HSP70介导的川芎嗪预处理对大鼠离体心脏的延迟保护作用

目的:研究川芎嗪(TMP)预处理对离体大鼠心脏缺血再灌注(I/R)损伤的延迟保护作用及其可能的机制。方法:大鼠分为对照组(Cont)组、Cont+Act D组、I/R组、I/R+Act D组、TMP组、TMP+Act D组。TMP组、TMP+Act D组大鼠分别静脉注射TMP 10 mg/kg或TMP 10 mg/kg和Act D 7 mg/kg;Cont组、Cont+Act D组、I/R组、I/R+Act D组大鼠分别静脉注射等量生理盐水或等量胜利盐水和Act D 7 mg/kg。25 h后取大鼠心脏行Langendorff逆行灌流、制作I/R损伤模型。检测ECG、LVP、dp/dtmax、心肌梗死面积以及心肌组织中SOD与GSH-Px活性、MDA含量、HSP70的表达。结果:TMP预处理可显著改善大鼠离体心脏I/R损伤时的左心功能,减少梗死面积与心律失常的发生率,提高心肌组织中SOD与GSH-Px活性、降低MDA含量、上调HSP70的表达;TMP预处理的延迟保护作用可被Act D所取消。结论:TMP预处理整体大鼠24 h后,可在其心脏诱导出良好的延迟保护作用;其机制可能与上调HSP70蛋白表达有关。

阿魏酸钠预处理对大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的延迟保护作用

目的:研究阿魏酸钠(SF)预处理对心肌细胞缺氧/复氧(A/R)损伤的延迟保护作用。方法:以细胞存活率、LDH活性、SOD活性、GSH-Px活性、MDA含量、细胞超微结构改变等为观察指标,用终浓度分别为0.84、1.68、3.36、6.72 mmol/L的SF预处理原代培养的大鼠乳鼠心肌细胞3 h、24 h后观察其对A/R损伤的保护作用及其特异性NO合成酶抑制剂L-NAME、MAPK抑制剂PD98059的影响。结果:SF预处理能显著提高细胞存活率,降低LDH活性,且呈剂量依赖性;SOD活性、GSH-Px活性增加,MDA含量减少,细胞超微结构显著改善。L-NAME和PD98059能部分取消SF预处理的上述延迟保护作用。结论:SF预处理对心肌细胞A/R损伤有明显的延迟保护作用,其机制可能与NO生成、MAPK活化有关。

mPTP在铁过载大鼠肝脏损伤中的作用

目的：探讨线粒体mPTP在铁过载大鼠肝脏损伤中的作用。方法：取成年健康SD雄性大鼠24只，随机分成三组，每组8只；分别隔天ip右旋葡萄糖铁剂83mg·kg-1（iron overload组）、右旋葡萄糖铁剂83mg·kg-1＋Cyclosporin A 5mg·kg-1（CsA组）或等容积NS（Cont组）；4w后，称各组动物体重，取肝脏测定铁含量和肝脏指数；取血测定ALT、AST值，取肝脏组织测定MDA含量、Caspase3、GPx、SOD活性及其蛋白表达；流式细胞仪测定线粒体膜电位（△ψm）及ROS生成、分光光度法测定mPTP开放；PI-Annexin V法测定细胞凋亡情况。结果：ip4W铁剂大鼠肝脏的铁浓度为1．045±0．090mg／g，肝脏指数与ALT、AST显著升高；GPx、SOD活性降低、蛋白表达下调；ROS生成显著增加、Ca2＋诱导的mPTP开放敏感、线粒体膜电位（△ψm）减小；Caspase3活性增加且蛋白表达上调、凋亡细胞比率明显增加；而同时ip特异性mPTP阻断剂CsA，虽不会使得大鼠肝脏的铁浓度降低，但可使线粒体膜电位（△ψm）稳定、Caspase3活性降低且蛋白表达下调、凋亡细胞比率减小、大鼠肝脏功能明显改善。结论：铁过载引起的大鼠肝脏损伤机制可能与线粒体mPTP开放有关，后者可能成为治疗铁过载引起的大鼠肝脏损伤的分子作用靶点。

