牛膝提取物神经再生素促小鼠坐骨神经再生的实验研究

目的观察中药牛膝提取物神经再生素(NRF)对小鼠损伤坐骨神经的修复作用。方法ICR小鼠50只,雌雄各半,行坐骨神经夹伤术,随机分成5组:NRF高、中、低剂量组,弥可保组(阳性对照),生理盐水组(空白对照)。术后每日腹腔注射给药。采用小鼠坐骨神经功能指数(sc iatic function index,SFI)、组织形态学及电镜检查,观察NRF对损伤坐骨神经的影响。结果与空白对照组相比,NRF可显著改善小鼠的坐骨神经功能。超微结构观察表明,实验组有髓神经纤维的髓鞘形态、厚度、成熟度均优于对照组,而变性纤维的数目少于对照组。结论NRF能促进小鼠坐骨神经损伤后的修复及其功能的恢复。

神经再生素对实验性高眼压兔视网膜i-NOSmRNA表达的影响

目的探讨中药有效成分神经再生素(NRF)对实验性高眼压视网膜可诱导型一氧化氮合成酶(i-NOS)表达的影响。方法前房灌注法建立兔右眼实验性高眼压模型,分别给予NRF和磷酸盐缓冲液(PBS)。NRF组(n=6)在灌注前、灌注后4d、7d玻璃体腔内多点注射NRF4.5μg;PBS组(n=6)在灌注前、灌注后4d、7d玻璃体腔内注射等量0.1mol/LPBS;两组兔的左眼为正常对照组(n=12)。以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组兔眼视网膜i-NOS基因表达量。结果NRF组兔视网膜i-NOSmRNA的表达量低于PBS组(P=0.000),但高于左眼正常对照组(P=0.000)。结论神经再生素能抑制青光眼视网膜i-NOSmRNA的表达,对青光眼视网膜神经节细胞可能具有保护作用。

神经再生素对实验性急性高眼压兔眼视网膜神经节细胞的保护作用

目的探讨中药提取物神经再生素(nerve regeneration factor,NRF)对实验性急性高眼压(hyper-intraocular pressure,HIOP)兔眼视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)的保护作用。方法16只健康中华大耳白兔随机等分为实验(NRF)组和空白对照(PBS)组,前房灌注法建立右眼实验性急性HIOP模型,左眼作正常对照(NC)。于灌注前、灌注后4 d、7 d,NRF组和PBS组右眼玻璃体腔内分别注射NRF4.5μg或等量(5μL)0.1 mol.L-1磷酸缓冲液。实验兔第14天安乐致死。实验兔致死前48 h以辣根过氧化物酶逆向标记双眼RGCs,视网膜铺片后以3,3’,5,5’-四甲基联苯胺法呈色,计数下半视网膜距视盘边缘为2 mm、4 mm、6 mm处的RGCs密度。结果距视盘边缘分别为2 mm、4 mm、6 mm处,NC组的RGCs密度分别为(1 621±407)mm-2、(762±235)mm-2、(366±125)mm-2;NRF组的RGCs密度分别为(1 268±378)mm-2、(699±253)mm-2、(284±104)mm-2,距视盘边缘2 mm、6 mm处,NRF组与NC组RGCs密度差异有显著统计学意义(P=0.000,0.006);PBS组的RGCs密度分别为(1 002±410)mm-2、(627±211)mm-2、(264±107)mm-2,与NC组RGCs密度差异均有统计学意义(P均<0.05);距视盘边缘2 mm处,NRF组与PBS组的RGCs密度的差异有统计学意义(P=0.033)。结论NRF可提高实验性急性HIOP兔眼RGCs的存活率,对RGCs具有保护作用。

第二届全国组织工程、干细胞与神经再生学术会议在南通召开

2006年12月10～12日由中国解剖学会、中国神经科学会、南通大学联合主办的第二届全国组织工程、干细胞与神经再生学术会议于南通大学召开。中国工程院院士、南方医科大学钟志镇教授，中国科学院院士、香港大学神经科学研究中心主任苏国辉教授，中国工程院院士、解放军301医院骨科研究所卢世璧教授，中国工程院院士、上海华山医院手外科顾玉东教授及来自英国、澳大利亚、香港、中国科学院、北京大学、清华大学、首都医科大学、南京医科大学等24家单位的62位专家学者出席会议。其中有多人承担863、973项目和国家杰出青年科学基金项目，学科涉及材料学、化学、药学、组织工程、干细胞、神经再生基础与临床。

