SMMC-7721细胞的增殖,选用Nimesulide 50mmol/L与L-OHP(0.5、1.0、2.0、5.0mg/L)联合使用时,联合抑制作用呈现协同作用(Q>1.15).L-OHP 1mg/L、Nimesulide 50mmol/L及两药联合处理SMMC-7721细胞24h、48h、72h,各处理组各时间点对肝癌细胞的抑制作用随着时间的延长而增大,并且两药联合作用有协同作用(Q>1.15).流式细胞仪检测分析发现两种药物均可有效诱导SMMC-7721细胞的凋亡,且在上述浓度联合应用时具协同效应.结论:Nimesulide与L-OHP对人肝癌细胞株SMMC-7721均有抑制增殖和促进凋亡作用,而且两者联合应用有协同作用. 展开更多
关键词 NIMESULIDE 奥沙利铂 细胞增殖 凋亡
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骨形态发生蛋白2、6在肝癌中的表达及意义 被引量:6
6
作者 吴建兵 傅华群 +2 位作者 黄龙璋 刘安文 张吉翔 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2009年第8期834-837,共4页
目的:研究骨形态发生蛋白2、6(BMP-2、6)在肝癌组织中的表达,并探讨其与肝癌生物学行为的关系.方法:应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Westernblot检测30例正常肝脏组织和30例肝癌组织的BMP-2、6的表达水平.结果:正常肝脏组织BMP-... 目的:研究骨形态发生蛋白2、6(BMP-2、6)在肝癌组织中的表达,并探讨其与肝癌生物学行为的关系.方法:应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Westernblot检测30例正常肝脏组织和30例肝癌组织的BMP-2、6的表达水平.结果:正常肝脏组织BMP-2、6mRNA相对表达量显著低于肝癌组织(0.3245±0.1127vs0.8298±0.1187,0.2947±0.1853vs0.7145±0.1373,均P<0.05),Ⅲ、Ⅳ期肝癌组织BMP-2、6mRNA相对表达量显著高于Ⅰ、Ⅱ期(0.92431±0.1234vs0.69355±0.19250.8354±0.1423vs0.6043±0.1234,均P<0.05)Westernblot检测有远处转移的肝癌组织BMP-2、6表达高于无远处转移的肝癌组织(0.9854±0.2888vs0.6244±0.3087,0.9076±0.1276vs0.5678±0.2493,均P<0.01).结论:BMP-2、6在肝癌中表达上调,可能在肝癌的发生发展中起着重要的作用,其表达上调可能促进肝癌的浸润和转移. 展开更多
关键词 肝细胞 骨形态发生蛋白 逆转录-聚合酶链反应 蛋白质印迹
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Nrf2过表达对乙醇刺激下肝星状细胞激活与增殖及合成Ⅰ型胶原的影响 被引量:2
7
作者 刘曼 何月 张吉翔 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期1590-1596,共7页
目的:探讨核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)过表达对乙醇诱导下大鼠肝星状细胞系HSC-T6激活与增殖及I型胶原mRNA及蛋白表达水平的影响。方法:采用脂质体介导法对HSC-T6进行pEGFP-Nrf2重组质粒及pEGFP-N1空... 目的:探讨核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)过表达对乙醇诱导下大鼠肝星状细胞系HSC-T6激活与增殖及I型胶原mRNA及蛋白表达水平的影响。方法:采用脂质体介导法对HSC-T6进行pEGFP-Nrf2重组质粒及pEGFP-N1空载质粒瞬时转染,将细胞分为正常对照组、乙醇刺激组、乙醇刺激+pEGFP-Nrf2质粒组和乙醇刺激+pEGFP-N1空载质粒组。采用RT-PCR及Western blotting方法对HSC-T6中Nrf2、Ⅰ型胶原及α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)mRNA及蛋白表达水平进行检测,采用MTT法对HSC-T6细胞增殖水平进行检测,采用流式细胞术对HSC-T6细胞周期分布进行检测。