小鼠脊髓腰膨大发育的初步遗传分析

目的 :筛选小鼠脊髓腰膨大发育具有差异的近交系。检测小鼠各世代群体中个体的数量性状值 ,研究遗传因素在小鼠腰膨大发育中贡献的大小。方法 :取 4种近交系小鼠 ,A/J;C5 7BL/6J ;DBA/2J ;12 9xl/SvJ以及A/J与C5 7BL/6J杂交获得的F1和F2个体 ,多聚甲醛灌注后进行腰膨大截面积测定。结果 :四个近交系中 ,A/J与C5 7BL/6J脊髓腰膨大截面积差别显著。脊髓腰膨大发育遗传度为 3 5 % ,最少控制基因对数为 2。结论 :小鼠脊髓腰膨大发育的数量性状值与遗传参数的确定 ,为其数量性状基因座的确定提供了有价值的资料。

大鼠坐骨神经损伤后神经与肌肉中一氧化氮合酶基因的表达

目的 探讨外周神经机械损伤对神经和所支配肌肉中神经型一氧化氮合酶 (nNOS)和诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)基因表达的影响。方法 12只雌性SD大鼠分为 4组 ,分别用止血钳挤压右侧坐骨神经 30分钟、1、2和 5小时 ,然后取右侧坐骨神经和腓肠肌作为实验组材料 ,取左侧为自体正常对照。Trizol法提取样品总RNA。应用RT PCR法和RNA酶保护试验 (RPA)法测定 2种NOS的表达 ,以 2 ,3 二羟基丙醛 3 磷酸脱氢酶 (GAPDH)为内参。PCR电泳带和RPA杂交带的密度测定采用NIH图像分析软件。结果 与自体对照比较 ,神经组织在损伤各时间段中 2种NOS表达基本不变。肌肉组织的nNOS在 1小时组中表达升高 ,2小时组下降 ,5小时组升高。iNOS在 1和 2小时组中表达下降 ,5小时组升高。结论 神经机械损伤后神经短期内对神经自身NOS表达无影响 ,但对所支配组织中NOS表达产生影响 ,这种影响与非NOS的神经信号变化相关。

大鼠脑组织中CNTF基因克隆及其探针制备

目的 克隆大鼠CNTF基因并制备地高辛标记的CNTF探针。方法 采用RT PCR法 ,从大鼠脑组织mRNA中扩增CNTF基因ORF区片段 ,克隆入T载体 ,并经序列测定。以地高辛素标记CNTF基因片段为探针 ,对成年大鼠脊髓组织切片进行原位杂交。结果 RT PCR法扩增出一特异产物与预期长度 6 16bp相符 ,序列测定与CNTF基因 10 0 %同源。原位杂交显示阳性信号出现在成年大鼠脊髓白质的前索及侧索的周边部分 ,为杵棒形和三角形带有纤细突起的胶质细胞。结论 采用RT PCR和T载体技术获得了大鼠脑组织中的CNTF基因克隆 ,地高辛标记的CNTF探针原位杂交显示正常大鼠脊髓白质的部分胶质细胞中表达CNTFmRNA。

pAdCMV-tk/pJM17同源重组及扩增方法的研究

目的 :探讨磷酸钙沉淀法同源重组穿梭质粒 p Ad CMV- tk与腺病毒基因组改装质粒 p JM17的可行性。方法 :用磷酸钙沉淀法将质粒 p Ad CMV- tk与质粒 p JM17共转染至 2 93细胞 ,获得复制缺陷的重组腺病毒 Ad-CMV- tk,将其在 2 93细胞中扩增 ,氯化铯密度梯度离心法纯化扩增病毒 ,空斑实验测定病毒滴度。结果 :质粒 Ad-CMV- tk与质粒 p JM17在 2 93细胞中同源重组后 7～ 10天出现完全的细胞病变态反应。纯化后病毒滴度为 3× 10 1 0pfu/ ml。结论 :磷酸钙沉淀法能成功获得同源重组病毒 。

