病理生理学多媒体教学思路的创新设计

本文从三个角度探讨了病理生理学多媒体教学的创新思路。

苦参素对实验性肝癌PCNA、cyclinD1、CDK4表达的影响

目的 :研究苦参素对 2 乙酰氨基芴 (2 AAF)诱发大鼠实验性肝癌的防治作用 ,并探讨其抑制肝癌细胞增殖的机制。方法 :以 2 AAF喂饲SD大鼠制备肝癌模型。给予不同剂量的苦参素腹腔注射 ,观察肿瘤生成状况 ;免疫组化方法检测增殖细胞核抗原 (PCNA)蛋白的表达 ;RT PCR检测细胞周期素D1(cyclinD1)、细胞周期蛋白依赖激酶 4 (CDK4 )mR NA的表达。结果 :苦参素各防治组大鼠肝表面癌结节数明显低于模型组 ,预防组肝表面结节数最少。苦参素各预防治疗组PCNA和cyclinD1、CDK4的表达显著低于模型组 (P <0 .0 1)。结论 :苦参素有预防或延缓 2 AAF诱发大鼠肝癌发生的作用 ,其机制可能通过抑制cyclinD1、CDK4mRNA和PCNA蛋白的表达 ,从而诱导细胞周期阻滞 ,抑制肝癌细胞过度增殖。

苦参素对实验性肝纤维化的防治作用及对MMP-2表达的影响

目的观察苦参素预防及治疗大鼠肝纤维化的疗效并探讨其作用机制。方法采用CCl4诱导大鼠肝纤维化模型,SD大鼠28只,随机分为4组正常对照组、模型对照组、苦参素预防组、苦参素治疗组。实验10周末,测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆汁酸(TBA)及谷氨酸转移酶(GGT);光镜、电镜观察肝细胞结构和肝纤维化程度;RTPCR和蛋白酶谱法检测肝组织中MMP2mRNA、MMP2蛋白的表达。结果苦参素预防与治疗给药均能明显降低CCl4诱导的肝纤维化大鼠血清ALT、AST、TBA及GGT水平(P<0.05,P<0.01)。苦参素预防组、治疗组大鼠胶原纤维沉积明显减轻,假小叶结构明显减少。苦参素预防组、治疗组肝细胞结构接近正常,Disse间隙、肝细胞内胶原纤维明显减少,且苦参素预防组肝纤维化程度轻于治疗组。苦参素预防组、治疗组肝组织中MMP2mRNA、MMP2活性蛋白的表达显著低于模型组(P<0.05,P<0.01)。结论苦参素对CCl4诱导的肝纤维化有预防及治疗作用,其部分机制为通过减少MMP2mRNA、MMP2活性蛋白的表达,促进细胞外基质(ECM)的降解,抑制ECM沉积,从而减轻或逆转肝纤维化。

手术应激与免疫抑制

手术前后时期的心理应激和生理应激均可抑制细胞免疫功能,主要表现为T淋巴细胞和自然杀伤(natural killer,NK)细胞的数量减少和活性减弱。手术创伤越大,对免疫的抑制作用越强,因而对手术后的痊愈有明显影响。一般而言,手术应激所致的免疫抑制可以恢复,恢复的时间主要取决于手术创伤的大小。目前认为,手术引起免疫抑制的机制主要与下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴、交感神经系统、细胞因子、阿片肽和T细胞信号分子有关。选用某些不具有免疫抑制作用的止痛药物,以及蛋白酶抑制剂,可以防治手术应激所致的免疫抑制作用。

免疫细胞内源性儿茶酚胺的免疫调节作用(英文)