结果:(1)荧光显微镜下观察显示pEGFP-Nrf2质粒成功转染HSC-T6,转染后48h Nrf2 mRNA及蛋白表达水平较其余组显著升高(P<0.05)。(2)乙醇刺激组与乙醇刺激+pEGFP-N1空载质粒组之间细胞增殖水平、Ⅰ型胶原、α-SMA mRNA及蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05),均明显高于正常对照组(P<0.05),细胞周期分布G1期比例下降,S期比例升高(P<0.05),而乙醇刺激+pEGFP-Nrf2质粒组细胞增殖水平及I型胶原、α-SMA mRNA及蛋白表达水平与乙醇刺激组及乙醇刺激+pEGFP-N1空载质粒组相比均显著下降(P<0.05),细胞周期分布G1期比例显著上升,S期比例显著下降(P<0.05),呈G1/S期阻滞。结论:Nrf2过表达可显著抑制乙醇对HSC-T6 Ⅰ型胶原及α-SMA mRNA及蛋白表达的促进作用,使HSC-T6细胞周期发生G1/S期阻滞,抑制乙醇诱导的HSC-T6增殖水平的升高,提示其对乙醇诱导的HSC-T6细胞活化具有负性调控作用。 展开更多
关键词 肝纤维化 肝星状细胞 核因子E2相关因子2 Ⅰ型胶原 Α-平滑肌肌动蛋白
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丝氨酸蛋白酶HtrA2/Omi与细胞存亡 被引量:2
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作者 邓欢 刘亮明 张吉翔 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期1860-1863,共4页
The serine protease HtrA2/Omi is released from the mitochondrial intermembrane space following apoptotic stimuli.Once in the cytosol,HtrA2/Omi has been implicated in promoting cell death in caspase-dependent or caspas... The serine protease HtrA2/Omi is released from the mitochondrial intermembrane space following apoptotic stimuli.Once in the cytosol,HtrA2/Omi has been implicated in promoting cell death in caspase-dependent or caspase-independent pathway.On the other hand,HtrA2/Omi can refold and degrade misfolded proteins in the mitochondria during cell stress. 展开更多
关键词 HtrA2/Omi 线粒体 细胞凋亡
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小泛素相关修饰物调控KAI1基因的肿瘤转移抑制作用 被引量:1
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作者 黄神安 徐江晶 张吉翔 《新医学》 北大核心 2007年第9期625-627,共3页
小泛素相关修饰物(small ubiquitin-related modifier,SUMO)是泛素(ubiquitin)类蛋白家族的重要成员之一。SUMO化修饰属于真核基因表达的翻译后加工,可使蛋白质更稳定,从而调节更多的细胞活动。KAI1是1995年发现的肿瘤转移抑制基因,它... 小泛素相关修饰物(small ubiquitin-related modifier,SUMO)是泛素(ubiquitin)类蛋白家族的重要成员之一。SUMO化修饰属于真核基因表达的翻译后加工,可使蛋白质更稳定,从而调节更多的细胞活动。KAI1是1995年发现的肿瘤转移抑制基因,它表达的蛋白属于四跨膜超家族(transmembrane 4 superfamily,TM4SF),KAI1基因的表达对大多数的肿瘤转移起抑制作用。SUMO与KAI1基因的关系密切,并影响着KAI1基因,从而在肿瘤的转移抑制过程中起重要作用。该文介绍了SUMO与KAI1基因的最新研究进展,供同行参考。 展开更多