神经再生素促大鼠海马神经元生长的研究

目的研究牛膝提取物神经再生素(NRF)对体外培养的大鼠海马神经元生长的促进作用及其对生长相关蛋白-43(GAP-43)表达的影响。方法以体外原代培养的胎鼠海马神经元为研究模型,通过相差显微镜采用Scion软件测量不同浓度NRF(0.25mg/L、0.5mg/L、1mg/L)、不同作用时间(6h、12h、24h)对海马神经元神经突起生长的影响;通过实时荧光定量PCR观察NRF不同浓度(0.25mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L)及不同作用时间(6h1、2h、24h)对海马神经元GAP-43基因表达的影响;采用免疫荧光细胞化学法和Western blotting,观察不同浓度NRF(0.25mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L)加药24h后,对海马神经元GAP-43表达的影响。结果NRF可有效地促进海马神经元的生长,加药后24h作用浓度为1mg/L时,作用最强;实时荧光定量RT-PCR、免疫荧光细胞化学法和Western blotting的结果提示,NRF能增加体外培养的海马神经元GAP-43的表达,浓度为1.0mg/L时,作用最佳。结论NRF能促进体外培养的海马神经元神经突起的生长和GAP-43基因的表达,表明NRF对海马神经元具有神经营养作用。

神经再生素促大鼠背根神经节生长作用的研究

目的研究神经再生素(NRF)对体外培养新生大鼠背根神经节生长及NF-H表达的影响。方法体外大鼠背根神经节(DRG)培养;免疫荧光细胞化学、实时荧光定量PCR和Western blot等方法。结果免疫荧光细胞化学结果提示,NRF能促进背根神经节神经突起的生长,浓度为2.0 mg/L时生长状况最佳;实时荧光定量PCR和Western blot结果提示,NRF能增加体外培养的背根神经节NF-H mRNA和蛋白的表达,在浓度为2.0 mg/L时表达最高。结论NRF能促进体外培养背根神经节神经突起的生长和NF-H的表达,表明NRF对发育期感觉神经元具有神经营养作用。

许旺细胞对周围神经再生的促进效应

学术背景:许旺细胞是周围神经纤维的鞘细胞,是周围神经不可缺少的一部分。在周围神经损伤修复过程中,如何运用和调控许旺细胞的活性成为周围神经领域内的研究热点。目的:深入认识许旺细胞的作用及其促周围神经再生的研究进展。检索策略:由该论文的研究人员应用计算机检索Science Direct及PUBMED数据库1990-01/2007-10的相关文献,检索词"schwann cells,peripheral nerve injury,proliferation,macrophage,activation,neurotrophic factors,extracellular matrix,adhesion molecule,axon,interaction,myelination,transplantation,gap,transgene,over-expressing,isolation,purification,stemcells",并限定文章语言种类为English。同时计算机检索中国期刊全文数据库1990-01/2007-10的相关文献,检索词"雪旺氏细胞,周围神经再生,人工神经移植物",并限定文章语言种类为中文。共检索到285篇文献,对资料进行初审,纳入标准:①文章所述内容应与许旺细胞促周围神经再生密切相关。②同一领域选择近期发表或在权威杂志上发表的文章。排除标准:①重复性研究。②Meta分析。文献评价:文献的来源主要是通过对许旺细胞促周围神经再生的作用机制与应用及其相关研究进展进行汇总分析,所选用的48篇文献中,2篇为综述,其余均为临床或基础实验研究。资料综合:①周围神经损伤后,其远侧段轴突及髓鞘崩解,同时许旺细胞大量增殖,增殖的许旺细胞在基底膜管内形成Bungner带,引导再生轴突的生长并最终形成新的髓鞘;增殖的许旺细胞还通过激活单核/巨噬细胞清除组织碎片、分泌神经营养因子以及维持受损神经元的活力、抑制其凋亡,进一步促进周围神经的再生;并且通过许旺细胞与再生轴突之间的缝隙连接和紧密连接,使得再生过程中物质交换和信息交换更为便捷和有效的进行。②目前大量研究尝试利用许旺细胞促进周围神经再生,许旺细胞与人工神经移植物共同运用在动物实验中已经取得了显著功效。随着转基因技术的发展,遗传修饰的许旺细胞成为研究热点。③许旺细胞的分离纯化技术从最早的反复植块法、消化法,到以heregulin/forskolin处理细胞然后用神经切断造模法,再到最近的抗体磁珠分选法,体外培养许旺细胞的纯度得到不断提升。④实验证明间充质干细胞诱导后可以分化为表达p75、S100、GFAP等胶质细胞的标志性分子,并能显著促进轴突生长和髓鞘形成。结论:许旺细胞促进周围神经再生的作用已受到广泛肯定,但其作用的信号通路仍不确定。正确诱导许旺细胞分化为成熟的成髓鞘许旺细胞、保证其在损伤局部的存活是修复周围神经损伤的关键。

