慢性HBV感染者肝组织CD28、CD34表达的研究

目的观察慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者肝活检组织变化和CD28、CD34的表达,探讨CD28、CD34与肝组织炎症分级及纤维化分期之间的关系。方法选择慢性HBV感染者30例,肝活检获取肝组织,石蜡包埋切片后HE染色、Masson染色和网状纤维染色检测肝组织炎症分级及纤维化分期;以Envision免疫组织化学二步法检测肝组织中CD28、CD34的表达,阳性细胞为染成棕黄色或棕褐色,每张切片选取5个高倍视野(×400),CD28的表达强度采用阳性细胞染色面积及染色强度积分相加计算,CD34的表达强度参照Weidner校正方法计算肝组织内微血管密度。结果 CD28在所有病例的肝组织中均有表达,G3、G4组表达水平高于G1组(P<0.05),S4组表达水平高于S1、S2组(P<0.05)。CD34在所有病例的肝组织中均有表达,G3、G4组表达水平高于G1、G2组,且G4最高(P<0.01),S2、S3、S4组表达水平均高于S1组(P<0.01)。结论肝组织CD28的表达状态与肝脏组织炎症及纤维化程度密切相关;肝窦毛细血管化的内皮标记CD34可间接反映肝脏组织炎症及纤维化程度。

慢性HBV和HCV合并感染患者肝损害的血清学改变

目的了解乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)合并感染的患者肝损害的血清学改变特点。方法收集225例慢性肝病(包括慢性乙型肝炎,慢性丙型肝炎,乙、丙肝病毒合并感染引起慢性肝炎或肝硬化,肝炎后肝硬化)患者的肝穿病理标本;所有病例均常规检测肝功能、血清HBVDNA、HBV血清标志物、血清HCVRNA,抗-HCV。所有肝活检标本均用10%中性福尔马林固定,石蜡包埋,做苏木素-伊红染色,进行肝炎分级分期,HBsAg、HBcAg免疫组化,HBVDNA、HCVRNA原位杂交检测。结果①重度慢性肝炎患者:HBV/HCV合并感染的患者(B加C组)谷-丙转氨酶(ALT)、谷-草转氨酶(AST)、总胆红素(TB)、直接胆红素(DB)水平与HCV单独感染(C组)患者相比差异无显著性(P>0.05),而比HBV单独感染的患者(B组)低(P<0.05)。②非重度慢性肝炎患者:三组的血清学改变差异无显著性(P>0.05)。③C组与B加C组患者的发病年龄相似(P>0.05),但明显大于B组患者(P<0.01)。④单独感染组发病的病程长短差异无显著性(P>0.05),但比合并感染组长,与单纯感染组相比,合并感染组发展为重肝的时间要短(P<0.01)。结论在重度慢性肝炎的患者中,肝功能损害的血清学指标(AST、ALT、TB、DB)不能很好地反映肝内损害严重度。与单纯感染组相比,HBV与HCV合并感染组发展为重度肝炎的时间要短。

microRNA在肝脏非可控病毒感染性炎性反应恶性转化过程中的作用

非可控性炎性反应是指机体在感染或非感染因素的作用下,炎性反应无法从组织损伤模式转变至平衡稳定,而导致炎性反应持续进行的状态。miRNA与多种炎性因子相互作用,在肝脏非可控病毒感染性炎性反应恶性转化过程中发挥了重要的调控作用。深入研究miRNA与炎性因子在该过程中的作用将有助于揭示炎性反应与肿瘤的关系,为临床治疗非可控性炎性反应恶性转化类疾病提供新的思路。

肝细胞癌中microRNA-375调控的基因网络分析

目的:探讨肝细胞癌中miR-375的表达及其调控的相关靶基因和信号通路。方法:采用原位杂交检测miR-375在人肝癌组织芯片的表达情况;人全基因组表达谱芯片检测4株肝癌细胞株;MAS生物信息学软件筛选miR-375调控靶基因及相关信号通路。结果:原位杂交结果显示miR-375在肝癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P<0.05);人全基因组表达谱芯片结果分析显示4株转染miR-375的肝癌细胞的共上调基因有20个,共下调基因有17个;MAS生物信息学软件分析显示4株转染miR-375的肝癌细胞共有的上调信号通路有54条,下调信号通路有48条。结论:miR-375与肝细胞癌有密切的关系。对miR-375调控的肝细胞癌相关靶基因与信号通路进行多元化筛选,为后续全面深入的研究肝细胞癌发生发展的机制提供了便利。

α-2a干扰素对大鼠肝组织bcl-2基因表达的影响及意义

目的:探讨α-2a干扰素(IFNα-2a)对大鼠肝组织bcl-2基因表达的影响和对肝纤维化的作用及其机制.方法:将SD大鼠随机分成纤维化模型组(A组,CCl4诱导形成大鼠肝纤维化模型),对照组(B组)及IFNα-2a干预组(C组).用RT-PCR法检测各组大鼠肝脏bcl-2的表达,常规HE和网状纤维染色检测肝组织标本.结果:C组纤维化程度及肝细胞脂肪变性较A组显著减轻,但肝组织炎症改变无显著差异性.C组bcl-2基因蛋白表达显著低于A组(P<0.01),但显著高于B组bcl-2基因蛋白表达的量(P<0.01).结论:IFNα-2a能够阻断CCl4诱导的肝纤维化和减少肝脂肪变性.其机制与bcl-2基因表达有关,可能通过调节bcl-2基因表达与HSC凋亡,从而阻断肝纤维化和减少肝脂肪变性.