关键词 小泛素相关修饰物 KAI1基因 恶性肿瘤 肿瘤转移 肿瘤细胞 蛋白质
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野生型XPD转染对胆管癌QBC939细胞生物学行为的影响
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作者 王振杰 龚辉 +1 位作者 龚丹 朱水山 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2010年第15期1531-1536,共6页
目的:探讨野生型X P D基因对人胆管癌QBC939细胞的生物学影响.方法:用碱裂解法提取空载质粒pEGFP-N2和重组质粒pEGFP-N2-XPD,提取出的质粒以KPNⅠ、BGIⅡ和SPHⅠ酶切鉴定.实验分4组,重组质粒pEGFP-N2-XPD组、空载质粒pEGFP-N2组、脂质体... 目的:探讨野生型X P D基因对人胆管癌QBC939细胞的生物学影响.方法:用碱裂解法提取空载质粒pEGFP-N2和重组质粒pEGFP-N2-XPD,提取出的质粒以KPNⅠ、BGIⅡ和SPHⅠ酶切鉴定.实验分4组,重组质粒pEGFP-N2-XPD组、空载质粒pEGFP-N2组、脂质体组,并用具有相同遗传背景和代数的QBC939细胞作为空白对照.用脂质体转染法瞬时转染四组细胞.荧光显微镜下观察转染后绿色荧光蛋白报告基因表达情况.提取各组细胞总RNA,合成cDNA,用聚合酶链反应(PCR)检测4组细胞中XPD、p53、cyclin D1、c-myc表达情况.并用四甲基偶氮唑盐(MTT)和流式细胞仪检测细胞增殖及其细胞周期的变化.结果:pEGFP-N2-XPD细胞与pEGFP-N2、脂质体组和空白对照组相比,XPD mRNA表达量明显增加(0.778±0.018vs0.561±0.039,0.544±0.035,0.542±0.034,均P<0.01).pEGFP-N2-XPD细胞中p53mRNA相对表达量与pEGFP-N2、脂质体组和空白对照组比较具有统计学意义(0.421±0.019vs0.256±0.014,0.267±0.015,0.274±0.018,均P<0.01).pEGFP-N2-XPD细胞与其他组相比,cyclin D1mRNA相对表达量明显降低(0.339±0.041vs0.560±0.039,0.558±0.050,0.560±0.041,均P<0.01).pEGFP-N2-XPD细胞与其他组相比,c-myc mRNA相对表达量明显降低(0.355±0.045vs0.570±0.075,0.560±0.041,0.537±0.050,均P<0.01).流式细胞仪检测pEGFP-N2-XPD组细胞周期G1期为81.65%,S期为11.83%,其他组Gl期分别为65.54%、56.61%、63.26%;S期分别为24.10%、29.52%、27.28%,结果具有统计学意义(P<0.05).MTT检测示pEGFP-N2-XPD细胞生长率为0.249±0.02,与其他组相比,细胞增殖力明显减弱(P<0.01).结论:野生型XPD基因可以抑制胆管癌细胞的生长,XPD基因可抑制c-myc、cyclin D1基因的表达,增加p53基因表达. 展开更多
关键词 胆管癌 QBC939细胞 XPD c-myc CYCLIND1 p53 细胞周期
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丝/苏氨酸激酶Pim-3基因对急性肝功能衰竭肝保护效应的实验研究 被引量:2
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作者 刘亮明 邓欢 +3 位作者 张吉翔 罗杰 孙水林 尹东 《中华消化杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期625-626,共2页
急性肝功能衰竭(ALF)是常见的临床急重病症,缺乏特殊有效的治疗药物,现基因治疗成为该病治疗研究的热点。作为丝/芬氨酸激酶Pim家族的重要成员,Pim-3基因在细胞生长通路中起重要作用,已知Pim-3基因在损伤周围组织和增殖活跃的肝... 急性肝功能衰竭(ALF)是常见的临床急重病症,缺乏特殊有效的治疗药物,现基因治疗成为该病治疗研究的热点。作为丝/芬氨酸激酶Pim家族的重要成员,Pim-3基因在细胞生长通路中起重要作用,已知Pim-3基因在损伤周围组织和增殖活跃的肝组织内均出现极高水平的表达。这提示Pim-3基因可能在损伤肝组织的修复中扮演重要角色。 展开更多
