病例教学法在病理生理学理论教学中的实施与评价

目的与传统的灌输式理论教学方法进行比较，探讨在本科生病理生理学理论教学中开展病例教学法的必要性，探索开展病例法教学的可能方法，并评价其效果。方法在2005级本科生中抽取儿科专业两个班作为实验班，五官专业两个班作为对照班，在实验班中采用全程病例教学法，在对照班中仍采用传统的灌输式理论教学方法。课程结束之后，在学生中进行问卷调查，同时采用实验班和对照班期末考试考同一份卷的方法比较两种教学的成绩差异。结果采用病例教学法能够更好地调动学生的学习兴趣和热情，培养学生分析问题、解决问题及临床思维的能力，也可以促进教师综合教学能力的提高，并进一步提高病理生理学的理论教学质量。

构建病理生理学教学网站初探

现代信息技术给教师与学生提供全新的教学模式和学习工具,在校园网上构建病理生理学教学网站,是改革传统病理生理学教学模式、丰富教学内容、提高教学质量的重要途径。本文就构建病理生理学教学网站的必要性、可行性、功能、结构进行了初步的探讨。

留学生病理生理学实验教学实践及体会

本文通过留学生病理生理学实验教学的实践,对目前留学生病理生理学实验教学中存在的教材、教学准备以及教学方法等问题进行了探讨,以期进一步提高留学生教学的质量和效果。

DYRK2在肿瘤发生发展及预后中的研究进展

双特异性酪氨酸磷酸化调节激酶2(dual-specificity tyrosine-phosphorylation-regulated kinase 2,DYRK2)属于DYRK家族,是真核生物中一种进化保守的酶。DYRK2在不同组织及肿瘤中的表达具有较大差异。既往关于DYRK2在肿瘤中的作用报道表明DYRK2通过延长G1期、促进细胞凋亡及抑制上皮-间充质转化来延缓肿瘤生长。近年来研究发现DYRK2亦可通过促进细胞有丝分裂、抗肿瘤凋亡、促进细胞侵袭、迁移及增强耐药而发挥促癌作用。本文就DYRK2的结构、功能及其在肿瘤发生发展中的作用及预后价值进行综述。

脑益康对D-半乳糖和亚硝酸钠所致Alzheimer病小鼠模型的保护作用

目的:探讨脑益康(中药)对D-半乳糖(D-gal)和亚硝酸钠(NaNO2)所致阿尔茨海默病(AD)小鼠模型的保护作用。方法:采用D-gal和NaNO2腹腔注射建立AD小鼠模型。应用迷宫刺激器检测小鼠学习记忆能力,生化方法检测小鼠脑组织一氧化氮(NO)含量和单胺氧化酶-B(MAO-B)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、Na+-K+-ATP酶及Ca2+-ATP酶活性;RT-PCR检测凋亡调控基因Bax、Bcl-2mRNA表达情况。结果:脑益康(中药)能改善小鼠学习记忆能力,降低AD小鼠脑组织MAO-B活性,升高Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性,抑制BaxmRNA的表达,上调Bcl-2mRNA的表达。结论:脑益康(中药)对AD小鼠有一定保护作用,其机制可能与降低脑组织MAO-B活性,提高脑组织Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性,调节Bcl-2mRNA和BaxmRNA的表达,发挥抗氧化作用,减轻神经细胞损伤有关。

脑益康对D-半乳糖损伤的海马神经元的保护作用

目的:观察脑益康对D-半乳糖(D-gal)诱导的海马神经元损伤的作用。方法:制备脑益康含药血清。应用D-gal诱导海马神经元损伤,MTT法测定细胞活力,生化法测定细胞单胺氧化酶-B(MAO-B)、Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活力,RT-PCR法检测细胞bax和bcl-xlmRNA的表达。结果:脑益康含药血清可显著提高细胞活力和ATP酶活力,降低MAO-B活力,上调bcl-xl mRNA的表达,降低bax mRNA的表达。结论:脑益康可通过提高ATP酶活力,降低MAO-B活力,抑制细胞凋亡,对D-gal处理的海马神经元起到保护作用。

