医学检验中的测量不确定度

医学检验结果报告单定量检测结果包含了测量不确定度才是完整的,以判断检测结果是否达到预期检测目的。比较相关检测结果的一致性时,也必须报告测量不确定度[1]。测量不确定度可定量地评价检测结果的质量,是参考实验室和常规实验室质量体系的核心部分。

以问题为基础的学习在临床检验生物化学实习教学中的应用

目的为更好地培养临床医学检验专业学生的临床实践能力,探索适合中国国情的临床检验生物化学以问题为基础的学习(PBL)教学方法。方法在临床医学检验专业本科生的《临床检验生物化学》实习教学中,开展PBL教学法实践,在教师辅导下,"以问题为基础"对检验结果进行分析和讨论学习。结果学生对PBL的学习方法表现出了较大的积极性,可使学生更好掌握检验结果的临床意义、重视检验与临床联系的重要性等,充分体现教师的主导作用和学生的主体作用,提高教学效率,同时对教师提出更高的要求。结论PBL教学法有利于调动学生的学习积极性和主动性,有利于培养学生的自学能力和创新精神,在教与学两方面促进了教学质量的提高,受到学生、教师的普遍认可。

应用医院存储数据建立血清Cyfra21-1、SCCA、CEA参考区间

目的应用医院存储数据建立血清细胞角蛋白19片段（Cyfra21-1）、鳞状细胞癌抗原（SCCA）、癌胚抗原（CEA）间接参考区间。方法收集2014年4月至2015年3月南通大学附属医院实验室信息系统（LIS）存储的所有Cyfra21-1、SCCA、CEA检测值,经数据筛选、线性拟合,建立其间接参考区间。选取2015年1-3月南通大学附属医院体检健康者454例,按照美国临床和实验室标准化协会（CLSI）文件C28-A3要求,采用非参数方法建立上述项目参考区间。结果存储数据组Cyfra21-1、SCCA、CEA间接参考区间为0-2.87 ng/m L、0-1.76 ng/m L、0-3.77 ng/m L,健康组数据建立的Cyfra21-1、SCCA、CEA间接参考区间为0-2.84 ng/m L、0-1.38ng/m L、0-3.60 ng/m L。结论存储数据建立检验项目的生物参考区间省时、省力,可用于实验室现有参考区间的验证。

临床生物化学检验教学实践改革与体会

临床生物化学检验是高等医学检验专业教育的一门核心专业课程,由生物学、生物化学和分子生物学、免疫学等基础医学,相关现代科学技术和临床医学等各学科相互渗透结合而逐渐形成的交叉的应用学科,涉及的内容多,技术更新快。临床生物化学检验实验教学配合理论教学,进一步巩固学生在理论学习中所需掌握的基本知识和技能，并且注重对其综合实践能力和创新能力的培养。近几年来，通过改革和创新临床生物化学检验教学，以临床案例和综合性实验的应用与实践，深化了教学改革的体系，系统性的优化了课程教学的内容，受到检验医学生的欢迎。

