类风湿性关节炎患者早期外周血单个核细胞Toll样受体2、4表达及意义

目的探讨类风湿性关节炎(RA)早期患者外周血单个核细胞(PBMC)Toll样受体(TLR)2、TLR4对其配体双糖链蛋白多糖(BGN)、脂多糖(LPS)的刺激反应性,阐明PBMC TLR2、TLR4在RA疾病早期中的作用。方法采用流式细胞术、实时荧光定量逆转录(RT)-聚合酶链反应(PCR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测BGN和LPS刺激前后,RA组和健康对照组外周血CD14+单核细胞TLR4+细胞频率、PBMC TLR2 mRNA和TLR4mRNA及上清液白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNFα)的含量变化。结果 RA早期患者TLR2 mRNA明显升高、TLR4 mRNA下降(P<0.01);经LPS刺激后,RA患者TLR4 mRNA升高3.50倍,而健康对照组下降到0.11倍;LPS和BGN促进了各组PBMC产生IL-6、TNFα,但RA早期患者组上升的倍数明显高于健康对照组。结论 PBMC TLR2、TLR4参与早期RA的发生、发展。

外周血胎盘蛋白-13、胎盘生长因子等指标预测子痫前期的临床价值

目的分析血管内皮生长因子(VEGF)165b、胎盘蛋白-13(PP-13)、胎盘生长因子(PIGF)、可溶性CD105淋巴细胞抗原(sEng)和可溶性血管内皮生长因子受体-1(sFlt-1)在子痫前期(PE)患者孕早期血清中的表达,探讨其预测PE发生的临床意义。方法收集67例无高血压健康孕妇和65例PE孕妇9～10周的外周血,采用ELISA法检测血清PP-13、PIGF、VEGF165b、sEng和sFlt-1的浓度。使用ROC曲线分析VEGF165b、PP-13和PIGF预测PE发生的灵敏度和特异性。结果孕妇孕9～10周,PE患者的外周血与健康孕妇比较,PP-13[(50.20±31.20)与(108.7±51.2)pg/mL]、PIGF[(58.64±18.01)与(86.19±16.78)pg/mL]、VEGF165b[(1.27±0.41)与(2.03±0.75)ng/mL],差异有统计学意义(P<0.05);sEng和sFlt-1差异无统计学意义(P>0.05)。ROC曲线结果显示孕9～10周,PP-13、PIGF中值倍(MoM)之和预测PE的发生,具有较高的灵敏度(96.0%)和特异性(96.3%)。结论孕早期联合检测PP-13、PIGF等指标对预测PE的发生有较好的临床价值。

儿童肺炎支原体感染者．Thl7／Treg的变化分析与临床意义

目的探讨外周血辅助性T细胞17型（helperTcelltype17，Thl7）和CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（RegulatoryTcells,Treg）在肺炎支原体感染儿童体内的变化及临床意义。方法肺炎支原体（mycoplasmapneumoniae，MP）感染组32例．分为普通肺炎组18例、肺炎合并肺外症状组14例；健康对照组26名。常规分离外周血单个核细胞，流式细胞术检测各组外周血Thl7细胞、Treg的表达频率；ELISA方法检测血清细胞因子IL-6、IL-17水平。结果1．MP感染组外周血Thl7细胞频率高于正常对照组（P〈0．01），肺外症状组血Thl7细胞频率水平高于普通肺炎组（P〈O．01）；MP感染组外周血Treg细胞表达频率低于正常对照组（P〈0．01），肺外症状组血Treg细胞频率低于普通肺炎组（P〈0．01）。2．MP感染组血清IL．6、IL．17水平高于正常对照组（P〈0．01）；肺外症状组血清IL-6、IL-17水平高于普通肺炎组（P〈0．01）。结论在儿童MP感染者体内存在Treg与Thl7细胞频率明显改变，并伴有炎症性细胞因子水平升高．提示Treg与Thl7细胞的频率异常在儿童MP感染的发病机制中起着重要的作用。