美洛昔康对Aβ诱导Alzheimer’s disease大鼠脑内炎症损伤的影响

目的:研究美洛昔康对β-淀粉样蛋白(Aβ)诱导的阿尔茨海默病(AD)模型大鼠脑内炎症损伤的保护作用,并探讨其抑制炎症作用的机制。方法:Aβ1-40海马注射建立AD大鼠模型。免疫组化法观察大鼠海马核因子κBp65(NF-κBp65)和星形胶质细胞(AS)胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达变化;Western-blot法测定大鼠皮层组织GFAP的表达;ELISA法检测大鼠皮层组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平变化;RT-PCR法检测大鼠海马组织白细胞介素-1β(IL-1β)mRNA的表达情况。结果:美洛昔康能抑制AD大鼠海马NF-κBp65和GFAP的表达;降低大鼠皮层TNF-α的含量;抑制AD大鼠海马IL-1βmRNA的表达。结论:美洛昔康通过减少AD模型大鼠海马、皮层组织GFAP表达,抑制AS的增生,降低NF-κBp65的活性,减少炎症因子TNF-α和IL-1β的水平,减轻脑内炎症反应。

生长激素诱导心肌细胞外信号调节酶激活及其上游调控

目的和方法：用生长激素（ＧＨ）刺激培养的新生大鼠心肌细胞，用含ＭＢＰ凝胶分离法测定细胞外信号调节酶（ＥＲＫｓ）活性，用ＷｈａｔｍａｎＰａｐｅｒＦｉｌｔｅｒ法测定Ｒａｆ－１活性，观察ＧＨ是否激活心肌细胞Ｒａｆ－１－ＥＲＫ级联反应。观察负显突变Ｒａｓ质粒（Ｄ．Ｎ．Ｒａｓ）与ＨＡ－ＥＲＫ２质粒复合转染或有关抑制剂对ＧＨ诱导ＥＲＫ激活的影响。结果：ＧＨ以时间和浓度依赖性方式激活心肌细胞ＥＲＫ１和ＥＲＫ２。ＥＲＫ上游调节酶Ｒａｆ－１活性也升高。过度表达Ｄ．Ｎ．Ｒａｓ明显抑制ＧＨ诱导的心肌细胞ＨＡ－ＥＲＫ２激活。Ｒａｓ特导性抑制剂ｍａｎｕｍｙｃｉｎ也显著阻断ＧＨ诱导的心肌细胞ＥＲＫ激活。而分别用ＴＰＡ和ＣａｌｐｈｏｓｔｉｎＣ耗竭和抑制心肌细胞ＰＫＣ，均未阻断ＧＨ对ＥＲＫ的激活作用。结论：ＧＨ激活心肌细胞的Ｒａｆ－１－ＥＲＫ级联反应，这种激活依赖上游Ｒａｓ。

氧化苦参碱对脂多糖诱导的RAW264.7细胞一氧化氮及其诱导型合酶表达的影响

目的:观察氧化苦参碱(OMT))对脂多糖(LPS)诱导的RAW 264.7细胞一氧化氮(NO)释放量及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响。方法:采用LPS诱导RAW 264.7细胞建立细胞炎症反应模型。实验分组:空白对照组、LPS组(1μg/mL)、OMT组(100μmol/L)、LPS+OMT小剂量组(20μmol/L)、LPS+OMT中剂量组(50μmol/L)、LPS+OMT大剂量组(100μmol/L)。采用Griess试剂法测定细胞培养液中NO释放量。采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法测定RAW 264.7细胞iNOS mRNA的表达。结果:OMT显著减少LPS诱导的RAW 264.7细胞NO的释放(P<0.05,P<0.01);同时减少LPS诱导的RAW 264.7细胞iNOS mRNA的表达(P<0.05,P<0.01)。结论:OMT可能通过抑制LPS诱导的巨噬细胞iNOS mRNA表达,减少NO的释放量而发挥抗炎作用。

全反式维甲酸抑制TGF-β_1诱导的大鼠肾系膜细胞纤维连接蛋白表达及Smad2,3,4核转位

目的采用转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)在体外刺激大鼠肾系膜细胞表达纤维连接蛋白(fibronectin),观察全反式维甲酸(all-trans retinoicacid,atRA)对它的作用及对TGF-β1的Smad通路的影响。方法用Western blot方法检测TGF-β1诱导的肾系膜细胞纤维连接蛋白表达,Smad2的磷酸化,磷酸化Smad2、总Smad2/3和Smad4的核转位,以及atRA对TGF-β1的这些作用的影响。结果atRA能抑制TGF-β1诱导的肾系膜细胞纤维连接蛋白表达。atRA对TGF-β1引起的Smad2的磷酸化无明显作用,但atRA能部分阻断TGF-β1引起的磷酸化Smad2、Smad2/3和Smad4核转位。结论atRA体外拮抗TGF-β1的致纤维化效应可能是由其减少磷酸化Smad2、Smad2/3、Smad4的核转位所致。