机体内儿茶酚胺(catecholamines,CAs)包括去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)、肾上腺素(epinephrine,E)和多巴胺(dopamine,DA)。CAs由神经元和内分泌细胞合成和分泌,其主要功能是调节心血管、呼吸和消化等内脏活动。近三十年来的研究说明,CAs也参与调控机体的免疫功能,但CAs的这种免疫调节作用一般视为神经和内分泌系统调节的介导作用。然而,近年来的研究发现,免疫细胞也能合成CAs,这是对传统观念的一种补充和提高。免疫细胞内存在经典的CAs代谢途径,既有合成CAs的酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)又有降解CAs的单胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)和儿茶酚氧化甲基移位酶(catechol-O-methyl transferase,COMT)。免疫细胞合成的内源性CAs可以调控细胞的增殖、分化、凋亡和细胞因子生成等多种免疫功能。CAs的这些作用可能主要通过自分泌或旁分泌途径作用于免疫细胞上相应受体和细胞内环磷酸腺许(cyclic AMP,cAMP)实现。细胞内氧化应激机制可能也参与免疫细胞内源性CAs的免疫调节作用。此外,一些自身免疫性疾病如多发性硬化、风湿性关节炎可能也与免疫细胞内CAs的代谢异常有关。上述发现不仅为免疫系统有可能成为除神经和内分泌系统以外的第三个CA能系统提供了证据,而且为免疫系统内源性CAs的功能意义拓展了认识。

乙酰胆碱对自然杀伤细胞活性的影响

目的:观察乙酰胆碱(ACh)对自然杀伤(NK)细胞活性的影响,并初步探讨其作用的受体机制.方法:根据不同的实验目的,选择ACh、胆碱能受体激动剂和拮抗剂分别作用于NK细胞,以乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)自然释放法检测不同实验条件下NK细胞杀伤肿瘤靶细胞(Yac)的活性.结果:ACh、M受体激动剂毛果芸香碱和N受体激动剂烟碱在10-10～10-6mol/L浓度范围内都能显著抑制NK细胞杀伤肿瘤细胞的活性.M受体拮抗剂阿托品(10-8和10-7mol/L)能完全阻断同浓度ACh抑制NK细胞活性的作用;但N受体拮抗剂筒箭毒碱(10-8和10-7mol/L)不能阻断同浓度ACh抑制NK细胞活性的作用.结论:ACh可抑制NK细胞对肿瘤细胞的杀伤作用,此作用主要由淋巴细胞上的M受体和N1受体介导.

小脑顶核损毁对淋巴细胞功能的影响

目的:研究小脑顶核对淋巴细胞功能的调节作用,并初步探讨介导这种调节的中枢途径。方法:用海人酸(KA)毁损大鼠双侧小脑顶核,于术后第8d,取动物肠系膜淋巴结细胞和脾脏自然杀伤(NK)细胞进行体外培养,分别用四甲基偶氮唑(MTT)比色法检测由刀豆蛋白A(ConA)诱导的淋巴细胞的增殖反应,用流式细胞术测定NK细胞杀伤YAC-1肿瘤细胞的活性。同时用高效液相色谱法检测下丘脑中兴奋性神经递质谷氨酸的含量。结果:小脑双侧顶核注入KA后的第8d,小脑切片经Nissl染色,可见顶核内神经元胞体被有效破坏。此时,淋巴细胞对ConA诱导的增殖反应较双侧顶核注入生理盐水的对照组明显增强;而且NK细胞对YAC-1靶细胞的杀伤活性也明显高于对照组;同时下丘脑中谷氨酸含量较对照组明显减少。结论:小脑双侧顶核毁损可导致T和NK淋巴细胞功能明显增强,且下丘脑中谷氨酸含量显著下降,提示小脑顶核对淋巴细胞功能具有调节作用,小脑-下丘脑的谷氨酸能神经投射可能介导小脑顶核的免疫调节作用。

白介素-6保护小脑颗粒神经元抗谷氨酸的神经毒性作用

目的:探讨白介素-6(IL-6)对谷氨酸诱导的神经元损伤的防治作用及其作用机制。方法:用IL-6慢性预处理培养的小脑颗粒神经元,然后后用谷氨酸急性刺激小脑颗粒神经元。用噻唑兰(MTT)比色法和末端脱氧核苷酸转移酶介导的原位缺口末端标记(TUNEL)法分别观察神经元的功能和凋亡的变化;用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)和逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法分别检测神经元内Ca2+浓度的动态变化和IL-6信号转导蛋白gp130 mRNA的表达。结果:IL-6(2.5、5和10 ng/ml)慢性预处理培养的小脑颗粒神经元,可浓度依赖性地改善谷氨酸诱导的神经元活性降低;并可明显减少谷氨酸诱导的神经元凋亡;还可显著抑制谷氨酸激发的神经元内Ca2+超载。此外,经IL-6慢性预处理的小脑颗粒神经元表达gp130 mRNA明显低于未经IL-6预处理的神经元。结论:IL-6能保护神经元抵抗由谷氨酸诱导的兴奋毒性作用,IL-6的这种神经保护机制可能与它抑制神经元内Ca2+超载密切相关,而且可能由gp130细胞内信号转导途径介导。