LncRNA CCAT2和miR-200a-3p在宫颈癌患者血清中的表达水平及临床意义

目的 检测长链非编码(LncRNA)结肠癌相关转录物2(CCAT2)和微小RNA-200a-3p(miR-200a-3p)在宫颈癌(CC)患者血清中的表达水平,探讨其辅助诊断价值。方法 收集102例CC患者、100例健康对照者的血清标本。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)的方法分别检测原发性CC患者、健康对照者血清LncRNA CCAT2、miR-200a-3p的表达水平,分析其与临床病理特征的关系。采用Pearson检验分析LncRNA CCAT2、miR-200a-3p在CC中表达水平的相关性。采用Kaplan-Meier生存曲线分析LncRNA CCAT2、miR-200a-3p不同表达水平对CC患者生存的影响;应用Kaplan-Meier法和Cox比例风险回归模型分别进行单因素、多因素分析影响CC患者生存的独立风险因素。结果 原发性CC患者血清中LncRNA CCAT2、miR-200a-3p的相对表达水平分别为1.757(1.023~2.314),1.957(1.125~3.471),健康对照组血清中CCAT2、miR-200a-3p的相对表达水平分别为0.766(0.531~1.032),0.965(0.667~1.495),两者比较差异有统计学意义(均P<0.001)。CCAT2的相对表达水平与CC患者肿瘤最大径、国际妇产科联合会(FIGO)分期、淋巴结是否转移、鳞状上皮细胞抗原(SCC-Ag)有关(均P<0.05),而miR-200a-3p的相对表达水平与患者FIGO分期、淋巴结是否转移、SCC-Ag有关(P均<0.05)。原发性CC患者血清CCAT2与miR-200a-3p相对表达水平呈正相关(P=0.035,r2=0.044)。CCAT2高表达水平组CC患者生存率明显低于CCAT2低表达水平组CC患者生存率,差异有统计学意义(P=0.0012),miR-200a-3p高表达水平组CC患者生存率与miR-200a-3p低表达水平组CC患者生存率差异无统计学意义(P=0.259)。单因素分析显示,淋巴结转移(P<0.001)和CCAT2(P=0.001)与总生存期(OS)相关。多因素分析显示,淋巴结转移(HR=5.568,95%CI:2.284~13.573,P<0.001)和LncRNA CCAT2高表达(HR=3.571,95%CI:1.174~10.863,P=0.025)是与OS相关的独立风险因素。结论 LncRNA CCAT2、miR-200a-3p在CC患者血清中明显升高,与CC的发生发展有一定的联系,可作为CC患者病情监测和预后判断的生物标志物。

临床实验室测量不确定度评定初步研究

目的探索临床实验室测量不确定度评定方法。方法参考北欧测试合作组织(Nordtest)方法,以室内不精密度和方法偏倚为分量评定临床实验室乳酸脱氢酶(LDH)的测量不确定度,方案1:室内质控(IQC)不精密度引入不确定度和参加室间质评(EQA)实验室不分组偏倚引入不确定度;方案2:IQC不精密度引入不确定度和EQA以仪器分组偏倚引入不确定度;方案3:IQC不精密度引入不确定度和EQA以试剂分组偏倚引入不确定度。结果中值方案1、方案2、方案3合成相对扩展不确定度分别为18.0%、9.2%、8.2%;高值方案1、方案2、方案3合成相对扩展不确定度分别为18.0%、8.7%、7.7%;综合分析LDH的中值、高值合成相对扩展不确定度为9.2%、8.7%。结论 IQC和EQA数据可用于计算测量不确定度,关键合理使用信息。本研究为临床实验室评定测量不确定度提供参考。

PCR-RFLP检测载脂蛋白CⅢ基因T-455C多态性方法的建立及应用

目的建立聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP)检测载脂蛋白CⅢ(apoCⅢ)T-455C多态性的方法,探讨南通汉族人群中apoCⅢ多态性与高三酰甘油血症(HTG)的相关性。方法用PCR扩增apoCⅢ基因启动子区包含T-455C多态性在内的DNA片段,扩增产物用限制性内切酶BseGⅠ酶切后电泳,分析apoCⅢ基因型,同时采用生化方法检测研究对象的血脂和载脂蛋白水平。结果检测到3种基因型,分别为-455TT、-455TC和-455CC。HTG患者组和健康对照组apoCⅢ-455C等位基因频率(50.44%比33.11%)和apoCⅢ-455CC基因型频率(26.55%比12.16%)均有显著差异(P<0.01);C等位基因携带者患HTG的风险是非携带者的2.06倍(95%CI:1.31～3.24);-455C等位基因携带者有较高的三酰甘油(TG)和apoCⅢ蛋白水平(P<0.05)。结论PCR-RFLP是一种快速、敏感的分析apoCⅢ基因启动子区T-455C多态性的方法;apoCⅢ-455C等位基因与HTG的发生相关。