慢性乙型肝炎患者病毒载量与肝内炎症及纤维化的关系

目的观察慢性乙型肝炎患者病毒载量与肝内炎症及纤维化的关系。方法 244例慢性乙型肝炎患者行肝穿活检,标本用10%甲醛固定,石蜡包埋,作苏木素-伊红染色,对其进行炎症分级及纤维化分期;并常规检测肝功能、血清HBV DNA。结果 244例慢性乙型肝炎患者中,乙肝病毒载量(血清HBV DNA)在各个炎症分级及纤维化分期中比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论在慢性乙型肝炎患者中,乙肝病毒载量与肝内炎症分级及纤维化分期无明显的相关性。

IgG4相关性硬化性胆管炎误诊为肝门胆管癌1例并文献复习

目的探讨IgG4相关性硬化性胆管炎的诊断与鉴别诊断。方法分析1例术后病理确诊为IgG4相关性硬化性胆管炎(IgG4-SC)的临床资料并文献复习。结果患者病变位于肝门部胆管,临床表现为明显的梗阻性黄疸症状,腹部彩超提示胰头占位;胆总管增宽,肝内胆管扩张可疑胆总管癌。CT及磁共振胰胆道造影(MRCP)检查均提示胆道狭窄,胆管壁增厚,肝内胆管扩张,考虑肝门区胆管癌可能。术前与术中均诊断为肝门胆管癌,术后病理检查确诊为IgG4-SC。术后口服糖皮质激素,持续一月余,黄疸逐渐恢复正常,随访肝功能黄疸指标正常。结论临床应重视梗阻性黄疸的鉴别诊断,加强对IgG4-SC的认识,当影像学表现为胆道梗阻合并不明原因的胰腺炎及胆管炎时,应考虑IgG4-SC的可能。常规检测血清IgG4水平,必要时行内镜超声引导下细针穿刺、胆道细胞学检查或胆道病理活检可明确诊断。

microRNA原位杂交技术影响因素的探讨

目的探讨miRNA原位杂交技术的多种影响因素,以完善miRNA原位杂交分析方法。方法选择不同组织来源、保存时间、切片厚度的常规病理组织切片进行U6探针的原位杂交分析;选择不同浓度的蛋白酶K对组织切片与MDA-MB-231爬片细胞进行U6探针的原位杂交分析;实时定量RT-PCR方法和爬片细胞原位杂交对BT549、T47D细胞株进行miR-375的表达分析。结果不同组织来源、保存时间、切片厚度的石蜡标本均能显示细胞核内的U6表达;组织切片原位杂交实验中,乳腺组织切片20μg/ml的蛋白酶K作用组较其他组的原位杂交效果好;肝脏组织切片200μg/ml的蛋白酶K作用组的显色最好;爬片细胞原位杂交实验中,2μg/ml的蛋白酶K作用组的显色更深;U6与miR-375的原位杂交最适浓度分别为1ng/ml和100ng/ml;实时定量RT-PCR和爬片细胞原位杂交结果均显示,BT-549的miR-375表达明显低于T47D。结论 miRNA原位杂交操作能在常规固定并长期保存的石蜡组织标本上操作;蛋白酶K与探针的浓度应当依据病理标本类型等多因素预实验摸索;细胞水平的实时定量RT-PCR和爬片细胞原位杂交分析结果的比对为确定miRNA探针的特异性提供了帮助。

原位杂交检测microRNA-205在乳腺癌中的表达

目的探讨microRNA-205表达与乳腺恶性病变的关系。方法乳腺疾病及癌组织芯片原位杂交分析microRNA-205的表达;实时定量RT-PCR方法检测正常乳腺细胞株、恶性程度不同的乳腺癌细胞株中microRNA-205的表达。结果原位杂交分析显示,36例正常与良性乳腺病变中,33例(91.67%)表达阳性;36例乳腺癌中,23例(63.89%)表达阳性。microRNA-205的表达在乳腺正常与良性病变中的表达较恶性病变中高且有统计学差异(P=0.011),但与乳腺癌TNM分期、临床分期无关(P>0.05)。实时定量RT-PCR结果显示,四个高度恶性乳腺癌细胞株(MDA-MB-231、HS578T、BT549和SUM159PT)中microRNA-205的表达较永生化正常乳腺上皮细胞株MCF10A和四个低度恶性细胞株(MDA-MB-468、T-47D、ZR-75-1和SKBR3)中为低(P<0.05)。结论原位杂交适用于microRNA-205的表达分析;组织芯片标本原位杂交与乳腺细胞株实时定量RT-PCR分析结果提示,microRNA-205可能参与了乳腺癌的发生、发展,并随着乳腺癌的演进呈下调趋势。

