三氧化二砷逆转肺癌细胞株耐药的实验研究

目的:观察三氧化二砷(As2O3)与肺腺癌细胞株HTB-56、相应耐药细胞株HTB-56/DDP共孵育有无诱导细胞凋亡以及逆转耐药作用。方法:采用人肺腺癌细胞株HTB-56、HTB-56/DDP作为实验细胞,以As2O3和顺铂(DDP)作干预,用MTT法检测As2O3单独和与DDP共孵育后细胞的生长抑制率得半数抑制浓度得出抗药倍数;以电镜观察干预后细胞凋亡情况。结果:不同浓度As2O3作用相同时间或相同浓度作用不同时间对HTB-56、HTB-56/DDP的细胞抑制率有明显差异(P<0.05);HTB-56/DDP细胞株与HTB-56细胞株相比,对顺铂的抗性倍数为14.65倍;而与As2O3共孵育对DDP的抗药倍数则为6.35,逆转倍数约为3.5,As2O3对其有增敏及逆转耐药作用和诱导细胞凋亡。结论:As2O3有明显抗肿瘤作用,能增强肺癌耐药细胞株对DDP的敏感性,对逆转耐药有一定的作用。

肺癌患者HIF-1α过表达及其靶向干预对VEGF的调控作用

目的:分析肺癌患者缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)的表达情况及其对血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的调控作用。方法:收集住院肺腺癌患者(n=60)术后新鲜癌和自身配对非癌组织制作组织芯片,以免疫组织化学法分析HIF-1α和VEGF的表达与胞内定位;构建并筛选HIF-1αmRNA短发夹RNA干扰质粒转染肺癌A549细胞,观察对VEGF表达,癌细胞增殖、侵袭及迁移等生物学特性的影响。结果:肺癌组织中HIF-1α和VEGF呈棕黄色,颗粒状过表达状态,定位于胞质和胞核,两者在肺癌组中的表达均显著高于非癌组(均P<0.001);两者表达水平与肺癌TNM分期、分化程度、淋巴结转移或远处转移显著相关(P<0.05)。将特异的短发夹RNA干扰质粒转染肺癌A549细胞后,癌细胞增殖显著受抑,呈时间依赖性;转染72 h时HIF-1αmRNA抑制率为87.1%(P<0.001),VEGF抑制率为54.3%(P<0.001),并显著抑制癌细胞迁移(P<0.001)和侵袭(P<0.001)能力。结论:肺癌HIF-1α和VEGF过表达,靶向HIF-1α转录显著抑制VEGF表达及相关生物学行为。

微创和开放手术治疗食管癌的疗效及预后分析

目的比较微创与开放手术治疗食管癌的近远期疗效,分析影响并发症和预后的因素。方法回顾性分析2014年4月—2016年2月江苏省盐城市第一人民医院205例接受微创食管癌手术患者的围手术期资料和生存资料,并与同期247例行开放食管癌手术患者的资料进行对比,多因素Logistic回归模型分析影响术后并发症的风险因素,多因素Cox回归模型分析影响预后的因素。结果微创组患者术中出血量、术后住院时间、胸管引流时间等优于开放组,差异有统计学意义。微创McKeown组与开放组手术时间相当,差异无统计学意义,微创Ivor-Lewis组手术时间长于开放组。两组R0切除率、双侧喉返神经旁淋巴结清扫以及淋巴结清扫总数无明显差异。微创组术后并发症发生率低于开放组。多因素Logistic回归分析显示TNM分期、美国麻醉医师协会(American Society of Anesthesiology,ASA)分级、不同术者、手术方式、FEV1%FVC是影响术后并发症的风险因素。微创组术后1、3、5年生存率与常规组无明显差异(86.3%,58.5%,44.4%vs 85.8%,53.4%,39.2%;P>0.05)。多因素分析显示年龄、TNM分期、分化程度是影响患者预后的独立因素。结论微创食管癌手术较开放手术可减少术中出血、缩短住院时间和降低术后并发症,远期疗效与常规手术相当。

人AURKA基因RNA干扰慢病毒载体的构建及其对A549细胞增殖的影响

目的:针对AURKA基因构建RNA干扰重组慢病毒质粒并进行慢病毒包装,初步探讨AURKA基因的功能。方法:应用p GCLV-GFP慢病毒载体构建针对AURKA的shRNA载体,转染包装293T细胞,收集病毒上清液,转染肺腺癌细胞株A549。荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况确定转染效率,应用Western blot技术检测AURKA基因在蛋白水平表达的变化,以明确RNAi的抑制率。应用Brd U法分析干扰AURKA前后A549细胞增殖情况的变化,运用克隆形成实验检测干扰AURKA后A549细胞株对长春新碱敏感性的变化。结果:针对AURKA基因的RNAi慢病毒表达载体构建成功,PCR和DNA测序鉴定实验表明插入位点与干扰片断的碱基序列完全正确。在293T细胞中进行慢病毒包装,获得高滴度病毒上清液。通过重组慢病毒载体将AURKA shRNA转导入A549细胞中,转染效率为100%。Western blot检测证实LV-AURKA慢病毒显著抑制AURKA的表达,Brd U检测显示AURKA基因表达下调抑制了A549细胞的增殖。克隆形成实验表明AURKA基因表达增强A549细胞对长春新碱的敏感性。结论:慢病毒载体介导的靶向AURKA的RNA干扰可有效抑制AURKA表达,降低肺腺癌A549细胞的增殖能力,并且增强A549细胞对长春新碱的敏感性。

肺腺癌组织促血管生成素-2表达及其与临床病理学特征和预后的关系

目的:研究肺腺癌组织中促血管生成素-2(angiopoietin-2,Ang-2)表达水平及其临床意义。方法:收集手术切除的肺腺癌组织和自身对照非癌组织各60例,制作组织芯片,采用免疫组织化学法检测肺腺癌组织Ang-2表达,分析Ang-2表达与患者临床特征及预后的关系。结果:肺腺癌组织中Ang-2表达阳性率为81.7%,显著高于自身对照非癌组织的15.0%(P<0.001)。Ang-2高表达与肿瘤大小、TNM分期及患者5年生存率相关(P<0.05)。单因素分析显示肺腺癌组织中Ang-2表达、分化程度、TNM分期与患者5年生存率相关,多因素分析显示Ang-2水平是肺腺癌患者预后的独立危险因素。Kaplan–Meier生存曲线分析显示Ang-2高表达者总生存率显著小于低表达者(P<0.001)。结论:Ang-2过表达与肺腺癌进展密切相关,有望成为肺腺癌早期诊断或评价预后的生物标志物。