肝癌患者血清高尔基体蛋白73检测及其意义

目的探讨高尔基体蛋白73(GP73)在原发性肝癌(PHC)诊断中的临床应用价值。方法分别采用ELISA法和化学发光法定量检测51例PHC患者、35例肝硬化患者以及40例健康体检者血清GP73以及甲胎蛋白(AFP)的水平。结果血清GP73诊断PHC的临界值为127.5μg/L,诊断灵敏度为66.7%,特异度为93.3%。PHC组中血清GP73水平[(185.1±62.9)μg/L]显著高于肝硬化组[(69.8±28.2)μg/L]及健康对照组[(36.7±13.3)μg/L],差异有统计学意义(P<0.05)。与GP73及AFP单项检测比较,二者联合检测可提高PHC诊断的灵敏度以及总有效率(P<0.05),而特异度差异无统计学意义(P>0.05)。结论 GP73水平在PHC患者血清中明显增高,可作为PHC诊断的血清标志物,且与AFP联合检测可提高PHC诊断效率。

南通地区健康体检人群小而密低密度脂蛋白水平调查

目的初步调查南通地区健康人群小而密LDL（胆固醇和蛋白质）的分布情况。方法体格检查和实验室检查均无异常的健康人群254名（男137名，女117名），按年龄分成20-29岁（65名）、30-39岁（65名）、40-49岁（46名）、50-69岁（35名）、和≥70岁（43名）5组。检测采用全自动生化分析仪和芯片电泳技术。结果小而密LDL胆固醇和蛋白质水平均值为（0.39±0.14）mmol／L和（241±158）mg／L，小而密LDL胆固醇与总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇相关性较好（r=0.67、0.35、-0.42和0.46，P均〈0.01），小而密LDL蛋白质与这些血脂指标相关性较好（r=0.54、0.24、-0.32和0.52，P均〈0.01）。小而密LDL蛋白质和胆固醇水平随年龄增高呈上升趋势，而70岁以上人群呈下降趋势；男性小而密低密度脂蛋白水平高于女性[（0.40±0.11）mmol／L vs.（0.37±0.17）mmol／L，P〈0.01；（253±59）mg／L vs.（237±95）mg／L，P〈0.05]，P〈0.05。结论不同方法、不同地区小而密LDL胆固醇和蛋白质水平调查有重要的临床意义。

多发性骨髓瘤患者B淋巴细胞刺激因子及其受体的表达水平

目的探讨B细胞激活因子（BLyS）及其受体在多发性骨髓瘤（MM）发病中的作用机制.方法用酶联免疫吸附测定法（ELISA）和实时荧光定量聚合酶链反应（RFQ—PCR），对31例MM患者和30名健康人血清BLyS含量、外周血单个核细胞（PBMCs）中BLyS及其受体mRNA含量进行检测;并比较MM患者血清BLyS含量与外周血PBMCs中BLyS及其受体基因表达水平和β2微球蛋白（β2M）的相关性.结果MM患者血清BLyS含量（6．99±3．28g/L）明显高于健康对照组（2．70±1．09g/L，P〈0．01），并与β2M浓度呈正相关性（r=0．954，P=0．000）;77．42%（24/31），93．55%（29/31），90．32%（28/31）的MM患者血清BLyS蛋白和PBMCs中BLyS，B细胞成熟抗原（BCMA）mRNA表达水平较正常人明显增高，并且也与β2M的含量呈正相关;而64．52%（20/31）患者穿膜蛋白活化物（TACI）mRNA表达水平降低.结论MM患者的血清BLyS蛋白浓度和PBMCs中BLyS及其受体基因表达水平有异常改变，说明BLyS及其受体可能参与MM的发病;BLyS及其受体表达水平也许可作为预后的一个指标.