COPD急性加重期伴肺栓塞患者治疗的效果及血气指标变化情况

目的探讨低分子肝素用于慢性阻塞性肺疾病（COPD）急性加重期伴肺栓塞患者的临床效果及血气指标、D-二聚体水平的变化情况。方法选择2014年10至2015年10月如皋市人民医院住院治疗的COPD急性加重期伴肺栓塞患者62例作为研究对象,按随机数字表法分为观察组（31例）和对照组（31例）。两组患者均给予经鼻导管持续低流量吸氧、抗感染、支气管扩张剂、祛痰、平喘解痉及应用抗凝药物等常规治疗。对照组在常规治疗基础上应用肝素钠注射液3 000~5 000U静脉注射,然后以250U/kg,每12小时一次,;观察组在常规治疗基础上应用低分子肝素注射液4 100U皮下注射,每12小时一次;两组患者疗程均为1周;分别于3d后加用华法林片初始剂量2.5mg/d,重叠应用4~5d,根据凝血酶时间调节剂量。比较两组患者临床效果、治疗前后肺功能水平、血气指标、C反应蛋白（CRP）、D-二聚体、肺动脉压水平、缺损肺动脉段数变化情况,并记录两组患者不良反应发生情况。结果治疗后观察组总有效率（90.3%）明显高于对照组（75.8%）,差异有统计学意义（P〈0.05）;治疗后观察组肺功能水平、血气指标、CRP、D-二聚体、肺动脉压水平、缺损肺动脉段数改善程度均明显优于对照组,差异均有统计学意义（P〈0.05）;两组患者均发生不同程度出血不良症状,但差异无统计学意义（P〉0.05）。结论低分子肝素能有效提高COPD急性加重期伴肺栓塞患者的临床效果,显著降低D-二聚体水平,改善血气指标水平及血液高凝状态。

HBsAg体外冲击的慢性乙肝患者树突状细胞对HBV特异性CTL的诱导作用

目的 :研究 HBs Ag冲击的慢性乙肝患者单核细胞来源的树突状细胞 (DCs)体外对 HBV特异性 CTL的诱导作用 ,初步探讨诱导特异性抗 HBV细胞免疫的途径。方法 :分离慢性乙肝患者外周血单核细胞 ,以 GM-CSF + IL -4 + TNF -α培养诱导DCs,加入 HBs Ag冲击以诱导 HBV特异性 DCs。采用 LDH法检测 DC诱导的患者外周血 T细胞对 Hep G2 2 .2 .15 (转染 HBVDNA)、Hep G2肝癌细胞株及 K5 62白血病细胞株的细胞毒作用。结果 :HBs Ag冲击的 DC可有效地诱导自体 CTL 对转 HBV基因的Hep G2 2 .2 .15细胞高效特异性杀伤作用 (P<0 .0 1)。结论 :慢性乙型肝炎患者单核细胞来源的 DCs经 HBs Ag抗原冲击后 ,可有效地诱导对 HBV特异性反应的

CDK11p58在H_2O_2诱导PC12细胞凋亡中表达及意义

目的:观察CDK11p58在H2O2诱导的PC12细胞凋亡中的表达及机制。方法:以H2O2处理PC12细胞和(或)过表达CDK11p58及其激酶突变的载体后,蛋白质免疫印迹观察CDK11p58的表达,流式细胞分析术分析PC12细胞的凋亡。结果:将CDK11p58表达载体转入PC12细胞中,在予H2O2处理细胞后,过表达CDK11p58的PC12细胞凋亡较未过表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。在转染双突变CDK11p58表达质粒PC12细胞中,H2O2诱导细胞凋亡较对照组无增高,但较转染全长的CDK11p58的表达质粒的细胞组有显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:CDK11p58可以促进H2O2诱导的PC12细胞的凋亡。

白细胞介素12诱导肝癌肿瘤浸润淋巴细胞的临床应用

目的 :对 IL -12 + IL -2培养的肝癌肿瘤浸润淋巴细胞 (TIL)与 IL-2诱导的 TIL作对照研究观察 TIL的特异性杀伤力、增殖能力、细胞因子的改变及临床疗效。方法 :将手术切除的原发性肝癌进行体外分离 ,分别用含 IL -2的培养液和含 IL-12 +IL-2的培养液培养 ,诱导 TIL的生长。培养 10～ 14天测定细胞杀伤率、细胞因子和增殖能力 ,待细胞扩增达 10 8～ 9· ml- 1 时进行回输 ,随访观察临床疗效。结果 :(1) IL-12 + IL -2组 TIL对自体肝癌细胞的细胞杀伤率比 IL -2组明显增高 (P<0 .0 1) ;(2 ) IL -12+ IL -2组 TIL比 IL-2组扩增能力明显增强 (P<0 .0 5 )。 (3 ) IL-12 + IL -2组较 IL-2组细胞因子γ干扰素 (IFN-γ)和肿瘤坏死因子 α(TNF-α)水平明显增高 (P<0 .0 5 )。 (4 ) TIL 回输后 IL-12 + IL-2组与 IL-2组 CD3+、CD4 +、CD8+均升高 ,以 CD3+、CD8+ 升高为主。与输注前比较差异均有显著性。 IL-12 + IL-2组与 IL-2组间比较 ,前者 CD3+ 、CD8+ 、CD56 + 上明显高于后者 ,差异显著 (P<0 .0 5 )。 (5 )患者的临床症状改善明显。 (6) IL-12 + IL-2组 1年、3年、5年生存率与 IL-2组 TIL回输肝癌患者对比差异均显著且复发率降低。结论 :白介素 12诱导肝癌 TIL可明显增强

