远缘链球菌中葡萄糖基转移酶催化活性区基因的克隆和初步表达

目的 :构建一株高效表达Streptococcussobrinus 6715中GTF -I催化活性区 (含有B细胞表位 )多肽的菌株 ,为抗GTF -I的单克隆抗体的检测和防治龋病亚单位疫苗的研究奠定基础。方法 :提取基因组DNA ,然后用PCR技术扩增出中目的肽段的约 1.1kb编码基因 ,并将其克隆至表达载体 pGEX -4T -1中构建 pGEX -gtf表达质粒。该质粒转化大肠杆菌JM 10 9后获得重组表达菌株。PCR筛选阳性克隆子。异丙基-β -D -硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导 ,确定含有 pGEX -gtf的大肠杆菌JM 10 9的表达情况。 结果 :含有质粒pGEX -gtf的大肠杆菌JM 10 9能够表达GST -GTF融合蛋白。 结论 :成功扩增目的基因 ,并且把它定向克隆到表达载体pGEX -4T -1中构建表达质粒 。