利用蛋白导入法沉默线粒体分裂调节蛋白Drp1的表达

目的:表达和纯化3转录反式激活因子-RNA结合结构域(3 Trans-Activator of Transcription-RNA binding domain,3TATRBD)重组蛋白,并利用蛋白导入法将siRNA运输到细胞中进行基因沉默实验。方法:将双链RNA激活蛋白激酶PKR的RNA结合域(Motif1)与细胞穿膜多肽TAT融合构建3TAT-RBD,并通过原核表达体系进行目的蛋白的表达和纯化。获取重组3TATRBD蛋白后,利用非变性胶电泳检测3TAT-RBD与荧光标示Cy3-dsRNA的结合能力。利用蛋白导入法和荧光显微镜观察3TAT-RBD将Cy3-dsRNA导入胶质瘤细胞的效率。在细胞水平检测和比较3TAT-RBD和Lipofectimine 2000将Cy3-dsRNA导入细胞的效率以及对沉默线粒体分裂蛋白动力蛋白相关蛋白1(dynamin-related protein 1,Drp1)的效果。结果:通过原核表达体系获得3TAT-RBD重组蛋白,体外结合实验证实3TAT-RBD与双链dsRNA具有良好的结合能力。荧光显微镜观察也发现3TAT-RBD与Lipofectimine 2000均能将Cy3-dsRNA导入gli36胶质细胞。在RNA干扰实验中发现,3TAT-RBD和Lipofectimine2000均能有效地抑制Drp1的表达,Lipo+siRNA和3TAT-RBD+siRNA组Drp1的表达水平分别为对照组的36%和42%。结论:本研究中构建的3TAT-RBD利用了细胞穿膜多肽和RBD与dsRNA结合特性,有效地将siRNA导入细胞进行基因沉默实验,这将为今后RNA干扰实验提供新的工具。

PDCA循环加强ICU医务人员手卫生管理对控制MRSA医院感染的影响

目的运用PDCA循环管理探讨在重症监护病房(ICU)医务人员手卫生依从性与耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)医院感染的相关性,确定加强医务人员手卫生可有效降低MRSA医院感染的发生,为采取有效措施降低MRSA感染率提供科学依据。方法运用PDCA循环管理工具,观察手卫生,加强全员培训,注重过程管理,强调规范洗手,定期检查和随机抽查相结合。结果实施PDCA循环后,医务人员的手卫生知识考试成绩合格率由24.3%升至91.5%;六步洗手法考核正确率由31.6%升至92.4%;医务人员手卫生依从率由原来的46.3%升至91.3%;实施PDCA后洗手指征较实施之前也有显著提高,而MRSA检出率由68.6%降至20.3%。结论应用PDCA循环可更好地帮助医护人员提高手卫生依从性,更有效控制院内MRSA检出率。