肥胖对小鼠乙肝疫苗免疫效果影响研究

目的通过检测肥胖小鼠的乙肝疫苗接种效果和免疫系统功能,探讨肥胖影响乙肝疫苗预防效果的免疫学机制。方法对WNIN/Ob肥胖小鼠(突变型)和正常体重小鼠(野生型)接种4μg乙肝疫苗(3,4月),第二针接种7d后,流式细胞检测脾脏细胞中总T细胞及T细胞亚群的比例,MTT法检测脾脏淋巴细胞对刀豆球蛋白A(ConA)、乙肝表面抗原(HBsAg)的增殖试验,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清中抗-HBs浓度。脂多糖(LPS)刺激腹腔巨噬细胞,上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、一氧化氮(NO)浓度分别用ELISA和Griess法检测。结果与正常组相比,肥胖组小鼠脾脏中总T细胞和Th细胞比例下降(P<0.05)、血清抗-HBs降低(P<0.05)、脾脏淋巴细胞对ConA、HBsAg的增殖率都降低(P<0.05)。腹腔巨噬细胞上清液中NO、TNF-α浓度差异有统计学意义(P<0.05)。结论肥胖小鼠先天性免疫和特异性免疫功能均受损,导致对乙肝疫苗免疫应答降低。

活化的类风湿关节炎患者外周血单个核细胞Toll样受体4诱导Th17细胞分化

目的研究类风湿关节炎（RA）患者外周血单个核细胞（PBMCs）Toll样受体4（TLR4）通过诱导Th17细胞分化参与RA疾病发生发展的意义。方法采集22例RA患者和20名健康对照外周血，流式细胞术检测Th17细胞频率，脂多糖刺激PBMCs2d，实时荧光定量聚合酶链反应（RT—qPCR）检测PBMCsTLR4mRNA水平，酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测上清液白细胞介素（IL）-6、肿瘤坏死因子（TNF）-α的含量。收集上清液与CD4＋脐带血单个核细胞（CBMCs）培养3d，RT—qPCR检测CBMCsIL-17mRNA水平、EHSA检测上清液IL—17含量。统计学处理采用成组t检验。结果与健康对照组比较，RA患者Th17细胞频率[（0．53±0．14）％与（1．57±0．68）％]、TLR4mRNA显著升高（P均〈0．01）；PBMCs经脂多糖刺激后，RA患者TLR4mRNA升高3．5倍，而健康对照组下降到0．11倍；RA患者PBMCs产生的IL-6、TNF-α较健康对照组明显增加（P〈0．01）；RA患者PBMCs上清液诱导CD4＋CBMCsIL-17mRNA水平、IL-17含量与健康对照组相比均显著升高（P〈0．01）；而未经脂多糖刺激，2组差异无统计学意义（P〉0．05）。结论RA患者PBMCs的TLR4表达及对脂多糖的刺激的反应性增加，且具有较强的诱导Th17细胞分化能力。