关键词 急性肝功能衰竭 3基因 保护效应 激酶 氨酸 实验研 治疗药物 急重病症
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内毒素诱导D-半乳糖胺致敏大鼠急性肝衰竭的研究 被引量:12
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作者 刘亮明 罗杰 +3 位作者 张吉翔 邓欢 孙水林 熊高飞 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第30期2122-2126,共5页
目的探讨内毒素(即脂多糖)诱导D-半乳糖胺致敏大鼠急性肝衰竭肝细胞凋亡情况及肝损伤发生机制。方法48只Wistar大鼠进行随机对照分组实验,分为6 h、24 h和48 h取材3大组(各16只),每个大组再分为处理组和对照组(各8只)。处理组大鼠以脂多... 目的探讨内毒素(即脂多糖)诱导D-半乳糖胺致敏大鼠急性肝衰竭肝细胞凋亡情况及肝损伤发生机制。方法48只Wistar大鼠进行随机对照分组实验,分为6 h、24 h和48 h取材3大组(各16只),每个大组再分为处理组和对照组(各8只)。处理组大鼠以脂多糖(50μg/kg)+D-半乳糖胺(300 mg/kg),用1 ml无菌生理盐水溶解后腹腔内注射,对照组动物仅腹腔内注射1 ml生理盐水。在相应时间点,门静脉或下腔静脉采血查丙氨酸氨基转移酶(ALT);肝组织切片分别行透射电镜检查和脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记分析(TUNEL分析);基因表达通过逆转录。聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测。结果所有处理组大鼠ALT水平均显著高于对照组(66 U/L±3 U/L),而6 h组ALT水平(399 U/L±83 U/L)显著低于24 h组(3178 U/L±63 U/L)和48 h组(1506 U/L±56U/L)。48 h组ALT水平则低于24 h组。透射电镜检查见正常对照组肝组织内罕有凋亡细胞,脂多糖/D-半乳糖胺处理6 h组凋亡的肝细胞明显较多,且多表现为早期细胞凋亡的特征,24 h和48 h组的肝细胞凋亡明显多于6 h组,并多表现为晚期凋亡的特征。肝组织的TUNEL分析显示,对照组可见少量凋亡的肝细胞(凋亡指数为2.6%±1.1%),6 h组凋亡的肝细胞明显增多(凋亡指数为7.3%±1.5%),24 h和48 h组肝组织内则可见大量肝细胞凋亡(凋亡指数分别为71.8%±10.3%和68.2%±11.9%)。iNOS mRNA在正常对照组无表达,脂多糖/D-半乳糖胺作用后早期(6 h)有高水平的表达,24 h和48 h则显著较低;p53基因在对照组和6 h组有低水平表达,在24 h和48 h组表达明显较高;p21waf1/cip1基因在对照组无表达,6 h出现低水平表达,24 h mRNA表达水平达峰值,在48 h则迅速下降到0。结论小剂量脂多糖可诱导D-半乳糖胺致敏大鼠发生急性肝衰竭;细胞凋亡是其重要的病理形态学改变;肝衰竭肝损伤的发生与iNOS基因早期高水平的表达有密切关系。 展开更多
关键词 肝功能衰竭 内毒素类 半乳糖胺 脱噬作用
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大鼠内毒素性急性肝损伤后肝细胞凋亡与炎性因子的表达 被引量:10
13
作者 郭宏兴 刘亮明 +4 位作者 张吉翔 罗杰 徐江晶 陈建勇 熊高飞 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期415-419,共5页
目的探讨脂多糖诱导D-氨基半乳糖胺致敏大鼠急性肝损伤肝细胞凋亡、炎性因子表达情况及其发生机制。方法56只大鼠分为0h对照组与1、2、4、6、24和48h脂多糖+D-氨基半乳糖胺处理组。在相应时间点处死大鼠后收集肝组织及血清,肝组织苏木... 目的探讨脂多糖诱导D-氨基半乳糖胺致敏大鼠急性肝损伤肝细胞凋亡、炎性因子表达情况及其发生机制。方法56只大鼠分为0h对照组与1、2、4、6、24和48h脂多糖+D-氨基半乳糖胺处理组。在相应时间点处死大鼠后收集肝组织及血清,肝组织苏木精-伊红染色后光学显微镜下观察;ELISA法检测血清细胞因子表达;反转录(RT)-PCR法检测TNF-α、IL-1β、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和p53基因表达;收集24h肝组织用底物显色法检测Caspase-3、8、9、12活性。