脑血流动力学检测在新生儿缺氧缺血性脑病诊断治疗中的应用研究

目的:探讨脑血流动力学在新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)中的动态变化及其在HIE诊断治疗中的临床意义。方法:采用彩色多普勒超声诊断仪对观察组HIE患儿54例和正常对照组50例于生后不同时段进行脑血流动力学指标的检测。结果:与对照组相比HIE组生后24、48、72h内各组动脉流速均降低,而阻力指数较对照组增高(P<0.05)。对比轻、中、重3组大脑动脉24、48、72、120h的血流动力学指标,发现阻力指数与病情呈正相关。结论:采用彩色多普勒超声检测HIE患儿大脑动脉的血流动力学参数能及时反映窒息新生儿脑血流的变化,有利于早期诊断HIE,及时制定干预措施,减少后遗症的发生。

HSPgp96和LPS激活小鼠腹腔巨噬细胞的比较研究

目的:比较HSPgp96与LPS对巨噬细胞免疫功能的激活作用。方法:培养小鼠腹腔巨噬细胞,分组用PBS、HSPgp96和LPS诱导后,在不同时间用酶法测定NO生成量。按效靶比10:1加入H22肝癌细胞,24h后靶细胞进行单细胞凝胶电泳,染色观察。在不同时间用激光扫描共聚焦显微镜观测巨噬细胞MHC-Ⅱ和CD86的表达。结果:LPS和HSPgp96促进巨噬细胞NO生成的作用相当,并随作用时间延长而增加。巨噬细胞攻击后的靶细胞呈现DNA损伤后的彗星现象。LPS和HSPgp96均促进巨噬细胞MHC-Ⅱ和CD86的表达,但HSPgp96诱导组表达更快更强。结论:与LPS相比,HSPgp96活化小鼠腹腔巨噬细胞细胞毒活性的作用相当,而诱导抗原提呈功能的作用更强。

天花粉蛋白诱导H_(22)肝癌细胞凋亡的研究

目的 :观察天花粉蛋白 (trichosanthin,TCS)在体外诱导 H2 2 肝癌细胞凋亡的效果。方法 :以不同剂量的 TCS加入到H2 2 肝癌细胞溶液中 ,在 2 4孔培养板上培养 72 h后荧光染色并涂片 ,激光共聚焦显微镜下观察 TCS诱导 H2 2 肝癌细胞凋亡的作用效果。结果 :10 μg/ml浓度的 TCS就可诱导 H2 2 肝癌细胞出现典型的凋亡形态学特征。经统计学分析 ,10 0 μg/ml TCS组与 5 0 μg/ml TCS组间差异无统计学意义 (P>0 .0 5 ) ,其余各组间差异均有统计学意义 (P<0 .0 1)。TCS的作用浓度与凋亡指数间有正相关关系 (r=0 .9713,P<0 .0 1)。结论 :TCS在体外可诱导 H2 2 肝癌细胞发生凋亡 ,诱导 H2 2 肝癌细胞凋亡是 TCS抗肝癌作用的机制之一 ,具有成为肝癌治疗新药的潜在价值。

华蟾素对小鼠H_(22)肝癌移植瘤作用的研究

目的 :观察华蟾素对小鼠移植肝肿瘤H2 2 生长的影响 ,初步探讨华蟾素对肝肿瘤细胞的作用机制。方法 :以瘤株 (H2 2 )接种于小鼠 ,制备肝癌模型 ,设正常对照组、荷瘤模型组、5 -FU组、华蟾素组。各组小鼠采血计白细胞数 ,切除肿瘤、胸腺及脾脏 ,称取重量 ,计算肿瘤抑制率 ;光、电镜下观察肿瘤组织结构。结果 :华蟾素和 5 -FU组小鼠肿瘤抑制率分别为 3 0 .99%和 74.2 8% ,均明显高于荷瘤模型组 (P <0 .0 1)。华蟾素组白细胞数与正常组比较无明显差异 (P>0 .0 5 ) ,显著高于 5 -FU组 (P <0 .0 1)。电镜观察华蟾素组有典型的细胞凋亡形态学特征。结论 :华蟾素通过提高机体免疫功能 。

急性心肌梗塞患者血浆氨基酸的变化

报道12例急性心肌梗塞患者血浆中21种游离氨基酸的含量在发作期和稳定期的变化。发现在发作期血浆中谷氨酰胺、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、酪氨酸及苯丙氨酸的浓度升高,而谷氨酸的浓度下降;在稳定期以上各游离氨基酸的血浆浓度均回复到正常水平。