肺炎支原体感染儿童血外周血辅助性T细胞17型和白细胞介素-17变化及其临床意义

目的探讨外周血辅助性T细胞(Th)17型和白细胞介素(IL)-17在肺炎支原体(MP)急性感染儿童体内变化及其临床意义。方法选择2009年6月至2010年12月在南通市第一人民医院儿科接受住院治疗并确诊为肺炎支原体肺炎(MPP)的32例患儿为研究对象,并纳入MPP组,平均年龄为(9.3±2.5)岁。将其进一步按照感染症状分为MPP亚组1(普通肺炎症状,n=18)和MPP亚组2(肺炎合并肺外症状,n=14);选择同期于该院门诊行健康体检儿童纳入对照组(n=26)(本研究遵循的程序符合本院人体试验委员会所制定的伦理学标准,得到该委员会批准,分组征得受试对象监护人的知情同意,并与之签署临床研究知情同意书)。MPP组与对照组、MPP亚组1与MPP亚组2受试者的年龄、性别等比较,差异无统计学意义(P>0.05)。常规分离外周血单核细胞(PBMC),采用流式细胞术(FACS)检测各组外周血Th17;酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清细胞因子IL-17水平。结果①MPP亚组1与MPP亚组2的外周血Th17频率均高于对照组[(2.05±0.65)%vs.(1.21±0.36)%,(2.98±0.72)%vs.(1.21±0.36)%;P<0.01];MPP亚组2外周血Th17频率均高于MPP亚组1[(2.98±0.72)%vs.(2.05±0.65)%,P<0.01]。②MPP亚组1与MPP亚组2血清IL-17水平均高于对照组[(11.62±5.37)pg/mLvs.(6.45±1.62)pg/mL,(17.34±7.45)pg/mLvs.(6.45±1.62)pg/mL;P<0.01];MPP亚组2血清IL-17水平高于MPP亚组1[(11.62±5.37)pg/mLvs.(17.34±7.45)pg/mL;P<0.01]。结论 MP感染患儿体内Th17频率明显改变,且伴炎症性细胞因子IL-17水平升高,Th17频率异常在MP感染的发病机制中起重要作用。

肝癌术后应用白介素12及白介素2诱导的自体肿瘤浸润淋巴细胞的临床观察

目的观察肝癌患者术后单用白细胞介素2（IL-2）培养和IL-12＋IL-2培养的自体肝癌肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）输注后，其特异性杀伤力、增殖能力、细胞因子的改变以及细胞免疫功能和临床症状的变化。方法将手术切除的原发性肝癌组织进行体外分离，分别用含IL-2的培养液和含IL-12＋IL-2的培养液培养，诱导TIL的生长。培养10～14d测定细胞杀伤率、细胞因子和增殖能力，待细胞扩增达10^8-9／ml时进行输注，随访观察临床疗效。结果①输注IL-12＋IL-2组TIL对自体肝癌细胞的细胞杀伤率、细胞扩增能力、细胞因子IFN-γ和TNF-α水平均比IL-2组明显增高；②输注IL-12＋IL-2诱导的TIL组与IL-2诱导的TIL组输注后CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋均升高，以CD3^＋、CD8^＋升高为主。与输注前比较，差异均有统计学意义；IL-12＋IL-2组与IL-2组间比较，前者CD3^＋、CD8^＋、CD56^＋上明显高于后者，差异均有统计学意义。③输注后两组患者的临床症状均比输注前改善明显，但两组间比较无明显差异。④接受TIL自体输注治疗的患者，其1年、3年、5年生存率均有所提高，IL-12＋IL-2组与IL-2组与同期非TIL治疗组相比较（P〈0．05）。结论白介素12诱导肝癌TIL可明显增强TIL细胞的特异性细胞毒作用且增殖能力明显增强。肝癌患者术后输注IL-12＋IL-2诱导的自体肝癌肿瘤浸润淋巴细胞比输注IL-2诱导的肝癌肿瘤浸润淋巴细胞能更有效地提高肝癌患者机体免疫机能，延长1年生存期，减少复发。

NSE和HMGB1在妊娠高血压病产妇的新生儿脑损伤中的诊断价值

目的探讨神经元烯醇化酶(NSE)和高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在妊娠高血压病(PIH)产妇的新生儿脑损伤中的诊断价值。方法依据PIH产妇的新生儿神经行为(NBNA)评分,120例新生儿分为脑损伤组(A组,NBNA≤35分,48例)和非脑损伤组(B组,NBNA>35分,72例);同时选取健康产妇的新生儿20例为对照(C)组。采用免疫组化方法检测新生儿脐带组织中的NSE和HMGB1表达,ELISA检测脐带血中NSE和HMGB1水平,分析其与NBNA评分的相关性。结果三组脐带组织中NSE阳性细胞比例相仿(P>0.05);A、B和C组脐带组织HMGB1阳性细胞比例依次为(53.44±3.20)%、(40.16±2.37)%和(20.24±0.90)%,差异有统计学意义(P<0.05)。A、B组脐带血NSE、HMGB1水平均高于C组,且A组高于B组(P<0.05)。A、B组新生儿脐带血NSE、HMGB1水平与NBNA评分均呈负相关(r=-0.69、-0.57,P<0.05),且脐带血NSE水平与HMGB1水平呈正相关(r=0.66,P<0.05)。结论 NSE和HMGB1是PIH产妇新生儿脑损伤早期诊断的可靠指标。