神经再生素促进大鼠坐骨神经损伤后再生

目的：探讨神经再生素（NRF）对大鼠坐骨神经损伤后再生的影响。方法：SD大鼠30只，雌雄各半，随机分为3组：NRF低、高剂量组和空白对照组。分别于坐骨神经夹伤术后10、15、20d测定大鼠坐骨神经功能指数（SFI），分离出大鼠双侧坐骨神经行电生理学检测，计算神经干动作电位恢复率；各组随机选取2只大鼠，应用透射电镜观察再生坐骨神经超微结构；其余大鼠行光镜下观察脊髓腰膨大（k～k）、夹伤远端处坐骨神经、损伤侧腓肠肌组织，并测定脊髓前角运动神经元数、再生有髓神经纤维数、腓肠肌肌细胞截面积等指标。结果：术后10d各组SFI无显著差异，术后15d仅仅高剂量组SFI明显优于对照组（P〈0．01），术后20d高、低剂量组SFI均优于对照组（P〈0．01，P〈0．05）；术后20d高、低剂量组及对照组大鼠坐骨神经干动作电位的恢复率分别为（57±26）％、（44±15）％、（31±9）％，其中高剂量组与对照组相比有显著差异（P〈0．05）；高剂量NRF组的有髓神经纤维成熟度优于对照组，而变性纤维少于对照组；光镜下NRF高剂量组再生神经纤维排列致密整齐、结构均匀，腓肠肌肌细胞饱满、排列整齐，双侧脊髓前角运动神经元更接近；NRF高剂量组脊髓前角运动神经元计数、有髓神经纤维计数均显著高于对照组（P〈0．05，P〈0．01），NRF高、低剂量组腓肠肌肌细胞截面积显著高于对照组（P〈0．01，P〈0．05）。结论：NRF能促进坐骨神经再生及其功能恢复。

中药神经再生素在基因水平对神经元生长的影响

目的观察神经再生素(NRF)影响海马神经元生长的机制。方法用胚胎17d的大鼠海马离体培养神经原,分用药组和对照组,培养6h加NRF(1μg/ml),检测神经元突起长度,提取细胞的总RNA并纯化,设计合成G蛋白偶联受体(GPCR)基因的引物,采用Taqman荧光探针,实时定量PCR,检测离体培养海马神经元用药组和对照组细胞GPCR基因表达量的变化。结果用药组的神经元突起生长较长,GPCR的基因表达量显著高于对照组(P<0·01)。结论NRF使海马神经元生长并增加GPCR基因的表达,GPCR可引起神经细胞生长的生物效应。