组间比较用方差分析。结果经药物处理后,肝组织出现碎片状坏死、大量炎性细胞浸润等表现,从6h开始,24h和48h显著加重。血清TNF-α浓度在1h处理组为(727.8±261.3)ng/L,显著高于对照组及其他处理组(F=49.82,P〈0.01),2h处理组为(156.4±52.2)ng/L,显著低于1h组,但高于对照组(F=30.23,P〈0.01);血清IL-1β浓度逐渐上升,24h处理组最高,为(360.5±121.6)ng/L(F=18.61,P〈0.01)。24h处理组肝组织Caspase-3、8、9、12活性明显高于对照组(F=84.96,P〈0.01)。iNOS基因在对照组无表达,药物作用后6h达最高,24h和48h则显著下降(F=34.07,P〈0.01);p53基因在24h和48h处理组表达明显增高(F=37.43,P〈0.01);TNF-α和IL-1β基因表达均较对照组升高(F=2.94,P〈0.05),其峰值均出现在1h处理组。结论小剂量脂多糖可诱导D-氨基半乳糖胺致敏大鼠发生急性肝损伤;Caspase-3、8、9、12活性明显增强是其特征性改变之一;肝损伤的发生与TNF-α、iNOS和p53基因早期高水平表达有密切关系。 展开更多
关键词 肝疾病 急性 内毒素类 肿瘤坏死因子α 白细胞介素1 一氧化氮合酶 基因 p53 细胞凋亡
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Pim-3质粒构建体在大鼠活体肝组织的表达和活性的研究 被引量:4
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作者 刘亮明 邓欢 +3 位作者 张吉翔 罗杰 尹东 郭宏兴 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第36期2567-2570,共4页
目的构建大鼠 Pim-3绿色荧光蛋白(GFP)表达质粒并观察其在活体肝组织的表达和活性。方法采用逆转录 PCR 的方法获取目的 cDNA,重组质粒经酶切鉴定和测序;大鼠活体基因肝靶向性转染通过尾静脉流体力学注射法完成,肝细胞凋亡的诱导采用腹... 目的构建大鼠 Pim-3绿色荧光蛋白(GFP)表达质粒并观察其在活体肝组织的表达和活性。方法采用逆转录 PCR 的方法获取目的 cDNA,重组质粒经酶切鉴定和测序;大鼠活体基因肝靶向性转染通过尾静脉流体力学注射法完成,肝细胞凋亡的诱导采用腹腔内注射内毒素和 D-半乳糖胺(D-GalN)来实现。动物分为 A、B、C 和 D 组(即正常、对照、空质粒和重组质粒组,每组8只);肝组织 GFP 表达通过荧光显微镜、Pim-3表达通过逆转录(RT)-PCR 方法检测;肝细胞凋亡采用缺口末端标记技术(TUNEL)分析和半胱天冬酶-3活性检测。结果成功构建 GFP 表达质粒 pEGFP-N2/Pim-3;重组质粒和空质粒 DNA 通过流体力学注射法被成功转染入大鼠活体肝组织内;4组 Pim-3的相对表达水平分别为0.06±0.02、0、0、0.49±0.15。D 组与其他3组差异均有统计学意义(均 P<0.01);4组肝细胞的凋亡指数(AI)分别为:(3.1±0.7)%,(72.5±6.1)%、(69.8±5.7)%和(4.9±1.2)%;肝组织半胱天冬酶-3活性分别为(60±15)、(147±55)、(142±50)和(76±27)pmol·min^(-1)·mg^(-1),D 组与 B、C 两组间差异有统计学意义(均 P<0.01)。结论构建的重组体质粒 pEGFP-N2/Pim-3能在大鼠活体肝组织内有效表达,并发挥其对肝细胞凋亡的抑制效应。 展开更多
关键词 脱噬作用 质粒 Pim-3基因 载体构建
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剪接因子——SF3b 被引量:3
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作者 袁丽华 罗小洋 张吉翔 《生命的化学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期746-749,共4页
