CXCR4、hTERT表达与胶质瘤微血管密度及预后的关系

目的:探讨趋化因子受体4(CXCR4)、端粒酶逆转录酶(hTERT)在胶质瘤中的表达与肿瘤微血管密度(MVD)及预后的关系。方法:应用免疫组织化学技术检测156例胶质瘤中CXCR4及hTERT的表达,以血管内皮生长因子(VEGF)标记检测微血管密度,分析CXCR4、hTERT表达及MVD与生存时间的关系。结果:①CXCR4、hTERT总阳性率分别为53.8%(84/156)、50.6%(79/156);Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤中CXCR4的阳性率分别为30.8%(16/52)、56.5%(39/69)、82.9%(29/35),hTERT的阳性率分别为26.9%(14/52)、53.6%(37/69)、80.0%(28/35),CXCR4和hTERT在不同级别胶质瘤中的表达差异有统计学意义(P<0.01);②156例胶质瘤中MVD均值为44.17±13.43,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级MVD均值分别为29.85±4.34、50.12±17.80、52.53±18.16(P<0.01);③Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤患者术后中位生存时间分别为30.2、11.7、9.8个月;CXCR4、hTERT阳性表达组中MVD≥44.17的病例术后中位生存时间明显短于阴性表达组及MVD<44.17的病例(P<0.01)。结论:CXCR4、hTERT的高表达可促进胶质瘤血管生成和侵袭性生长,三者联合检测有助于预后评估。

自制组织微阵列仪及其在肝癌分子病理研究中的应用

目的自主研发制备一种新型的结构合理、使用方便的石蜡组织微阵列手动装置,以解决现有的石蜡组织芯片工具由于结构、组合等原因在实验、研究工作中存在使用不便等问题。方法自主研发制备石蜡组织微阵列手动装置,并利用此装置将62例肝癌组织及匹配的癌旁组织标本制备组织芯片,并对其进行HE染色及AFP、CD34、Ki67和HIF alpha等蛋白质的免疫组织化学实验,分析肝癌组织及癌旁组织的表达差异性。结果对自制组织芯片进行多种蛋白的免疫组织化学检测和分子病理分析结果显示,染色清晰完整;统计分析显示,Ki67和HIF alpha在肝癌组织中的表达量显著高于癌旁组织(P=0.0003,P=0.0144),与文献的报道一致。结论本文自制组织微阵列仪具有较高的实用价值,是生物化学药物分子机制和病理研究应用的有效工具。

肝癌中TLR3信号分子与自噬相关基因表达的相关性及临床意义

目的 :研究肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中Toll样受体3(Toll-like receptor 3,TLR3)及信号分子含TIR结构域的转接蛋白(TIR-domain-containing adaptor protein including IFN-β,TRIF)表达与细胞自噬相关蛋白Beclin1和LC3表达的相关性及临床意义,并探讨相关机制。方法:收集与随访101例HCC病例,构建肝组织芯片。HE染色判断HCC的组织分化,免疫组化染色检测HCC组织中Ki-67、TLR3、TRIF、LC3和Beclin l的表达,应用TUNEL方法检测肿瘤细胞凋亡信号。统计学分析其临床病理因素和预后。结果:本组HCC中TLR3和TRIF表达呈正相关(ρ=0.640,P<0.001),其高表达分别与肿瘤Hbs Ag感染、硬化背景、细胞凋亡指数(apoptosis index,AI)及患者5年总生存率呈正相关,与肿瘤细胞增殖、血管浸润、Edmondson分级和TNM分期呈负相关。Beclin1和LC3表达呈显著正相关(ρ=0.587,P<0.001),两者高表达分别与肿瘤脉管浸润、Edmondson分级、TNM分期、肿瘤细胞增殖呈正相关,与AI和预后呈负相关。并且TLR3、TRIF分别与LC3和Beclin1的表达呈负相关(P均<0.001)。结论:HCC中TLR3及其信号分子TRIF表达,细胞自噬相关基因Beclin1和LC3的表达分别通过调控细胞增殖、凋亡和自噬来影响肿瘤的生物学行为和预后。HCC组织中Beclin1介导的自噬途径与TLR3信号凋亡通路存在交叉,两条通路异常可能是HCC发生、进展的机制之一。