神经再生素促海马神经元生长的基因芯片研究

目的:探索中药“神经再生素”对海马神经元生长的作用及生物学机制。方法:采用海马神经元培养及基因芯片技术,中药组加入神经再生素1μg/ ml ,对照组加入等量基础培养液。培养6 h后,观察海马神经元突起长度,并提取2组的神经元总RNA,经反转录分别用荧光标记成cDNA探针,与大鼠全基因组芯片杂交,芯片扫描,后行GCOS软件处理。结果:中药组细胞突起长度(18μm)明显长于对照组(12μm)(P<0 .01)。在基因芯片15866条基因中,248条基因上调,316条基因下调,这些基因有细胞组份、生物过程生长代谢调控因子、信号转导分子、凋亡调控因子、免疫蛋白、酶等。结论:中药“神经再生素”可促海马神经元生长。差异表达的基因为寻找药物作用的基因靶点提供了基础。

神经再生的内在调控机制

总结目前已知与神经元内在再生能力调控有关的关键转录调控因子、再生能力核心调控蛋白和转录后非编码RNA在神经再生调控中作用,以系统性阐述神经再生的内在调控机制,并就存活与再生、衰老与再生的调控进行探讨。

Tropic1808基因重组蛋白对大鼠坐骨神经再生的影响

目的观察Tropic1808基因重组蛋白对坐骨神经损伤后再生的影响。方法SD大鼠16只,分为Tropic1808基因重组蛋白组和生理盐水组,切断左侧坐骨神经,硅胶管套接后两神经断端间距10mm,再生室内注入Tropic 1808基因重组蛋白液(500μg/ml)或生理盐水13μl。术后每4周做一次足迹试验,16周时作神经干动作电位、脊髓前角运动神经元数、腓肠肌纤维截面积、硅胶管中段再生神经等检测。结果Tropic1808基因重组蛋白组SFI的恢复、神经干动作电位、脊髓前角运动神经元数、腓肠肌纤维截面积、硅胶管中段再生神经有髓神经纤维数等结果均明显优于生理盐水组,有统计学意义。电镜观察表明Tropic1808组再生轴突较NS组粗,髓鞘较生理盐水组厚。结论Tropic1808基因重组蛋白有促进大鼠坐骨神经再生的作用。

神经再生素促大鼠背根神经节神经突起生长显微图像的分形特征

目的:研究分维数与神经再生素(nerve regeneration factor,NRF)剂量促离体培养新生大鼠背根神经节(dorsal root ganglions,DRGs)神经突起生长之间的关系。方法:采用计盒维数方法,计算在不同浓度NRF条件下大鼠DRGs荧光显微图像的分维数。结果:离体培养大鼠DRGs显微图像的分维数随神经突起数量和长度的变化呈现一致的变化规律。结论:分维数可以作为一个重要定量指标表征大鼠DRGs神经元生长与NRF浓度的依赖关系。

补阳还五汤促进大鼠夹伤腓总神经功能恢复的实验研究

目的:研究补阳还五汤(BYHWD)促进大鼠夹伤腓总神经功能恢复的作用。方法:采用钳夹大鼠腓总神经建立周围神经损伤的动物模型。将造模后的30只雄性SPF级SD大鼠随机分为3组:BYHWD组,弥可保组和模型组。术后每日灌胃给药,术后18d行足迹实验,测定展趾功能;行电生理检测测定神经传导速度,计算胫前肌湿重比和横截面积。结果:①展趾功能:BYHWD组(-0.15±0.07)、弥可保组(-0.17±0.08)与模型组(-0.25±0.07)相比增高(P<0.01)。②神经传导速度:BYHWD组(18.36±2.74)m/s、弥可保组(16.32±3.54)m/s与模型组(9.08±2.56)m/s相比加快(P<0.01及P<0.05);弥可保组与BYHWD组相比差异亦有统计学意义(P<0.05)。③胫前肌湿重比:BYHWD组(64.21±2.92)%、弥可保组(62.43±3.21)%,与模型组(54.27±2.05)相比提高(P<0.01)。④胫前肌横截面积:BYHWD组(654.21±42.92)cm2、弥可保组(638.43±93.21)cm2,与模型组(574.27±52.05)相比增加(P<0.01及P<0.05);弥可保组与BYHWD组相比差异也有统计学意义(P<0.05)。结论:BYHWD能加速大鼠展趾功能恢复,提高神经传导速度,延缓胫前肌横截面积和湿重比的减小,从而促进腓总神经损伤后的功能恢复。