真核生物前体mRNA的蛋白编码区(即外显子)被间隔序列(即内含子)分隔开,需切除内含子才能形成成熟的mRNA。内含子的精确切除是由剪接体催化的。剪接体由五种snRNP(U1、U2、U4/U6和U5)和许多非snRNP蛋白质组成。由SAP49、SAP130、SAP145、... 真核生物前体mRNA的蛋白编码区(即外显子)被间隔序列(即内含子)分隔开,需切除内含子才能形成成熟的mRNA。内含子的精确切除是由剪接体催化的。剪接体由五种snRNP(U1、U2、U4/U6和U5)和许多非snRNP蛋白质组成。由SAP49、SAP130、SAP145、SAP155、SAP14b、SAP10和SAP14a七种蛋白质组成的SF3b作为U2snRNP和U11/U12di-snRNP的组成部分参与整个剪接过程。SF3b在剪接前体的组装和识别内含子的分支点中起重要作用。本文主要介绍了剪接体的组装、SF3b的结构及SF3b成分的作用。 展开更多
关键词 剪接体 RNA剪接 剪接因子3b(SF3b)
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“流体力学转染”——安全高效的动物活体器官基因转染方法 被引量:1
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作者 刘亮明 陈建勇 +2 位作者 张吉翔 罗杰 郭宏兴 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2006年第6期426-429,共4页
作为一种新的简便而高效的动物活体基因转染方法,“流体力学转染”技术正日益成为生物遗传学家们进行基因研究的重要工具。该技术利用“流体力学”原理,通过裸质粒溶液的静脉注射,实现了活体肝靶向性的基因转染。“流体力学”注射后所... 作为一种新的简便而高效的动物活体基因转染方法,“流体力学转染”技术正日益成为生物遗传学家们进行基因研究的重要工具。该技术利用“流体力学”原理,通过裸质粒溶液的静脉注射,实现了活体肝靶向性的基因转染。“流体力学”注射后所造成的肝窗扩大和肝细胞膜通透性的增加,可能是肝内基因有效转染的重要机制。目前“流体力学方法”在基因研究的各个领域都得到了广泛的应用,文章重点介绍了该方法在基因功能、疾病基因治疗和获得基因产物等几个方面研究中的应用。同时也简要介绍了增强外源基因在靶器官内表达的进展。 展开更多
关键词 流体力学转染 肝靶向性 机制 应用
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PARP-1与HIV的关系 被引量:2
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作者 黄神安 徐江晶 张吉翔 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2007年第4期357-359,共3页
多聚(ADP-核糖)聚合酶-1[poly(ADP-ribose)polymerase-1,PARP-1]是真核细胞中存在的一种蛋白质翻译后修饰酶。而艾滋病已经蔓延到全世界各国,被传染上病毒的人数也正在大幅度上升。有研究指出,PARP-1主要在基因整合和转录两个水平调节HI... 多聚(ADP-核糖)聚合酶-1[poly(ADP-ribose)polymerase-1,PARP-1]是真核细胞中存在的一种蛋白质翻译后修饰酶。而艾滋病已经蔓延到全世界各国,被传染上病毒的人数也正在大幅度上升。有研究指出,PARP-1主要在基因整合和转录两个水平调节HIV的感染。研究PARP-1与HIV的关系,可能会打开治疗艾滋病的新方向。 展开更多
关键词 人免疫缺陷病毒 Vpr蛋白 多聚(ADP-核糖)聚合酶-1
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XPD和PPARγ对HepG2增殖及ERG表达的影响
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作者 何月 罗文 张吉翔 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2012年第4期235-240,共6页