临床不典型肝胆管细胞癌1例

患者，男，60岁，因发现肝内占位5年于2013年2月18日收入院。患者5年前体检行B超检查，结果提示肝右叶见一大小约3．0cm×3．0cm稍高回声团，边界清，周边无声晕，其内探及点状血流信号，考虑“血管瘤可能性大”，患者自觉无明显不适，未做任何治疗，

乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒在合并感染者中的相互作用

目的了解HBV和HCV在合并感染的慢性肝病患者中相互作用的特点。方法收集2006年1月-2007年10月在我院治疗的慢性肝病（包括HBV和HCV合并感染引起的慢性肝炎或肝硬化、肝炎后肝硬化、慢性乙型肝炎、慢性丙型肝炎）患者的肝穿病理样本及其血清。所有病例均常规检测肝功能，血清HBVDNA、血清HBV标志物、血清HCVRNA、抗-HCV；所有肝活检样本均用10％中性福尔马林固定，石蜡包埋，作苏木精-伊红、Masson和网状纤维染色，并进行肝炎分级分期，HBsAg和HBcAg免疫组化，HBVDNA和HCV RNA原位杂交检测。结果HBV和HCV合并感染的患者重型慢性肝炎（G4）发生率比HBV或HCV单独感染的患者高，分别为62．50％、27．05％和30．56％（P〈0．01）。在HBV和HCV合并感染引起的慢性肝炎患者中，HBVDNA阳性率为4／32（12．5％），HCVRNA阳性率为24／32（75％），而HBV或HCV单独感染组分别为HBVDNA阳性10r7／122（87．7％）和HCVRNA阳性58／72（80．56％）。结论HBV和HCV合并感染可增加重型慢性肝炎的发生率。在HBV和HCV合并感染的患者中，HBV和HCV呈相互抑制的作用，主要表现为HCV对HBV的抑制。

乳腺癌转移相关microRNA-200c调控的基因网络分析

目的:结合生物信息学分析手段,筛选乳腺癌转移相关微RNA(microRNA,miRNA)-200c调控的基因网络。方法:采用Aymetrix miRNA生物芯片分析12株乳腺细胞中差异表达的miRNA;应用脂质体转染法将miR-200c模拟物(mimic)转入4株高转移性的乳腺癌细胞株(BT549、HS578T、MDA-MB-231和SUM159PT)中,再用Aymetrix mRNA生物芯片检测转染miR-200c mimic后高转移性乳腺癌细胞株中差异表达的基因。采用生物分子功能注释系统(Capital Bio Molecule Annotation System,MAS),筛选miR-200c调控的信号通路与基因网络。结果:12个乳腺细胞株中筛选出9个差异表达的miRNA(P<0.01,倍数值≥20或≤-20),其中以miR-200c在高转移性乳腺癌细胞株中下调幅度最显著。4个转染miR-200c mimic的乳腺癌细胞株中共有33个共上调基因及13个共下调基因。实时荧光定量-PCR与蛋白质印迹法验证结果显示,共调基因锌指E框结合同源框1(zinc finger E-box binding homeobox1,ZEB1)mRNA和蛋白在4个转染细胞株中均下调。MAS生物信息学分析结果显示,转染miR-200c mimic的乳腺癌细胞株中共有的差异表达基因相关信号通路包括嗅觉传导(olfactory transduction)通路、细胞因子-细胞因子受体关联(cytokine-cytokine receptor interaction)通路和细胞黏附分子(cell adhesion molecules,CAMs)通路等,不同的信号通路可以通过共调基因相互联系,在特定的信号通路中,共调基因间也存在密切的相互联系。结论:以高通量生物芯片检测为基础,运用生物信息学分析手段,多元化筛选获得miR-200c调控的基因网络,为后续展开miR-200c作用机制的研究提供了明确的方向。

乳酸脱氢酶编码基因在肿瘤中表达及其转录调控机制的研究进展

肿瘤细胞具有无氧糖酵解增加而线粒体有氧氧化被抑制的代谢特点,而乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)在调节糖酵解与有氧氧化的转换过程中发挥了关键作用。目前,尽管LDH作为生化检测指标用于辅助诊断肿瘤相关性疾病已获得了临床科研工作者的广泛关注,但其不同亚基编码基因的表达调控机制尚不完全明确。本文通过综述LDH亚基编码基因在肿瘤中的表达及其DNA甲基化、微RNA和转录因子等转录水平的调控方式,探索LDH编码基因作为肿瘤临床分子标志物的可行性,以期为更深入地认知能量代谢与肿瘤之间的关系提供理论依据。