脑益康对阿尔茨海默病模型小鼠学习记忆的影响

目的 :观察脑益康对阿尔茨海默病 (Alzhei mer’sdisease ,AD)模型小鼠学习记忆的影响 ,并探讨其改善学习记忆的机制。方法 :采用D 半乳糖 (D Gal)和亚硝酸钠 (NaNO2 )腹腔注射建立小鼠AD模型 ,通过迷宫刺激器和水迷宫实验检测小鼠学习记忆能力 ;生化方法检测小鼠脑组织内超氧化物歧化酶 (SOD)活性和丙二醛 (MDA)含量 ;透射电镜观察小鼠海马神经细胞的超微结构。结果 :模型对照组小鼠学习记忆能力下降 ,SOD活性降低 ,MDA含量升高 ;而与模型对照组比较 ,脑益康小、中、大剂量组(2 .4、7.2、2 4g·kg-1·d-1)均可显著改善模型小鼠的学习记忆能力 ,提高脑内SOD活性 ,降低脑内MDA含量 (P <0 .0 1或P <0 .0 5 ) ,阻抑海马神经细胞的退行性变化。结论 :脑益康可改善D 半乳糖和亚硝酸钠所致AD模型小鼠的学习记忆能力。

高效液相色谱法AtlantisC18反相色谱柱检测生物样品中儿茶酚胺的研究

采用了AtlantisC18反相色谱柱(适用于分离极性分子的反相色谱柱),成功地分离了去甲肾上腺素(NA),肾上腺素(A),多巴胺(DA)等儿茶酚胺(CAs)类物质,研究了CAs在Atlantis C18和Novle pak C18柱的保留特性,比较了流动相中离子对试剂辛烷基磺酸钠(B8)浓度对CAs容量因子k’的作用,确认采用AtlantisC18柱分离CAs,色谱条件优化空间更大,更适于复杂生物样品分析。色谱条件:Atlantis C18柱,电化检测,流动相:NaH2PO450 mmol/L、柠檬酸钠50 mmol/L缓冲液-乙腈(体积比(75∶25),检测限(S/N=2)在0.93—2.43pg,绝对回收率均在98.02%以上,样品日内RSD1.5%以下。方法精密、准确。

高效液相色谱电化学检测生物样品中儿茶酚胺的研究

采用AtlantisC18反相色谱柱,成功地分离去甲肾上腺素、肾上腺素、多巴胺等儿茶酚胺类物质。研究了儿茶酚胺在AtlantisC18和NovlepakC18柱的保留特性,比较了流动相中离子对试剂辛烷基磺酸钠(B8)浓度对儿茶酚胺容量因子k'的作用,确认采用AtlantisC18柱分离儿茶酚胺,色谱条件优化空间更大,更适于复杂生物样品分析。色谱条件:AtlantisC18柱,电化检测,流动相:NaH2PO450mmol/L、柠檬酸钠50mmol/L缓冲液-乙腈(体积比为75∶25),检测限(S/N)在0.93～2.43pg以下,绝对回收率均≥98.5%,样品日内相对标准差<1.2%。方法精密、准确。