目的探讨人着色性干皮病基因D(xeroderma pigmentosum groupD,XPD)和PPARγ对HepG2增殖及ERG表达的影响。方法用脂质体转染法瞬时转染重组质粒pEGFP—N2/XPD和空载质粒pEGFP—N2入HepG2细胞中,转染后给予10μmol/L的GW9662(PPAR... 目的探讨人着色性干皮病基因D(xeroderma pigmentosum groupD,XPD)和PPARγ对HepG2增殖及ERG表达的影响。方法用脂质体转染法瞬时转染重组质粒pEGFP—N2/XPD和空载质粒pEGFP—N2入HepG2细胞中,转染后给予10μmol/L的GW9662(PPARγ抑制剂)孵育48h。实验分为6组:空白对照组、脂质体组、pEGFP—N2组、pEGFP—N2/XPD组、pEGFP—N2/XPD+GW9662组及GW9662组。用RT—PCR和Western印迹检测XPD、PPARγ和ERG表达的变化:MTT法观察细胞增殖活力:流式细胞仪检测细胞凋亡。结果RT-PCR和Western印迹检测示:重组质粒pEGFP—N2/XPD的转染使得XPD表达增高(P均〈0.001);XPD表达增高使得ERG表达降低,同时使得PPARγ表达增高,GW9662能抑制XPD这一作用。MTT结果显示:XPD表达增高抑制了细胞增殖活力,GW9662能抑制XPD降低细胞活力的作用(P均〈0.001)。流式细胞仪结果显示:pEGFP—N2/XPD组较未转染组的HepG2细胞凋亡指数明显增加,GW9662能抑制XPD这一作用(P均〈0.001)。结论XPD可通过PPARγ途径抑制肝癌细胞增殖和促进凋亡的;XPD是通过PPARγ途径下调ERG的表达。 展开更多
关键词 着色性干皮病基因D PPARΓ ERG基因 凋亡 增殖
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TopBP1和ATR-ATRIP在细胞周期中的作用及联系
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作者 黄神安 熊高飞 张吉翔 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2006年第5期364-367,共4页
TopBP1(topoisomeraseⅡbeta-bindingprotein1)和ATR(ataxia-telangiectasiamutated-andrad3-re-lated)-ATRIP(ATR-interactingprotein)通过调节一些因子在DNA损伤检控点(DNAdamagecheckpoint)中起着关键的作用,其中TopBP1可以激活ATR-A... TopBP1(topoisomeraseⅡbeta-bindingprotein1)和ATR(ataxia-telangiectasiamutated-andrad3-re-lated)-ATRIP(ATR-interactingprotein)通过调节一些因子在DNA损伤检控点(DNAdamagecheckpoint)中起着关键的作用,其中TopBP1可以激活ATR-ATRIP的复合体。文章着重阐述了TopBP1和ATR-ATRIP如何调控细胞周期并发挥其维护基因组完整性的作用。 展开更多
关键词 TopBP1 ATR-ATRIP DNA损伤检控点
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microRNA调控棕色脂肪细胞的分化
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作者 刘曼 张吉翔 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2011年第6期542-546,共5页
微小RNA(microRNA,miRNA)是一类长度约为20~24个核苷酸序列的内源性的具有转录后调节功能的单链非编码小RNA,在基因表达调控方面具有广泛作用,参与了生物体生长发育、细胞增殖、分化、凋亡等多种生物学过程.最新研究发现,microRNA193b... 微小RNA(microRNA,miRNA)是一类长度约为20~24个核苷酸序列的内源性的具有转录后调节功能的单链非编码小RNA,在基因表达调控方面具有广泛作用,参与了生物体生长发育、细胞增殖、分化、凋亡等多种生物学过程.最新研究发现,microRNA193b-365在棕色脂肪细胞分化过程中,通过上调或下调一些影响棕色脂肪细胞分化方向的因子(如Runx1t1 、Cdon、Igfbp5、PRDM16等)的表达水平,而发挥促进棕色脂肪细胞分化的功能.促进棕色脂肪形成可增加热量的产生,同时减少脂肪堆积,从而有助于减少肥胖症及其相关疾病的发生.microRNA正性调控棕色脂肪细胞分化这一作用机制为治疗肥胖症的研究提供了新方向,有可能成为脂类代谢性疾病治疗的潜在靶点. 展开更多
关键词 MICRORNA miR193b-365 棕色脂肪细胞 肥胖
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