冠心病患者载脂蛋白E、血管紧张素转换酶联合基因型研究

目的 :研究中国人载脂蛋白E(ApoE)基因多态性及血管紧张素转换酶 (ACE)基因插入 /缺失 (I/D)多态性与冠心病的关联。方法 :分别用PCR -RFLP及PCR技术检测了 12 9例冠心病患者及 90例健康人ApoE ,ACE基因型。结果 :冠心病组ε3 / 4基因型及ε4等位基因频率显著高于对照组 ,ε3 / 3 基因型及ε3 等位基因频率则显著低于对照组 ;ACE各基因型及等位基因频率两组间无显著差异 ;在ε4携带情况下 ,不同ACE基因型冠心病危险度不同 ,DD型 >ID型 ,而Ⅱ型似有一定的保护作用。结论 :ε4等位基因是冠心病的遗传易患因子 ;ACE基因与冠心病发病无显著关联 ,但对ε4等位基因有一定的“修饰”作用。

快速检测视网膜色素变性视紫红质基因的方法学研究

建立高盐沉淀法提取视紫红质 (RHO)基因 DNA方法 ,并进行序列检测 ,结果显示正常人 RHO第 5外显子基因序列与 Nathans- Hogness报道的基因序列一致 ,核苷酸同源性达 10 0 %。该法与经典酚提取法相比 ,检测敏感性和特异性相当 ,而且操作简便 ,时间缩短数个小时 ,成本降低 5 0 % ,无环境污染 ,可作为经典酚提取法的替代方法在一般实验室开展。

冠心病患者肿瘤坏死因子β基因多态性研究

目的 :研究肿瘤坏死因子 - β(TNF- β)基因多态性与冠心病的关系。方法 :聚合酶链反应扩增 TNF-β第一内含子含有 10 6 9位核苷酸 A→ G多态位点的基因片段 ,Nco I内切酶进行限制性酶切反应。结果 :6 3例冠心病患者及 90例正常对照 TNF- β基因型及等位基因频率均无显著性差异 ,冠心病患者 *2 / 2基因型年龄低于 *1/ 2与*1/ 1基因型。结论 :TNF-β基因多态性与冠心病无关联 ,但不同

糖尿病周围神经病变患者血液流变学指标变化

对 78例糖尿病周围神经病变患者的血液流变学指标进行分析 ,发现该病患者发作时均有不同程度的改变 ;治疗前与治疗后比较 ,针刺法组患者血流变指标结果差异性显著 ( P<0 .0 1)

免疫化学方法显示感觉神经纤维

将兔脊神经感觉神经元中特有的蛋白作为抗原,免疫BALB/C小鼠;脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合。以HAT选择性培养液饲养杂交瘤细跑,ABC法检测,筛选出仪对感觉神经元起反应的Ⅱ6H杂交瘤细胞株。经3次克隆化后,获褂了较纯的细胞株。实验组用新西兰大白兔6只,戊巴比妥钠麻醉,手术暴露取脊神经根、神经干、肌支和皮支,作冰冻切片。以快速免疫染色法显示感觉神经纤维。光镜下观察,感觉神经纤维呈深染的阳性反应,而运动神经纤维和其它神经组织以及对照组均为阴性反应。实验结果表明,免疫染色技术可准确快速地显示神经干中的感觉神经纤维;按免疫染色的特征,可将功能相同的神经束准确对位吻合。

快速琼脂糖电泳分离CK—MM亚型及其临床应用价值的研究

作者用LHXC-100冷冻循环槽装置,在2℃循环水条件下提高电泳电压,显著缩短了CK-MM亚型电泳分离时间,可在两小时内报告结果。测定24例AMI患者血清CK-MM亚型变化,CK-MM_3/CK-MM_1比值在发病早期即已升高,其阳性出现时间早于总CK、CK-MB及其它酶学指标。用三用紫外灯代替荧光扫描仪观察CK-MM_3/CK-MM_1比值具有同样临床效果。

中国南通地区TT病毒ORF2基因的克隆及序列分析

用巢式聚合酶链反应 (nest PCR)的技术从南通地区某肝癌患者血清中检出输血传播病毒(TTV) ,并在PUC1 8上对其开放读码框 2 (ORF2 )基因进行了克隆。序列分析表明 ,该序列与国内外发表的TT病毒AB0 0 8394(日本株 )、AF0 791 73(中国株 )对应位置核苷酸同源性为 98%和 97% ,对 1 80例献血者及 62例各型肝病及 1 8例非甲～庚型肝炎血清进行检测 ,TT病毒阳性率在 9%～ 47%之间。

