新型荧光薄层层析-分光光度计测定细胞内GCS酶活性

目的:通过建立一种新型的荧光薄层层析-分光光度法,精确而直接测定细胞内葡萄糖神经酰胺合酶GCS的活性,以评价其对耐药性肿瘤细胞的作用。方法:加入不同剂量的含荧光的NBD-C6-Ceramide,运用荧光薄层层析-分光光度法测定不同反应时间下人乳腺癌细胞MCF-7-AdrR中,葡萄糖神经酰胺(glucosylxeramide,GlcCer)和神经酰胺(ceramide,Cer)含量,计算两者的比值大小反映GCS酶活性情况,放射性酶学测定作为对照。Western-blot及免疫荧光分析MCF-7-AdrR及其转化细胞(MCF-7-adrR/GCS及MCF-7-adrR/asGCS)中GCS与P-糖蛋白(P-gp)的蛋白表达关系。结果:研究表明5μmol/L NBD-Cer是细胞内神经酰胺糖基化作用的最佳浓度,糖基化作用随时间延长而增强,此方法精确测定MCF-7-AdrR各细胞及其它耐药型细胞中的GCS酶活性,MCF-7-adrR与MCF-7-adrR/GCS较药物敏感组MCF-7的糖基化作用(GC/Cer)明显增强(P均<0.01),而在MCF-7-adrR/asGCS中糖基化作用急剧下降(P<0.01)。放射性酶学测定结果与之相符。Western-blot及免疫荧光显示GCS表达与耐药标志物P-gp表达在MCF-7-AdrR各细胞中呈明显相关。结论:不同于传统的同位素酶学测定,这种新型荧光薄层层析-分光光度法,是测定细胞内神经酰胺糖基化作用的一种简单易行、重复性好的实验方法,为进一步应用于耐药性肿瘤的体内实验奠定基础。

肌钙蛋白T迷你基因的构建及其心衰模型表达谱系研究

目的：研究肌钙蛋白T（cardiac troponin T, cTnT）基因外显子5（exon 5, E5）的可变剪接及其在真核细胞和小鼠心力衰竭（心衰）模型的表达情况。方法：通过分段PCR构建包含cTnT外显子2-6及相应的内含子的基因片段，连接至真核表达载体中，转染真核细胞HEK293FT，观察其在细胞的表达和在体心肌中的表达是否有异同；建立小鼠心衰模型，用免疫组织化学法和PCR研究cTnT E5的表达情况。结果：cTnT迷你基因在HEK293FT细胞内表达出3个剪接异构体，分别是1个cTnT E5＋和2个cTnT E5-；小鼠心脏内主要表达3个剪接异构体，组成情况和迷你基因表达产物相似；小鼠心衰模型组的cTnT E5＋比例增高。结论：成功构建cTnT迷你基因，可用于进一步研究cTnT E5的可变剪接表达调控；小鼠心衰模型显示cTnT E5的表达和心肌功能有一定联系。

监测全心舒张末期容积与胸腔内血容积在急性心力衰竭患者治疗中的意义

目的:评价全心舒张末期容积(global end diastolic volume index,GEDVi)以及胸腔内血容积(intrathoracic blood volume index,ITBVi)在急性心力衰竭患者治疗过程中的价值和意义。方法 :对23例急性心力衰竭患者的脑利钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)、GEDVi以及ITBVi进行回顾性分析,观察其治疗前后的变化,同时对其变化进行相关性分析。结果:患者入院治疗1周后BNP、GEDVi以及ITBVi均明显下降(P<0.001),且BNP的变化与GEDVi及ITBVI两者的变化值呈正相关。结论:监测GEDVi和ITBVi对急性心力衰竭患者的治疗效果及评价预后有一定的指导意义。

rhBNP对重症心力衰竭患者血清NT-proBNP和cTnT的影响

目的探讨重组人脑利钠肽(rhBNP)对重症心力衰竭患者血清氨基末端脑利钠肽前体(NT-proBNP)和心肌钙蛋白T(cTnT)的影响。方法 21例重症心力衰竭患者行rhBNP治疗,观察治疗前后心率、血压、24-h尿量、血清NT-proBNP和cTnT含量的变化。结果与治疗前相比,治疗后24-h尿量增多(P<0.01),心率、收缩压及血清cTnT水平下降(P<0.01或P<0.05),NT-proBNP水平无明显改变(P>0.05)。血清NT-proBNP与cTnT水平呈正相关(r=0.735,P<0.01)。结论rhBNP对重症心力衰竭患者有治疗作用,可在一定程度上改善心肌损伤程度。