小鼠脊髓腰膨大横截面积数量性状基因座研究

应用具有 87个标记位点的 (A/J) /(C5 7BL/6 J) F2群体的分子遗传图谱对控制小鼠脊髓腰膨大横截面积的数量性状基因座 (Quantitative Trait L oci,QTL)进行区间作图。共定位了 2个 QTL:DXMit14 0和 D15 Mit2 6 ,并估算了每个 QTL的加性效应和贡献率。

卵巢癌实体瘤染色体畸变分析

目的 :观察卵巢癌实体瘤组织中染色体畸变 ,探索卵巢癌细胞遗传学特异性。方法 :卵巢癌患者肿瘤组织 ,经秋水仙素 3 7℃作用 2 h,两次低渗获得中期分裂相 ,G显带观察。结果 :19例卵巢癌标本中染色体畸变常涉及的染色体有 1,2 ,3 ,5 ,6,7,11,14,17,2 0 ,2 1,X等染色体和多种畸变形式。结论 :小样本卵巢癌实体瘤组织中 ,染色体畸变常发生在一些特定染色体 。

神经生长因子作用于背根神经节细胞过程中神经元基因的表达

目的 探讨神经生长因子 (nervegrowthfactor,NGF)作用于离体培养的背根神经节(dorsalrootganglion ,DRG)细胞过程中神经元基因的表达变化。 方法 采用逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)方法 ,观察NGF作用于离体培养的DRG细胞在 4 ,12 ,2 4h时 ,生长相关蛋白 4 3(growthassociatedprotein 4 3,GAP - 4 3)、低分子质量神经丝蛋白 (neurofilament,NF -L)、翻译延伸因子 2A3- 2(anewgenehomologoustohumantranslationalelongationfactor,EF -Ts)基因水平的表达变化。 结果 在NGF作用于离体培养的DRG细胞过程中 ,GAP - 4 3、NF -L、2A3- 2基因表达在不同时间呈不同程度的上调。 结论 NGF可作用于生长相关蛋白、神经细胞骨架以及相关蛋白翻译水平 ,促进神经元存活和神经突起延伸。

卵巢癌实体瘤ERCC2表达与肿瘤发生及耐药的关系

目的:探求ERCC2表达与人卵巢癌实体瘤发生、耐药的关系。方法:分别取23例卵巢癌实体瘤、癌旁正常组织、培养及加药培养卵巢癌实体瘤组织各100 mg,提取组织中总RNA,采用RT-PCR的方法分析细胞中ERCC2表达水平。结果:5例标本中,ERCC2在卵巢癌实体瘤表达显著低于癌旁正常组织。20例实体瘤标本经更生霉素、环磷酰胺、顺铂、5-氟尿嘧啶、阿霉素处理后ERCC2分别增加18.2 %、72.0 %、104.9 %、14.1 %、23.2 %。结论:ERCC2在部分卵巢癌实体瘤患者中低表达,可能是这些卵巢癌实体瘤患者细胞恶变形成的基础。卵巢癌实体瘤患者对更生霉素、环磷酰胺、顺铂、5-氟尿嘧啶、阿霉素耐药程度不同。

ERCC_2在卵巢转移瘤中的表达

目的 以人卵巢转移瘤及癌旁正常组织为研究对象 ,探求DNA切除修复基因ERCC2 表达与人卵巢转移瘤发生、预后的关系。方法 分别取 1 9例手术卵巢转移瘤及癌旁正常组织各 1 0 0mg ,提取组织中的总RNA ,采用RT PCR的方法分析细胞中ERCC2 表达水平。结果 5例标本中 ,ERCC2 在卵巢转移瘤表达显著低于癌旁正常组织 ,其它 1 4例标本无明显差异。结论 ERCC2 在部分卵巢转移瘤病人中低表达可能是这些卵巢转移瘤病人恶变形成的基础 。