芯片检测HBV DNA多态性的临床意义

目的 :DNA芯片检测乙型肝炎病毒 (Hepatitis B Virus,HBV)基因前 C/ C区、C基因区启动子 (BCP)和P区等多个位点多态性。方法 :将多条寡核苷酸探针固定于芯片的特定位置 ,与 PCR扩增的 HBV基因相应区段杂交 ,酶呈色 ,根据特定位置上的杂交信号判定基因突变的类型。结果 :HBe Ag(+)和抗 HBe抗体 (+)两组患者中前 C/ C区变异的不同频率分别为慢性乙型肝炎患者 (Chronic hepatitis B,CHB) 2 5 %和 6 1% ,HBV无症状携带者 (Asymptomaticcarrier,ASC) 12 %和 5 5 % ,重症乙型肝炎 (Severe hepatitis B,SHB) 5 0 %和 5 8% ;BCP区变异的不同频率分别为 CHB2 0 %和 4 8% ,ASC11%和 4 5 % ,SH75 %和 75 %。 3例服用 lamivudine的患者半年后有 2例发生 P区变异 (YMDD→YIDD)。结论 :DNA芯片检测 HBV基因多态性具有较好的灵敏度和重复性 ,操作简便 ,易于临床推广应用 ;前 C/ C区和BCP区变异可能是 HBe Ag(- )患者 HBV感染的两大主要原因 ,且与肝炎慢性化。

DNA芯片检测乙型肝炎病毒基因多态性

目的:建立DNA芯片检测乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)基因多态性的研究方法并对实验条件进行优化。方法:设计多条寡核苷酸探针,在硅烷化芯片的特定位置上,用点样仪将探针固定,并与PCR扩增的HBV基因相应区段杂交,杂交结果影印至硝酸纤维素膜,经BCIP/NBT避光显色,用放大镜观察杂交信号呈暗紫色圆点,根据特定位置上杂交信号的有无和与之相应的探针序列来判定基因突变的类型。结果:通过1次杂交反应可检测HBV前C/C区(nt1896/1814)、BCP区(nt1762/1764)和P区(nt528/552)等多个位点的变异,与测序分析结果完全一致,具有较好的检测灵敏度和重复性。结论:DNA芯片检测HBV基因常见突变位点多态性,操作简便易行,技术要求不高,具有临床推广应用价值,而且可以方便地通过向寡核苷酸探针阵列中添加相应探针,扩大基因芯片的检测应用范围,为临床检测提供了新的方法。

TT病毒核酸和抗体在肝病患者中的检测及临床意义

采用聚合酶链反应 (PCR)和酶联免疫吸附试验 (EL ISA) ,分别检测 132例各型肝病患者和 12 0例献血员血清 TTV- DNA和抗 TTV- Ig G。结果两种方法的检出率有较大的差异。 PCR法的敏感度和重复性均优于EL ISA法。 TT病毒在肝病患者中的阳性率显著高于献血员 (P<0 .0 5 ) ,提示 TT病毒可能与肝脏疾病有相关性。

HEPES缓冲体系电泳分离CK-MM亚型

本法用自行设计的pH7.40HEPES缓冲液、1%琼脂糖凝胶电泳分离CK-MM亚型。HEPES缓冲液在CK最适pH较传统的巴比妥-HCl或巴比妥-Tris缓冲体系有更强的缓冲能力。本法在电泳过程中不需更换缓冲液,方法简便,不需特殊仪器和设备,适宜各类医院推广应用。用本法共测定97例各种心脏疾患者血清CK-MM_3/CK-MM_1比值,其中13例AMI早期患者比值均大于1,阳性率为100%。2例AMI在发病后4小时内抽血,CK、CK-MB、LDH、LDH同工酶尚属正常,CK-MM亚型比值已异常,说明本测定对AMI具有早期诊断价值。

不连续亲和电泳分离糖化血红蛋白及其影响因素的探讨

利用醋纤膜浸湿液与电泳缓冲液中亲和试剂、缓冲液离子强度的不连续分离糖化血红蛋白。醋纤膜浸湿液中的肝素及离子浓度分别为20mg/d1与20mmol/L,浸湿液置冰箱保存可反复使用。本法节省电泳试剂,其成本仅为原法的1/20;电泳分辨力显著改善;有较好的重复性,同一份样本进行16次测定的CV为4.9%;操作简便快速。