脑益康药物血清对谷氨酸和过氧化氢诱导的PC12细胞损伤的保护作用

目的:运用血清药理学方法观察脑益康药物血清对谷氨酸和过氧化氢诱导的PC12细胞损伤的保护作用。方法:①实验于2004-10/12在南通大学基础医学院病理生理实验室完成。采用12月龄SD大鼠24只,随机分为2组:对照组和脑益康灌胃组,每组12只,脑益康组以人等效剂量的1.5倍连续10d灌胃,末次灌胃后1h采血,收集脑益康药物血清。收集对照组(灌胃等量生理盐水)血清为对照。②PC12细胞经神经生长因子诱导7d后,用DMEM基础培养基洗2次,DMEM培养基中分别加入100,300,500g/L脑益康中药血清,于37℃培养1h,后加入0.2mmol/L谷氨酸,0.5mmol/L过氧化氢继续培养30min。同时设模型组(造成谷氨酸和过氧化氢诱导PC12细胞损伤模型)及对照组(对照组大鼠血清,不加谷氨酸和过氧化氢)。③采用四唑盐比色法测定PC12细胞存活率;按由南京建成生物工程公司提供测试盒说明书进行乳酸脱氢酶释放量、丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性测定。④计量资料差异比较采用ANOVA法。结果:①谷氨酸和过氧化氢模型组的PC12细胞存活率明显低于对照组(P<0.05,0.01);而乳酸脱氢酶释放量明显高于对照组(P<0.01);谷氨酸和过氧化氢模型组的PC12细胞丙二醛含量明显高于对照组(P<0.01);而超氧化物歧化酶活性明显低于对照组(P<0.01)。②脑益康药物血清组PC12细胞存活率明显高于谷氨酸模型组和过氧化氢模型组(P<0.05～0.01);而细胞的乳酸脱氢酶释放量明显低于谷氨酸模型组和过氧化氢模型组(P<0.05～0.01)。③脑益康药物血清组丙二醛含量明显低于谷氨酸模型组和过氧化氢模型组(P<0.05,0.01);而超氧化物歧化酶活性明显高于谷氨酸模型组和过氧化氢模型组(P<0.05)。结论:脑益康药物血清能明显减轻谷氨酸和过氧化氢诱导的PC12细胞的损伤,其机制可能与减少膜脂质过氧化物生成,提高抗氧化酶活性有关。

雷公藤内酯醇对PC12细胞增殖的抑制作用及机制初探

目的:研究雷公藤内酯醇(triptolide)对PC12细胞增殖的影响及其作用的机制,为其在临床上治疗肿瘤提供实验依据.方法:利用形态学观察、四甲基偶氮唑(MTT)比色分析、流式细胞术和逆转录聚合酶链式反应(RTPCR)检测雷公藤内酯醇对体外培养的嗜铬细胞瘤细胞(PC12 cell)增殖的影响.结果:雷公藤内酯醇(5×103、25×103 g/L)与PC12细胞作用24 h、48 h或72 h均可抑制PC12细胞的增殖,并且这种抑制作用可随着雷公藤内酯醇浓度的增加而增强.但低浓度的雷公藤内酯醇(1×103g/L)对PC12细胞增殖无明显影响.5×103 g/L雷公藤内酯醇与PC12细胞作用24 h后,可使细胞周期中的G0～G1期比例增加,S期比例下降.PC12细胞与雷公藤内酯醇作用后,细胞的翻译延伸因子2A3-2的表达减弱,而且作用48 h与作用24 h相比,2A3-2的表达减弱更为明显.结论:雷公藤内酯醇可抑制PC12细胞的增殖,该抑制可能是通过改变2A3-2基因的表达从而阻止细胞的G0～G1期向S期过渡来实现的.

HSPgp96体外诱导腹腔巨噬细胞抗肿瘤细胞毒作用

目的：探讨HSPgp96对小鼠PEMφ体外抗肿瘤细胞毒作用的影响。方法：分离巯基乙酸盐诱导的小鼠PEMφ,随机分为培养液对照组、LPS诱导组、HSPgp96诱导组。应用硝酸还原酶法、MTT法、扫描电镜分别观测PEMφNO的生成、对肝癌细胞H22的细胞毒作用及形态学变化。结果：在HSPgp96的体外诱导下,小鼠PEMφNO的生成量显著增加,对肝癌细胞H22的细胞毒作用明显增强,其效应与LPS相当。结论：HSPgp96可在体外有效激活PEM中的抗肿瘤细胞毒作用,NO是PEMφ杀瘤机制中的重要效应分子之一。