HSPgp96与rIL-2治疗小鼠H22肝癌移植瘤的实验研究

目的 :研究热休克蛋白 gp96 (Heat- Shock Protein gp96 ,HSPgp96 ) -肽复合物瘤苗与重组人白介素 -2 (Recombinant Human Interleukin- 2 ,r IL- 2 )对小鼠 H2 2肝癌移植瘤的治疗效果。方法 :从 H2 2肝癌细胞中提取和纯化 HSPgp96。建立小鼠 H2 2肝癌移植瘤模型 ,应用 HSPgp96与 r IL - 2治疗并比较疗效 ,观察指标 :瘤重 ,光镜、电镜下观察组织结构。结果 :经鉴定获得纯化的 HSPgp96。HSPgp96 5 μg与 r IL- 2 2 5 ku治疗小鼠 H2 2肝癌有效。结论 :该实验方法提纯的 HSPgp96与重组人 IL - 2都能有效抑制小鼠 H2

原油蒸气对机体影响的实验研究1．对学习记忆、心和肾的影响

本研究观察大鼠、小鼠经原油蒸气（３０ｇ／ｍ３，１５ｇ／ｍ３，３ｇ／ｍ３）吸入染毒，对学习记忆、心电图和肾的影响。结果表明；（１）原油蒸气可影响动物的学习记忆能力，其机制与脑内单胺类和氨基酸类神经递质变化有关．“神乐康”可改善原油蒸气降低的学习记忆能力。（２）其心电图和肾脏末发现有病理意义的改变。

海马神经元Toll样受体4的髓样细胞分化因子非依赖途径在神经炎症中的作用

目的探讨海马神经元Toll样受体4(TLR4)介导的髓样细胞分化因子88(My D88)非依赖途径在神经炎症中的作用。方法构建3对针对My D88基因的特异siRNA序列,经脂质体途径转染入体外培养的海马神经元,通过免疫荧光检测转染效率和RT-q PCR选择最佳siRNA序列,并优化转染条件,达到沉默My D88基因而保留My D88非依赖途径的目的;将体外培养海马神经元随机分成4组:空白对照组(Control)、阴性对照组(NC)、LPS组和siRNA组。采用RT-q PCR分别测定TLR相关分子(TRAM)、TLR4相关的干扰素活化子(TRIF)mRNA的表达;Western印迹检测TRIF蛋白水平;ELISA技术测量培养上清中TRAM、干扰素诱导蛋白-10(IP-10)和白细胞介素-1β(IL-1β)浓度。结果 siRNA转染成功,siRNA2的沉默效果最佳,效率达94.3%,且最适转染浓度和时长分别为30 nmol/L和48 h。空白对照组和阴性对照组可观察到TRAM、TRIF mRNA以及TRIF蛋白的表达,同时上清液中也可以检测到TRAM、IP-10和IL-1β;LPS刺激组,上述检测指标的表达量均明显增高;siRNA组,在阻断My D88基因的前提下加LPS刺激,与空白对照组和阴性对照组相比,上述检测指标的水平均显著增高,但在上清液中,IL-1β的浓度低于LPS组。结论 siRNA序列能够成功转染入体外培养的海马神经元,发挥很强的沉默效率,达到理想的阻断My D88依赖型途径的作用;海马神经元有TLR4的My D88非依赖途径的存在的证据,当激动该途径时,相应炎症因子的表达上调;TLR4激活所致的My D88非依赖途径活化可能是神经退行性疾病的发病机制之一。

ERK和P38MAPK在转化生长因子-β_1诱导肾系膜细胞合成纤维连接蛋白中的作用

目的:研究细胞外信号调节激酶(ERK)和P38丝裂原活化的蛋白激酶(P38MAPK)在转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导肾系膜细胞合成纤维连接蛋白中所介导的作用。方法:用Westernblot检测TGF-β1诱导的肾系膜细胞纤维连接蛋白合成以及ERK和P38MAPK的磷酸化。用PD98059和SB203580分别来抑制ERK和P38MAPK的活性。结果:加入TGF-β1后,系膜细胞ERK、P38MAPK磷酸化水平逐渐增加,5小时达高峰。TGF-β1显著增加系膜细胞纤维连接蛋白的表达。用PD98059预处理能增加TGF-β1引起的纤维连接蛋白合成,且具有浓度依赖性。SB203580预处理能降低TGF-β1引起的纤维连接蛋白表达,也具有浓度依赖性。结论:ERK活化可能负性调控TGF-β1引起的纤维连接蛋白表达,而P38MAPK活化对其则可能起正性调控作用。