系统性红斑狼疮患者B细胞激活因子mRNA定量测定及其意义

目的建立实时荧光定量PCR(RFQ PCR)检测人B细胞激活因子(BLyS)mRNA含量的方法,初步探讨BLyS表达水平与系统性红斑狼疮(SLE)的相关性。方法在BLyS基因保守区设计特异性的引物和荧光探针,RT PCR扩增目的片段并实时检测产物的荧光强度,以标准品建立标准曲线,由软件自动计算出待测样本中BLySmRNA含量,并以BLySmRNA和内参β2M mRNA含量的比值作为评价BLyS表达水平的指标。结果本法检测BLySmRNA含量的线性范围为109pg/ml～101pg/ml,批内和批间变异系数(CV)分别为2.4%～7.4%和4.3%～12.3%。SLE患者BLySmRNA表达水平(1.45±0.33)显著高于健康献血员(0.88±0.13),P<0.01,而且与血清IgG水平和抗ds DNA抗体滴度有显著相关性。结论建立RFQ PCR检测BLySmRNA含量的方法,具有较好的检测灵敏度和重复性;BLyS在SLE的发生、发展及预后等方面可能具有重要作用。

4项指标联合检测对类风湿性关节炎的诊断价值

目的探讨类风湿因子(RF)、抗环瓜氨酸肽抗体(抗-CCP)、C-反应蛋白(CRP)和红细胞沉降率(ESR)检测对类风湿性关节炎的诊断价值。方法利用速率散射免疫比浊和化学发光微粒子免疫检测法和Westergren法分别测定134例类风湿性关节炎(RA)患者和50例健康对照组的RF、抗-CCP、CRP和ESR水平。结果 RF、抗-CCP、CRP和ESR对RA诊断的阳性率分别为79.1%、74.6%、61.7%和82.9%。对RA诊断的灵敏度、特异度和准确度,RF分别为91.0%、74.4%和87.0%,抗-CCP分别为88.0%、90.4%和88.1%,将两者联合检测则分别为90.2%、83.3%和89.5%。结论 RF和抗-CCP是对RA诊断有较高灵敏度实验室血清学诊断指标,但抗-CCP对RA诊断有较高特异性;CRP和ESR尽管不是RA的特异性诊断指标,但对RA的辅助诊断也具有重要价值,四者同时检测有利于RA诊断。

毛细管等速电泳法分离血清脂蛋白

目的建立毛细管等速电泳（CITP）分析血清脂蛋白的方法。方法用盐酸和丙氨酸组成的不连续缓冲体系分离荧光标记的脂蛋白颗粒；各亚组分的相对峰面积（RPA）结合血清总胆固醇反映各脂蛋白胆固醇的含量。结果本法可在6min内将血清脂蛋白分出9条带，其中1—4为HDL，5为CM，6为VLDL／LDL，7—9为LDL。各组分的RPA批内CV为3．17％～13．55％，批间CV为4．55％～15．33％；血红蛋白〈20g／L、胆红素〈342μmol／L、清蛋白〈70g/L对结果无影响；HDL-C、LDL-C与均相法相关（r分别为0．87和0．84，P〈0．001）。结论CITP可快速、灵敏分离定量血清脂蛋白及其胆固醇含量，可用于临床分析脂质代谢异常。

常规法测定不同GGT催化活性的不确定度评定

目的评定常规方法测定不同γ-谷氨酰基转移酶(GGT)活性的不确定度。方法用实验室常规方法和IFCC推荐的参考方法分别检测混合血清,以参考方法为依据评定常规方法测定GGT活性的不确定度,并绘制GGT活性测定的不确定度特征曲线,建立不确定度与酶活性水平间的函数关系。结果运用不确定度特征曲线分析,当GGT活性较低时,应使用不确定度的绝对形式表示;当GGT活性较高时,应用相对不确定度表示。建立了GGT活性(x)与不确定度(u)之间的近似关系:u(x)≈2.42+0.033x。结论绘制不确定度特征曲线或建立不确定度与活性水平之间的函数关系可以方便地指导临床实验室评定测量不确定度。