苦参素穴位注射对肝纤维化防治及对肝组织金属蛋白酶组织抑制因子2表达影响

目的:观察苦参素足三里(OM ZSL)注射预防及治疗大鼠肝纤维化的疗效及对肝组织中TIMP-2表达的影响。方法:采用四氯化碳诱导大鼠肝纤维化模型,SD大鼠35只,随机分为5组:正常对照组、模型对照组、苦参素腹腔注射(OM ip)对照组、OM ZSL注射治疗组、OM ZSL注射预防组。实验至10周末,测定血清ALT、AST、TBA、白蛋白(ALB)及肝组织中总蛋白(TP)水平。光镜、电镜观察肝细胞结构和肝纤维化程度;RT-PCR法检测肝组织中基质金属蛋白酶组织抑制因子-2(TIMP-2)mRNA的表达。结果:OM ZSL注射预防与治疗给药均能明显降低四氯化碳诱导肝纤维化大鼠ALT、AST、TBA含量,增加ALB及TP水平,(P<0.05,P<0.01)。病理学观察,OM ZSL注射防、治组大鼠肝组织病理改变明显减轻,假小叶结构明显减少;且OM ZSL预防组肝纤维化程度轻于治疗组。OM ZSL防、治组肝组织中TIMP-2 mRNA的表达显著低于模型对照组(P<0.05,P<0.01)。结论:OM ZSL注射对四氯化碳诱导的肝纤维化有较好的预防及治疗作用,其部分机制是通过保护肝细胞,减少TIMP-2 mRNA的表达,促进细胞外基质的降解,抑制细胞外基质沉积,从而减轻或逆转肝纤维化。

脑益康含药血清对D-半乳糖诱导海马神经细胞损伤的保护作用

目的:研究脑益康对D-半乳糖(D-gal)诱导新生大鼠海马神经细胞损伤的保护作用。方法:运用血清药理学方法采集脑益康含药血清,D-gal复制海马神经细胞损伤模型,通过倒置显微镜观察海马神经细胞形态,MTT法测定海马神经细胞的活性。结果:脑益康保护组海马神经细胞数显著高于D-gal损伤组,受损的细胞数较少。结论:脑益康对D-gal损伤的海马神经细胞具有保护作用。

新生儿缺氧缺血性脑病103例心肌酶谱检测的临床意义

目的:探讨新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)血清中心肌酶谱的变化及临床意义。方法:对56例轻度、47例中重度HIE患儿在治疗前后及52例正常新生儿的心肌酶谱谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、羟丁酸脱氢酶(HBDH)、肌酸激酶(CK)及同工酶(CK-MB)进行测定和分析。结果:HIE组与对照组间,轻度与中重度HIE组间心肌酶谱比较差异均有统计学意义(P<0.05),且HIE患儿治疗前后心肌酶谱变化差异有统计学意义(P<0.01)。结论:心肌酶谱的测定对HIE判断病情轻重及治疗效果均有重要的临床意义。

山莨菪碱对肝纤维化大鼠转化生长因子-β_1及受体表达的影响

目的:观察山莨菪碱对肝纤维化大鼠肝组织内转化生长因子-β1(TGF-β1)及其受体(TβRⅠ)表达的影响,探讨该药对肝纤维化防治作用的机制。方法:本研究用四氯化碳(CC l4)诱导肝纤维化模型。防治组在造模后1h始以山莨菪碱7.0mg.kg-1.d-1腹腔注射。大、小剂量治疗组造模后第4周始腹腔注射给药,剂量分别为14.0mg.kg-1.d-1和7.0mg.kg-1.d-1。第10周末测定血清血清谷丙转氨酶(ALT)和透明质酸(HA),RT-PCR法和免疫组化法分别检测肝组织中TβRⅠmRNA和TGF-β1蛋白的表达。结果:各山莨菪碱给药组大鼠血清ALT和HA含量均较模型组明显下降(P<0.01或P<0.05);同时该药还能抑制纤维化肝组织中TβRⅠmRNA的表达和TGF-β1蛋白的表达。结论:山莨菪碱能通过抑制肝组织中TGF-β1及TβRⅠ的表达,减轻肝纤维化。

谷氨酸对大鼠小脑脑片间位核神经元放电的影响

目的:应用细胞外记录单位放电技术,在离体大鼠小脑脑片上观察谷氨酸对间位核神经元单位放电的影响。方法:制备大鼠小脑脑片,细胞外记录小脑间位核神经元单位放电,并观察谷氨酸对大鼠小脑间位核神经元单位放电的影响。结果:谷氨酸对小脑间位核神经元放电有兴奋作用,且这种兴奋作用不能被低Ca2+/高Mg2+的人工脑脊液所阻断。结论:谷氨酸对小脑间位核神经元单位放电的兴奋作用可能是通过直接激活间位核神经元表面的谷氨酸受体实现的。