慢病毒介导的siRNA沉默Foxp1对肝癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的探讨Foxp1对肝癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法体外合成干扰Foxp1功能的小核酸片段(siRNA Foxp1),通过重组技术将其插入到慢病毒三质粒系统的转移质粒中,利用包装细胞(293T)将三质粒系统组装为完整的反转录慢病毒载体(lenti-pLL3.7-Foxp1-siRNA),感染高表达Foxp1的肝癌细胞株。同时构建不含有Foxp1-siRNA序列的直接三质粒系统包装的空病毒载体对照组。荧光显微镜观察慢病毒载体介导siRNA感染细胞的效果。Western blot和Real-time QPCR(RTQPCR)分别检测肝癌细胞中Foxp1蛋白表达和mRNA水平。CCK-8实验、流式细胞仪、细胞划痕愈合实验和侵袭小室实验分别检测细胞增殖、凋亡和迁移的改变。结果与对照组细胞比较,肝癌细胞感染lenti-pLL3.7-Foxp1-siRNA后,细胞中Foxp1蛋白和mRNA表达显著下降,增殖活性受到显著抑制,细胞凋亡明显增加,在二维空间和三维空间的迁移细胞显著减少(均P<0.01)。结论 Foxp1作为一种多功能转录因子,促进肝癌细胞的增殖和迁移,抑制其凋亡。

肿瘤相关基因NET-1的研究进展

NET-1(tspan1)是新近被证实的四次跨膜蛋白超家族(transmembrane 4 superfamily,TM4SF)的成员之一。作为一种肿瘤相关基因,与肿瘤细胞的增殖、迁移、内吞作用和诱导血管形成密切相关。NET-1蛋白的异常表达可能是引起和维持癌恶性表型的原因之一,其表达水平对癌的预后具有评估价值,该基因可能成为肿瘤基因治疗的靶点。

靶向VEGF的shRNA对皮肤鳞癌A431细胞的作用

目的在皮肤鳞癌细胞(A431)中下调VEGF mRNA和VEGF蛋白的表达,观察其对A431细胞增殖、迁移和黏附的影响。方法构建psVEGF-shRNA真核表达质粒(psilencer-VEGF1-shRNA,VEGF-s1;psilencer-VEGF2-shR-NA,VEGF-s2)干预A431细胞,同时构建含随机靶序列的阴性对照表达质粒(psilencer-Target-off-shRNA,T-off)。RT-QPCR,Western blot和ELISA检测细胞内VEGFmRNA和蛋白表达;CCK-8法检测细胞活性;流式细胞仪检测细胞周期百分比与细胞凋亡;划痕试验和Transwell小室试验检测细胞二维、三维空间的迁移能力;FN黏附试验检测细胞黏附潜能。结果 A431细胞转染psVEGF-shRNA后活性降低,细胞周期发生阻滞,与对照组相比细胞比率显著增加,在G1期明显降低,在S期伴细胞调亡增加。细胞内VEGFmRNA和VEGF蛋白表达下降,细胞迁移和黏附潜能力均受到抑制(P<0.05)。结论 VEGF是人皮肤鳞癌A431细胞生长相关的重要基因,干扰VEGF基因能有效抑制A431细胞的增殖、迁移和黏附。

组胺对皮肤鳞状细胞癌细胞生长和迁移的影响

目的：探讨组胺处理体外培养的皮肤鳞状细胞癌细胞（A431）对其生物学行为的影响。方法：用细胞活力（CCK一8）法检测不同浓度组胺处理A431细胞的活性，筛选用于本研究的有效组胺浓度。流式细胞仪检测癌细胞增殖周期细胞百分比与细胞增殖指数；划痕、Transwell小室和黏附实验分别检测癌细胞的迁移、侵袭和黏附潜能。结果：与未处理的对照组相比，组胺处理A431细胞在48h出现显著抑制作用，呈浓度和时间依赖关系。组胺10～4mol／L组在48h和72h处理癌细胞活力比其他浓度组更显著（均P〈0．01）。组胺10—4mol／L组处理后细胞在G1期比率显著增加，在S期比率明显降低（均P〈0．05），并抑制A431细胞的迁移、侵袭和黏附（均P〈0．05）。结论：组胺能有效抑制A431细胞增殖、迁移、侵袭和黏附的生物学行为。

人脑星形细胞瘤中VEGF和NET-1蛋白的表达及其与瘤内血管生长、肿瘤分级的相关性

目的研究NET-1蛋白、血管内皮生长因子(VEGF)在脑星形细胞瘤中的表达及其与肿瘤血管的临床病理特征的相关性。方法采用免疫组织化学技术检测脑星形细胞瘤活检标本中NET-1和VEGF的表达,单因素分析与肿瘤中微血管密度(MVD)的相关性,Spearman分析指标之间的相关性。结果 NET-1和VEGF在人脑星形细胞瘤表达的阳性率分别为63.33%(38/60)、58.33%(35/60),两者在肿瘤病变低级别组与高级别组间的表达差异有统计学意义(均P<0.05);MVD均数在NET-1和VEGF不同表达强度的组间差异有统计学意义(均P<0.05)。结论 NET-1和VEGF在人脑星形细胞瘤的高级别肿瘤中的表达显著高于低级别肿瘤,并与肿瘤中的MVD成显著相关性,因此对脑星形细胞瘤的分级具有潜在的诊断价值。