微量白蛋白尿反向乳凝试验及对孕妇的初步测定

微量白蛋白尿(MAU)测定有助于糖尿病肾病、高血压肾损害及妊娠高血压综合征(妊高征)的早期诊断。已报告的MAU检测方法有放射免疫法、固相酶联免疫吸附试验、激光散射比浊法、火箭免疫电泳和抑制胶乳凝集试验(I-LAT)。本文报告一种简便的半定量MAU反向免疫胶乳凝集试验(R-LAT)及在孕妇中的初步测定结果。材料与方法一、试剂按文献制备聚苯乙烯胶乳和人白蛋白抗体致敏的胶乳试剂(AHA-LAT)。人白蛋白抗血清系上海生物制品研究所产品。

外周血单个核细胞DNA不同抽提方法比较

用经典酚醇法、盐析法、碘化钾法、煮沸法提取外周血单个核细胞DNA ,比较这四种方法所获得的DNA模板对PCR检测肿瘤坏死因子 (TNF)的影响 ,结果显示除了煮沸法 ,其余三种方法提取的DNA均有较高的纯度和浓度 ,其中以碘化钾法操作最为简便可靠 ,适合临床推广应用。

肌型肌酸激酶MM亚型检测对早期急性心肌梗塞的诊断

应用改良的琼脂糖电泳法对24例AMI和15例心绞痛患者进行血清CK-MM亚型检测。结果表明,AMI患者发病后2小时CK-MM_3的百分率和CK-MM_3/CK-MM_1比值已明显增高,10小时达峰值(CK-MM_3/CK-MM_1比值为2.0±0.6),较其他酶学指标(CK、CK-MB、LDH,LD_1/LD_2,GOT)出现更早,更为敏感。与心绞痛组(CK-MM_3/CK-MM_1比值为0.15±0.07)比较,两者有显著差异(P<0.01)。提示在AMI发病后14小时内检测CK-MM亚型和CK-MM_3/CK-MM_1比值,对确定诊断有重要价值。

聚合酶链反应-微孔板杂交法检测输血传播病毒DNA

目的 建立聚合酶链反应 (PCR) 微孔板杂交检测TT病毒 (TTV)DNA的方法 ,探讨不同因素对方法敏感度和特异性的影响。方法 硫氰酸胍裂介异丙醇沉淀提取TTVDNA ,经PCR扩增 ,扩增产物上标记的生物素与包被在微孔板上的链霉亲和素结合 ,标记有荧光素的探针与产物杂交 ,再与酶标抗荧光素抗体结合 ,经底物显色。结果 在各种影响因素中 ,当NaOH浓度为0 3mol/L ,杂交时间 6 0min ,酶反应时间为 45min时 ,结果较好 ,洗板液以 pH7 4PBS T为最佳 ,本法测定敏感度明显优于套式扩增电泳法观察结果的方法 ,且无假阳性出现。 183例血清标本检测表明 ,TTV在正常人群、甲～庚型肝炎、非甲～庚型肝炎中的阳性率分别为 3 6 % ,2 0 3% ,2 8 1%。结论 本文用微孔板杂交酶呈色技术检测TTVDNAPCR产物 ,具有敏感、特异、快速 ,重复性良好 ,无溴乙锭污染等优点 ,可望取代电泳法 ,而作为TTVDNA的常规检测方法。

DNA芯片检测乙型肝炎病毒基因多态性

目的 建立DNA芯片检测乙型肝炎病毒 (hepatitisBvirus,HBV)基因多态性的研究方法并对实验条件进行优化。方法 设计多条寡核苷酸探针 ,在硅烷化芯片的特定位置上 ,用点样仪将探针固定 ,并与PCR扩增的HBV基因相应区段杂交 ,杂交结果影印至硝酸纤维素膜 ,经BCIP NBT避光显色 ,用放大镜观察杂交信号呈暗紫色圆点 ,根据特定位置上杂交信号的有无和与之相应的探针序列来判定基因突变的类型。结果 通过 1次杂交反应可检测HBV前C C区 (nt 1896 1814 )、BCP区 (nt1762 1764)和P区 (nt 52 8 552 )等多个位点的变异 ,与测序分析结果完全一致 ,具有较好的检测灵敏度和重复性。结论 DNA芯片检测HBV基因常见突变位点多态性 ,操作简便易行 ,技术要求不高 ,具有临床推广应用价值 ,而且可以方便地通过向寡核苷酸探针阵列中添加相应探针 ,扩大基因芯片的检测应用范围 。