强直性脊柱炎患者HLA-B27、CRP和ESR的水平及相关性分析

目的探讨强直性脊柱炎(AS)患者HLA-B27、CRP和ESR的水平及相关性。方法检测对54例AS患者和48例健康对照者人类白细胞抗原B27(Human leucocyte antigen B27,HLA-B27)血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)的水平,比较HLA-B27、CRP和ESR在AS的阳性率,探讨三者对AS诊断的相关性。结果 HLA-B27、CRP和ESR在AS患者阳性率分别为90.7%、85.1%、72.2%;AS患者和健康对照组HLA-B27、CRP和ESR的水平存在显著性差异,AS患者HLA-B27与CRP和ESR以及CRP和ESR水平呈正相关(r=0.666;r=0.628;r=0.528,P均<0.05)。结论 HLA-B27是对AS诊断有较高灵敏度实验室诊断指标;CRP和ESR尽管不是AS的特异性诊断指标,但对AS的辅助诊断也具有重要价值,三者同时检测提高AS阳性率,有利于AS辅助诊断。

缺血修饰白蛋白在急性心肌缺血及心肌梗死患者中的诊断意义

目的探讨缺血修饰白蛋白(ischemia modified albumin,IMA)在心肌缺血与心肌梗死患者中的变化及其临床意义。方法研究60例心肌缺血患者(心肌缺血组),34例急性心肌梗死患者(心肌梗死组)及52例健康个体(对照组),分别测定IMA、肌钙蛋白I(cTnI)及肌酸激酶同工酶(CK-MB),对结果进行统计学分析。结果健康对照组、心肌缺血组、心肌梗死组,其IMA区间范围分别为(62.0±5.5)ABSU/ml,(78.2±16.6)ABSU/ml,(80.8±20.6)ABSU/ml。心肌缺血组、心肌梗死组其均数区间范围同健康对照组相比,其差别有统计学意义。但心肌缺血和心肌梗死组之间差别无统计学意义。结论IMA是心肌缺血的敏感指标,区分可逆性缺血与梗死的能力较差。

糖尿病检测谷氨酸脱羧酶抗体、胰岛细胞抗体和胰岛素自身抗体的临床意义

探讨血清谷氨酸脱羧酶抗体(GAD-Ab)、胰岛细胞抗体(ICA)和胰岛素自身抗体(IAA)检测对糖尿病(DM)的临床意义。对46例1型糖尿病(DM1)、78例2型糖尿病(DM2)和50名对照组应用增敏化学发光免疫分析法、RIA法检测其血清中GAD-Ab、ICA和IAA的阳性率并进行分组分析。结果表明DM1组GAD-Ab、ICA和IAA阳性率分别为67.39%、39.13%和23.91%,三者联合检测阳性率为91.30%,均显著高于DM2组(P<0.01)及对照组(P<0.01);DM2组GAD-Ab、ICA和IAA阳性率分别为8.97%、15.39%和10.26%,三者联合检测的阳性率为29.49%,也显著高于对照组(P<0.01)。结论是血清GAD-Ab、ICA和IAA的检测对DM的分型、指导临床用药以及判断预后具有重要的临床应用价值。

缺血性脑梗死患者血清高半胱氨酸与小而密低密度脂蛋白胆固醇升高

缺血性脑梗死约占全部脑卒中的70%～80%,多发性脑梗死（multiple cerebral infarction,MCI）在其中所占的比例可达28.9%[1]。MCI预后差、死亡率高,发病1月内死亡率为25%～40%,发生认知障碍比率为42.92%[2]。高半胱氨酸（homocysteine,Hcy）是一种反应性血管损伤性氨基酸,其代谢途径障碍与脑梗死的危险性及严重程度有关。