人剪切修复基因XPD对肝癌细胞生长及ERG基因的影响

目的探讨人剪切修复基因XPD转染人肝癌细胞SMMC-7721后对细胞自身生长及癌基因ERG表达的影响。方法将XPD基因通过LipofectamineTM2000转染入人肝癌细胞SMMC-7721。实验分为4组,分别为重组质粒转染细胞SMMC-7721-pEGFP-N2-XPD组(XPD组)、空载质粒转染细胞SMMC-7721-pEGFP-N2组(N2组)、脂质体转染细胞SMMC-7721组(脂质体组)、肝癌细胞SMMC-7721无转染空白对照组(空白对照组)。分别用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Westernblot法检测各组细胞中XPD、ERG的mRNA和蛋白质的表达量,用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测各组细胞的增殖活力及流式细胞仪检测各组细胞的凋亡情况。结果与其他3组比较,XPD组中的ERGmRNA及蛋白表达量显著降低,而XPDmRNA及蛋白表达量明显升高(P<0.01)。转染了XPD的肝癌细胞SMMC-7721,其细胞增殖活性(0.455±0.009)显著降低,细胞凋亡率(42.06±0.01)%明显升高(P<0.001)。结论 XPD基因可以抑制癌基因ERG的表达,明显降低肝癌细胞的增殖活力并提高肝癌细胞的凋亡率。

人剪切修复基因XPD对人肝癌SMMC-7721细胞中Ets-1和Cdk6基因的调控作用

目的:观察野生型人剪切修复基因XPD转染入人肝癌细胞SMMC-7721后,细胞内Ets-1和Cdk6基因的表达变化及对SMMC-7721肝癌细胞增殖的影响。方法:将人工合成的pEGFP-N2-XPD重组质粒通过Lipofectamine 2000TM转染SMMC-7721细胞。设重组质粒转染细胞SMMC-7721-pEGFP-N2-XPD(XPD)组、空载质粒转染细胞SMMC-7721-pEGFP-N2(N2)组、脂质体组、无转染空白对照组。分别用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹法(Western blot)检测细胞中XPD、Ets-1、Cdk6基因mRNA和蛋白质的表达量,并用流式细胞仪检测细胞周期变化,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测各组细胞的增殖活力。结果:XPD组中的XPD的mRNA和蛋白质表达较其他3组明显增高(P<0.001),而Ets-1、Cdk6 mRNA和蛋白质表达较其他3组明显减少(P<0.001)。转染pEGFP-N2-XPD重组质粒后细胞停滞在G1期,难于进入S期。转染了野生型XPD的SMMC-7721细胞增殖能力减弱。结论:XPD基因可能通过抑制Ets-1、Cdk6基因的表达影响肝癌细胞的生长。