人工组织神经移植物引导大鼠再生坐骨神经通过10mm缺损早期的形态学观察

本实验采用壳聚糖导管和聚乙醇酸(PGA)纤维支架构成的人工组织神经移植物桥接大鼠10mm坐骨神经缺损,应用免疫荧光组织化学、激光扫描共聚焦显微镜和电镜技术对早期神经再生过程进行观察。结果显示,Schwann细胞和新生轴突沿PGA支架纤维有序地生长。术后4、7、10和14d,新生轴突和Schwann细胞沿支架由近及远长入的距离分别约150μm、500μm、1.3mm和3.5mm。术后4周,新生轴突前沿已经通过整段移植物长到远侧神经端。实验表明,该移植物有利于Schwann细胞和新生轴突的有序导向生长,能够有效地促进周围神经再生。

犬自体骨髓间充质干细胞组织工程化神经荧光金逆行示踪标记实验

目的采用荧光金逆行示踪方法来评价自体骨髓间充质干细胞组织工程化神经修复狗坐骨神经缺损,再生神经的物质运输功能。方法在自体骨髓间充质干细胞组织工程化神经桥接狗坐骨神经5cm缺损,术后6个月,将5%荧光金(Fluoro-Gold,FG)注射入桥接侧的远段坐骨神经干内,2周后取相应的脊髓节段和背根节进行冰冻切片,并在激光共聚焦显微镜下观察结果,并进行了计量分析。结果桥接侧相应脊髓灰质前角和背根神经节切片中观察到被FG逆行标记的神经元。结论再生神经修复了缺损,恢复了神经干的连续性,再生神经具有良好的物质运输功能。

小鼠神经缺损管式修复后长时程功能恢复与再生评价

目的了解壳聚糖/聚乳酸-乙醇酸共聚体(PLGA)人工神经移植物修复小鼠神经缺损后神经功能长时程恢复水平与再生神经成熟度。方法采用人工神经移植物桥接修复小鼠坐骨神经缺损(n=6),以自体神经修复(n=6)和缺损组(n=6)为对照,术后1年采用热痛阈测定、电生理学、激光多普勒血流检测评定神经功能,采用靶肌湿重比、组织学和电子显微镜等技术综合评定神经重支配和再生神经成熟度。结果人工神经移植物组足底痛觉反应潜伏期、神经源性血管扩张程度、腓肠肌复合肌动作电位(CMAPs)波幅和潜伏期、靶肌湿重比、再生轴突数量等指标与自体神经修复组相近,但与健侧相比CMAPs潜伏期较长,髓鞘较薄,轴突直径分布滞后。结论人工神经移植物修复小鼠神经缺损术后1年感觉及自主神经功能、再生神经数量和靶肌重支配水平与自体神经修复相当,但再生神经纤维成熟度未达正常。

坐骨神经损伤与再生过程中背根节神经元基因表达模式分析

目的:探讨坐骨神经损伤与再生过程中,背根节神经元轴突再生的分子调控模式和机理。方法:采用表达谱芯片分析坐骨神经离断后,L4-6背根节神经元基因表达的变化,并分析差异基因所反映的核心生物学过程的变化。结果:(1)坐骨神经离断后,近端坐骨神经差异基因的数量表现为先上升再下降的趋势,但背根节神经元呈现为波浪形的增加。(2)核心生物学过程的差异基因数量变化:刺激检测、G-蛋白偶联受体信号通路、细胞表面受体连接信号转导均呈波浪形变化。防御反应、炎症反应、免疫反应、轴突生成表现为持续性增加。(3)与轴突生成相关的差异基因表达变化结果显示:Lhx4、Nkx2-9、Efnb3、Titf1、Apoa4表现为波浪形增加。Mapk8ip3、Zfp312、Gap43在长时间点表达增加。Tnn、Efnb1一开始降低,Notch1、Nefl、Bmpr1b等基因表现为长时间点表达降低。结论:坐骨神经离断后,背根节神经元差异基因和核心生物学过程的变化趋势,反映了周围神经损伤与再生过程中轴突再生的分子调控模式。