阿魏酸钠预处理对大鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤线粒体的延迟保护作用

目的：研究阿魏酸钠（SF）预处理对心肌细胞缺氧／复氧（A／R）损伤的延迟保护作用的机制。方法：采用MTT比色法检测细胞存活率，生化检测细胞LDH活性、MDA含量、SOD活性和GPx活性．Western Blotting法检测SOD、GPx、HSP70的表达、TUNEL法与PI-Annexin V法测定细胞凋亡、流式细胞仪测定线粒体膜电位（△ψm）及ROS生成、分光光度法测定mPTP开放情况等指标，用终浓度为3．36mmol·L-1的SF预处理原代培养的大鼠乳鼠心肌细胞3h，24h后观察其对A／R损伤的保护作用及其ERKl／2抑制剂PDl84352（终浓度为0．5μmol·L-1）与基因转录抑制剂Act D（终浓度为5μmol·L-1）影响。结果：SF预处理能显著提高心肌细胞存活率、降低LDH活性、MDA含量减少；SOD、GPx活性增加，但其蛋白表达量却无明显差异；HSP70表达量显著上凋；ROS生成显著减少、mPTP开放与线粒体膜电位（△ψm）稳定、凋亡细胞比率减少。PDl84352、Act D均能取消SF预处理的上述作用。结论：SF预处理对心肌细胞A／R损伤延迟保护作用的机制可能与ERKl／2激活、上调HSP70蛋白表达、维护SOD、GPx等蛋白正常结构与功能，使得ROS生成减少、mPTP关闭、线粒体膜电位（△ψm）稳定、凋亡细胞减少有关。

Pim-3基因转染对心肌缺氧／复氧损伤的保护作用

目的：克隆原癌基因Pim-3并构建其GFP表达质粒，探讨Pim-3对心肌细胞遭受缺氧／复氧损伤时所起的保护作用。方法：采用RT-PCR从Wistar大鼠心肌组织中提取并克隆Pim3基因，经酶切和连接反应构建GFP表达质粒，分别为pEGFP-N2-Pim-3质粒和pEGFP-N2（空载质粒），经脂质体转染人原代培养的心肌中，随机分为七组，分别为对照组、对照＋pEGFP-N2组、对照＋pEGFP-N2-Pim-3组、缺氧复氧损伤组、缺氧复氧损伤＋pEGFP-N2组、缺氧复氧损伤＋pEGFPN2-Pim-3组、缺氧预适应处理组。实验结束时全自动生化仪检测培养液中乳酸脱氢酶（LDH）活性、四唑盐（MTT）比色试验测定细胞存活率、TUNEL法与P1-An-nexin V法测定心肌细胞凋亡、流式细胞仪测定心肌细胞线粒体膜电位（△ψm），并且测定Pim-3 mRNA及蛋白表达水平（RT-PCR、Western-blotting法）的改变。结果：经酶切证实和测序鉴定，成功克隆大鼠Pim-3基吲，并且细胞转染效率达15％；在缺氧复氧损伤后，pEGFP-N2-Pim-3转染组较pEGFP-N2转染组／未转染组的LDH值明显降低（p〈0．01），细胞存活率则明显升高（P〈0．01），凋亡细胞明显减少（P〈0．01），线粒体膜电位（△皿m）则明显升高（P〈0．01）；电镜结果表明转染了pEGFP-N2-Pim-3的心肌细胞线粒体膜大都完整，嵴清晰，较之pEGFP-N2转染组／未转染组损伤明显减轻；RT-PCR和Western-blotting结果显示，Pim-3在正常组几乎不表达，缺氧复氧损伤组明显升高（p〈0．01），缺氧预处理组的表达则比缺氧复氧损伤组更为升高（P〈0．05）。结论：外源性Pim-3基因转染人心肌细胞，对心肌细胞的缺氧／复氧损伤具有明显的保护作用。

缓激肽介导的阿魏酸钠对离体大鼠心脏的药理性延迟保护作用

目的:研究阿魏酸钠(SF)对离体大鼠心脏急性缺氧/复氧(A/R)损伤的药理性预适应延迟保护作用及其与缓激肽的关系。方法:6组Wistar大鼠分别为对照(Cont)组、A/R组、缺氧预适应(APC)组、APC+HOE140组、SF组、SF+HOE140组。SF组、SF+HOE140组大鼠静脉注射SF10mg/kg;25h后取大鼠心脏行Langendorff逆行灌流、制作A/R损伤模型。实验结束后分别检测LVP、±dp/dtmax等心功能指标、表面心电图、CF量以及其中LDH、CPK活性、心肌组织MDA含量与GSH-Px、SOD活性、心肌梗塞面积、心肌组织超微结构改变。结果:SF预处理能显著提高大鼠心脏LVP、±dp/dtmax、CF,降低LDH、CPK活性,SOD活性、GSH-Px活性增加,MDA含量减少;大鼠心脏梗塞面积明显减少。HOE140能取消SF预处理的上述延迟保护作用。结论:SF预处理对心肌组织急性A/R损伤有明显的延迟保护作用,其机制与缓激肽系统活性增强有关。